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Perfil de Expressão das Quinases ERK5 e PKM2 em Doenças Neuroinflamatórias. (NEUROKINASE)

20 de janeiro de 2023 atualizado por: Centre Hospitalier Régional d'Orléans

NEUROKINASE: Perfil de Expressão das Quinases ERK5 e PKM2 em Doenças Neuroinflamatórias.

As doenças desmielinizantes representam um amplo espectro de distúrbios e são induzidas por inflamação excessiva, na maioria das vezes desencadeada por um mecanismo autoimune. Algumas dessas patologias são crônicas e afetam o sistema nervoso central, como a esclerose múltipla (EM), outras são monofásicas e atingem o sistema nervoso periférico, como a síndrome de Guillain Barré (SGB).

Nas patologias neuroinflamatórias, a resposta excessiva das linhas de linfócitos pró-inflamatórios Th1 e Th17 e a resposta insuficiente dos linfócitos T reguladores (Treg) causam inflamação excessiva que é deletéria ao tecido nervoso. A regulação dessas vias de sinalização envolve proteínas-chave, como as quinases. A modulação dessas quinases pode permitir o desenvolvimento de novos alvos farmacológicos para a neuroinflamação.

Trabalhos recentes (dados não publicados) mostraram uma associação entre a expressão das quinases ERK5 e PMK2 e a gravidade clínica da encefalomielite alérgica experimental, um modelo de camundongo que imita a esclerose múltipla.

Com o objetivo de buscar novos biomarcadores e aprimorar nosso conhecimento sobre os atores da fase inflamatória inicial das patologias neuroinflamatórias, propomos estudar as diferenças na expressão das quinases ERK5 e PKM2 no sangue e líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes acompanhados por EM remitente-recorrente e GBS por RT-qPCR e quantificação de proteínas. Também pretendemos estudar outros parâmetros biológicos que incluem a caracterização do equilíbrio pró/anti-inflamatório por ensaio de citocinas e fenotipagem de linfócitos, estudo de metaboloma e ensaio de neurofilamento de forma leve (NfL).

Visão geral do estudo

Descrição detalhada

Será avaliado o estudo da expressão das quinases ERK5 e PKM2 em pacientes acompanhados por EM RR ou GBS, no início da patologia.

A investigação diagnóstica usual para EM e GBS será realizada para classificar os pacientes em 4 grupos:

• Grupo 1: grupo de controle. Pacientes que não preenchem os critérios para EM ou GBS e nos quais nenhum diagnóstico diferencial foi feito.

Os subgrupos 1a e 1b serão formados pelos respectivos pareamentos com os grupos 2 e 3.

  • Grupo 2: pacientes com EM RR confirmado pelos critérios de Macdonald (2017)
  • Grupo 3: pacientes com SGB confirmada pela associação dos sinais clínicos e eletrofisiológicos usuais.
  • Grupo 4: pacientes nos quais foi identificado um diagnóstico diferencial para explicar os sintomas. Esses pacientes serão excluídos da análise.

Uma amostra adicional de sangue (25 mL) e amostra de líquido cefalorraquidiano (LCR) (2 mL) será coletada de todos os pacientes para estudar os parâmetros laboratoriais deste estudo. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e neutrófilos serão isolados do sangue usando um gradiente de Percoll. As amostras do Grupo 4 não serão analisadas.

A análise centrar-se-á na comparação de parâmetros laboratoriais entre os grupos 2 e 3, entre os grupos 1a e 2 e entre 1b e 3.

  1. / Expressão de quinases ERK5 e PKM2

    Os pesquisadores desejam analisar a expressão de ERK5 e PKM2 por RT-qPCR para investigar o transcriptoma em nível de RNA e por Western Blot e ELISA para investigar as formas fosforiladas e totais das duas quinases.

    RT-qPCR requer extração de RNA, transcrição reversa em cDNA e, em seguida, amplificação dos genes que codificam ERK5 e PKM2 usando primers específicos projetados previamente. Os resultados serão comparados com aqueles obtidos com primers do gene HPRT.

  2. / Estudo do equilíbrio entre ação pró e anti-inflamatória

    Os pesquisadores desejam caracterizar o equilíbrio da atividade pró e anti-inflamatória estudando a fenotipagem dos linfócitos e determinando o nível de citocinas.

    A fenotipagem de linfócitos será realizada por citometria de fluxo de PBMCs. As populações estudadas incluirão as populações Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg e TFH.

