Ekspresjonsprofil av ERK5- og PKM2-kinaser i nevroinflammatoriske sykdommer. (NEUROKINASE)

Studiet av uttrykket av ERK5- og PKM2-kinaser hos pasienter fulgt for RR MS eller GBS, i begynnelsen av patologien, vil bli evaluert.

Den vanlige diagnostiske undersøkelsen for MS og GBS vil bli utført for å klassifisere pasienter i 4 grupper:

• Gruppe 1: kontrollgruppe. Pasienter som ikke oppfyller kriteriene for MS eller GBS og hvor det ikke ble stilt differensialdiagnose.

Undergruppe 1a og 1b vil bli dannet ved respektive paring med gruppe 2 og 3.

• Gruppe 2: pasienter med RR MS bekreftet av Macdonald-kriterier (2017)
• Gruppe 3: pasienter med GBS bekreftet av assosiasjonen av vanlige kliniske og elektrofysiologiske tegn.
• Gruppe 4 : pasienter som har identifisert en differensialdiagnose for å forklare symptomene. Disse pasientene vil bli ekskludert fra analysen.

En ekstra blodprøve (25 ml) og cerebrospinalvæske (CSF) prøve (2 ml) vil bli tatt fra alle pasienter for å studere laboratorieparametrene til denne studien. Mononukleære celler fra perifert blod (PBMC) og nøytrofiler vil bli isolert fra blodet ved hjelp av en Percoll-gradient. Gruppe 4 prøver vil ikke bli analysert.

Analysen vil fokusere på sammenligning av laboratorieparametre mellom gruppe 2 og 3, mellom gruppe 1a og 2, og mellom 1b og 3.

1. / Ekspresjon av ERK5- og PKM2-kinaser

   Etterforskerne ønsker å analysere uttrykket av ERK5 og PKM2 ved RT-qPCR for å undersøke transkriptomet på RNA-nivå og ved Western Blot og ELISA for å undersøke de fosforylerte og totale formene av de to kinasene.

   RT-qPCR krever RNA-ekstraksjon, revers transkripsjon til cDNA og deretter amplifisering av genene som koder for ERK5 og PKM2 ved bruk av spesifikke primere designet på forhånd. Resultatene vil bli sammenlignet med de oppnådd med primere av HPRT-genet.

2. / Studie av balansen mellom pro og anti-inflammatorisk virkning

   Etterforskerne ønsker å karakterisere balansen mellom pro- og antiinflammatorisk aktivitet ved å studere lymfocytt-fenotyping og bestemme nivået av cytokiner.

   Lymfocytt-fenotyping vil bli utført ved flowcytometri fra PBMC-er. Populasjonene som er studert vil inkludere populasjonene Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg og TFH.

   Panelet med hovedsakelig inflammatoriske cytokiner vil bli studert i plasma og i CSF ved ELISA. Panelet inkluderer følgende cytokiner: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23

3. / Metabolomanalyse

   Databasene over menneskelige metabolomer inkluderer mer enn 40 000 metabolitter og tillater etablering av metabolske profiler i forskjellige patologiske sammenhenger ved hjelp av overvåket og uovervåket statistisk analyseteknikk. Metabolomanalyser vil bli utført fra plasma og CSF. Disse analysene vil bli utført ved væskekromatografi kombinert med massespektrometri (LC-MS) av Metabohub-nettverket (MetaboHUB-Clermont for plasmaanalyser og MetaboHUB-Saclay for CSF-analyser).

4. / Måling av nevrotrådens lettkjede (NfL)

Det er økende interesse for nevrofilaments mål i blodet og spesielt i CSF. Høye nivåer av neurofilamenter er bevis på nevronalt tap, uavhengig av den opprinnelige mekanismen. Neurofilament light chain (NfL) ser ut til å være den mest relevante formen for å måle aksonalt tap. Ved MS ble økt NfL observert i løpet av de første to månedene av akutt tilbakefall. Motsatt er det få data om kinetikken til NfLs nivåer i perifere demyeliniserende sykdommer.

Etterforskerne har til hensikt å studere NfL-nivåer i blod og CSF for å avgjøre om det er en økning i NfL-nivåer hos pasienter som følges for GBS og å sammenligne NfL-nivåer til disse pasientene (gruppe 3) med pasienter fulgt for MS (gruppe 2).