Profil ekspresji kinaz ERK5 i PKM2 w chorobach neurozapalnych. (NEUROKINASE)

Ocenione zostanie badanie ekspresji kinaz ERK5 i PKM2 u pacjentów obserwowanych z powodu RR MS lub GBS na początku patologii.

Zwykła diagnostyka stwardnienia rozsianego i GBS zostanie przeprowadzona w celu zaklasyfikowania pacjentów do 4 grup:

• Grupa 1: grupa kontrolna. Pacjenci, którzy nie spełniają kryteriów SM lub GBS i u których nie wykonano diagnostyki różnicowej.

Podgrupy 1a i 1b zostaną utworzone poprzez odpowiednie sparowanie z grupami 2 i 3.

• Grupa 2: pacjenci z RR SM potwierdzoną kryteriami Macdonalda (2017)
• Grupa 3: pacjenci z GBS potwierdzonym połączeniem typowych objawów klinicznych i elektrofizjologicznych.
• Grupa 4: pacjenci, u których rozpoznanie różnicowe zostało zidentyfikowane w celu wyjaśnienia objawów. Tacy pacjenci zostaną wykluczeni z analizy.

Od wszystkich pacjentów zostanie pobrana dodatkowa próbka krwi (25 ml) i próbka płynu mózgowo-rdzeniowego (2 ml) w celu zbadania parametrów laboratoryjnych tego badania. Komórki jednojądrzaste krwi obwodowej (PBMC) i neutrofile zostaną wyizolowane z krwi przy użyciu gradientu Percoll. Próbki z grupy 4 nie będą analizowane.

Analiza skoncentruje się na porównaniu parametrów laboratoryjnych między grupą 2 a 3, między grupą 1a a 2 oraz między 1b a 3.

1. / Ekspresja kinaz ERK5 i PKM2

   Badacze chcą przeanalizować ekspresję ERK5 i PKM2 metodą RT-qPCR w celu zbadania transkryptomu na poziomie RNA oraz metodą Western Blot i ELISA w celu zbadania fosforylowanych i całkowitych form obu kinaz.

   RT-qPCR wymaga ekstrakcji RNA, odwrotnej transkrypcji do cDNA, a następnie amplifikacji genów kodujących ERK5 i PKM2 przy użyciu określonych wcześniej zaprojektowanych starterów. Wyniki zostaną porównane z wynikami uzyskanymi ze starterami genu HPRT.

2. / Badanie równowagi między działaniem pro- i przeciwzapalnym

   Badacze chcą scharakteryzować równowagę aktywności pro- i przeciwzapalnej, badając fenotypowanie limfocytów i określając poziom cytokin.

   Fenotypowanie limfocytów zostanie przeprowadzone za pomocą cytometrii przepływowej z PBMC. Badane populacje będą obejmowały populacje Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg i TFH.

   Panel składający się głównie z cytokin zapalnych będzie badany w osoczu i płynie mózgowo-rdzeniowym za pomocą testu ELISA. Panel zawiera następujące cytokiny: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23

3. / Analiza metabolomu

   Bazy danych dotyczące ludzkich metabolomów obejmują ponad 40 000 metabolitów i umożliwiają ustalenie profili metabolicznych w różnych kontekstach patologicznych za pomocą nadzorowanych i nienadzorowanych technik analizy statystycznej. Analizy metabolomu zostaną przeprowadzone z osocza i płynu mózgowo-rdzeniowego. Analizy te będą wykonywane metodą chromatografii cieczowej sprzężonej ze spektrometrią mas (LC-MS) przez sieć Metabohub (MetaboHUB-Clermont do analiz osocza i MetaboHUB-Saclay do analiz płynu mózgowo-rdzeniowego).

4. / Pomiar łańcucha lekkiego neurofilamentu (NfL)

Wzrasta zainteresowanie pomiarem neurofilamentów we krwi, aw szczególności w płynie mózgowo-rdzeniowym. Wysoki poziom neurofilamentów świadczy o utracie neuronów, niezależnie od początkowego mechanizmu. Łańcuch lekki neurofilamentu (NfL) wydaje się być najbardziej odpowiednią formą pomiaru utraty aksonów. W stwardnieniu rozsianym zwiększone NfL obserwowano w ciągu pierwszych dwóch miesięcy ostrego nawrotu. I odwrotnie, istnieje niewiele danych na temat kinetyki poziomów NfL w obwodowych chorobach demielinizacyjnych.

Badacze zamierzają zbadać poziomy NfL we krwi i płynie mózgowo-rdzeniowym, aby określić, czy występuje wzrost poziomu NfL u pacjentów obserwowanych z powodu GBS i porównać poziomy NfL tych pacjentów (grupa 3) z pacjentami obserwowanymi z powodu SM (grupa 2).