ERK5- ja PKM2-kinaasien ilmentymisprofiili neuroinflammatorisissa sairauksissa. (NEUROKINASE)

ERK5- ja PKM2-kinaasien ilmentymisen tutkimusta potilailla, joita seurattiin RR MS:n tai GBS:n vuoksi patologian alussa, arvioidaan.

Tavallinen MS- ja GBS-diagnostiikka suoritetaan potilaiden jakamiseksi 4 ryhmään:

• Ryhmä 1: kontrolliryhmä. Potilaat, jotka eivät täytä MS- tai GBS-kriteerejä ja joille ei tehty erotusdiagnoosia.

Alaryhmät 1a ja 1b muodostetaan yhdistämällä vastaavasti ryhmien 2 ja 3 kanssa.

• Ryhmä 2: Macdonald-kriteereillä varmistetut RR-MS-potilaat (2017)
• Ryhmä 3: potilaat, joilla on GBS, jotka on vahvistettu tavanomaisten kliinisten ja sähköfysiologisten oireiden yhdistämisellä.
• Ryhmä 4: potilaat, joille on tunnistettu erotusdiagnoosi oireiden selittämiseksi. Nämä potilaat jätetään analyysin ulkopuolelle.

Kaikilta potilailta otetaan ylimääräinen verinäyte (25 ml) ja aivo-selkäydinneste (CSF) (2 ml) tämän tutkimuksen laboratorioparametrien tutkimiseksi. Perifeerisen veren mononukleaarisolut (PBMC) ja neutrofiilit eristetään verestä käyttämällä Percoll-gradienttia. Ryhmän 4 näytteitä ei analysoida.

Analyysi keskittyy laboratorioparametrien vertailuun ryhmien 2 ja 3 välillä, ryhmien 1a ja 2 sekä 1b ja 3 välillä.

1. / ERK5- ja PKM2-kinaasien ilmentyminen

   Tutkijat haluavat analysoida ERK5:n ja PKM2:n ilmentymistä RT-qPCR:llä transkription tutkimiseksi RNA-tasolla ja Western Blotilla ja ELISA:lla näiden kahden kinaasin fosforyloituneiden ja kokonaismuotojen tutkimiseksi.

   RT-qPCR vaatii RNA:n uuttamisen, käänteistranskription cDNA:ksi ja sitten ERK5:tä ja PKM2:ta koodaavien geenien monistamisen käyttämällä spesifisiä etukäteen suunniteltuja alukkeita. Tuloksia verrataan HPRT-geenin alukkeilla saatuihin tuloksiin.

2. / Tutkimus pro- ja anti-inflammatorisen toiminnan tasapainosta

   Tutkijat haluavat karakterisoida pro- ja anti-inflammatorisen aktiivisuuden tasapainoa tutkimalla lymfosyyttien fenotyyppiä ja määrittämällä sytokiinien tason.

   Lymfosyyttien fenotyypitys suoritetaan virtaussytometrialla PBMC:istä. Tutkitut populaatiot sisältävät Th1-, Th2-, Th9-, Th17-, Th22-, Treg- ja TFH-populaatiot.

   Pääasiassa tulehdussytokiinien paneelia tutkitaan plasmassa ja aivo-selkäydinnesteessä ELISA:lla. Paneeli sisältää seuraavat sytokiinit: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23

3. / Metabolomianalyysi

   Ihmisen metabolomien tietokannat sisältävät yli 40 000 metaboliittia ja mahdollistavat metabolisten profiilien määrittämisen erilaisissa patologisissa yhteyksissä valvotuilla ja valvomattomilla tilastoanalyysitekniikoilla. Aineenvaihduntaanalyysit tehdään plasmasta ja aivo-selkäydinnesteestä. Nämä analyysit suoritetaan nestekromatografialla yhdistettynä massaspektrometriaan (LC-MS) Metabohub-verkon avulla (MetaboHUB-Clermont plasmaanalyyseihin ja MetaboHUB-Saclay CSF-analyyseihin).

4. / Neurofilamentin kevytketjun mitta (NfL)

Kiinnostus neurofilamenttimittaukseen veressä ja erityisesti aivo-selkäydinnesteessä kasvaa. Korkea neurofilamenttitaso on todiste hermosolujen katoamisesta alkuperäisestä mekanismista riippumatta. Neurofilamentin kevytketju (NfL) näyttää olevan olennaisin muoto aksonihäviön mittaamiseen. MS-taudissa NfL:n lisääntymistä havaittiin akuutin uusiutumisen kahden ensimmäisen kuukauden aikana. Sitä vastoin on vain vähän tietoa NfL-tasojen kinetiikasta perifeerisissä demyelinisoivissa sairauksissa.

Tutkijat aikovat tutkia NfL-tasoja veressä ja aivo-selkäydinnesteessä määrittääkseen, onko NfL-taso kohonnut potilailla, joita seurataan GBS:n vuoksi, ja verrata näiden potilaiden NfL-tasoja (ryhmä 3) potilaisiin, joita seurattiin MS-taudin vuoksi (ryhmä 2).