    O painel de citocinas principalmente inflamatórias será estudado no plasma e no LCR por ELISA. O painel inclui as seguintes citocinas: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23

  3. / Análise de metaboloma

    Os bancos de dados de metabolomas humanos incluem mais de 40.000 metabólitos e permitem o estabelecimento de perfis metabólicos em diferentes contextos patológicos por meio de técnicas de análise estatística supervisionadas e não supervisionadas. Análises de metaboloma serão realizadas a partir de plasma e LCR. Estas análises serão realizadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) pela rede Metabohub (MetaboHUB-Clermont para análises de plasma e MetaboHUB-Saclay para análises de LCR).

  4. / Medida da cadeia leve do neurofilamento (NfL)

Há um interesse crescente na medida dos neurofilamentos no sangue e em particular no LCR. Níveis elevados de neurofilamentos são evidências de perda neuronal, independentemente do mecanismo inicial. A cadeia leve de neurofilamento (NfL) parece ser a forma mais relevante para medir a perda axonal. Na EM, o NfL aumentado foi observado durante os primeiros dois meses de recaída aguda. Por outro lado, existem poucos dados sobre a cinética dos níveis de NfL em doenças desmielinizantes periféricas.

Os investigadores pretendem estudar os níveis de NfL no sangue e no LCR para determinar se há um aumento nos níveis de NfL em pacientes acompanhados por GBS e comparar os níveis de NfL desses pacientes (grupo 3) com pacientes acompanhados por EM (grupo 2).

Tipo de estudo

Intervencional

Estágio

  • Não aplicável

Contactos e Locais

Esta seção fornece os detalhes de contato para aqueles que conduzem o estudo e informações sobre onde este estudo está sendo realizado.

Contato de estudo

Locais de estudo

      • Orléans, França, 45067
        • CHR Orleans
        • Investigador principal:
          • Pascal AUZOU, Dr

Critérios de participação

Os pesquisadores procuram pessoas que se encaixem em uma determinada descrição, chamada de critérios de elegibilidade. Alguns exemplos desses critérios são a condição geral de saúde de uma pessoa ou tratamentos anteriores.

Critérios de elegibilidade

Idades elegíveis para estudo

18 anos a 80 anos (Adulto, Adulto mais velho)

Aceita Voluntários Saudáveis

Não

Gêneros Elegíveis para o Estudo

Tudo

Descrição

Critério de inclusão:

  • homem e mulher
  • 18 a 80 anos
  • Sinais clínicos que sugerem EM ou GBS dentro de um mês do início dos sintomas

Critério de exclusão:

  • Paciente tratado com terapia imunossupressora, imunomodulador ou corticoides em tratamento crônico
  • Paciente tratado com corticosteroides no último mês
  • sem segurança social
  • sorologia HIV positiva
  • demência
  • mulher grávida ou amamentando
  • participação anterior no estudo
  • sob proteção judicial
  • paciente não cooperativo

Plano de estudo

Esta seção fornece detalhes do plano de estudo, incluindo como o estudo é projetado e o que o estudo está medindo.

Como o estudo é projetado?

Detalhes do projeto

  • Finalidade Principal: Outro
  • Alocação: N / D
  • Modelo Intervencional: Atribuição de grupo único
  • Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)

Armas e Intervenções

Grupo de Participantes / Braço
Intervenção / Tratamento
Experimental: Pacientes com sinais clínicos que sugerem Esclerose Múltipla (EM) ou Síndrome de Guillain Barré (GBS)
Uma amostra de sangue adicional (25 ml) e uma amostra de líquido cefalorraquidiano (LCR) (2 ml) serão coletadas.

O que o estudo está medindo?

Medidas de resultados primários

Medida de resultado
Descrição da medida
Prazo
Expressão de genes que codificam ERK5 e PKM2 quinases por RT-qPCR
Prazo: Dia 0

A expressão de ERK5 e PKM2 por RT-qPCR será analisada para investigar o transcriptoma em nível de RNA.

RT-qPCR requer extração de RNA, transcrição reversa em cDNA e, em seguida, amplificação dos genes que codificam ERK5 e PKM2 usando primers específicos projetados previamente. Os resultados serão comparados com aqueles obtidos com primers do gene HPRT.

Essas análises são realizadas a partir de linfócitos e neutrófilos isolados da amostra de sangue.

Dia 0

Medidas de resultados secundários

Medida de resultado
Descrição da medida
Prazo
Fenotipagem de Linfócitos
Prazo: Dia 0
A fenotipagem de linfócitos será realizada por citometria de fluxo de PBMCs. Utilizaremos anticorpos contra as populações Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg e TFH.
Dia 0
Níveis de citocinas
Prazo: Dia 0
Um painel de citocinas, principalmente pró-inflamatórias, será estudado no plasma e no LCR por ELISA. O painel inclui as seguintes citocinas: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
Dia 0
Análise de metaboloma
Prazo: Dia 0
Análises de metaboloma serão realizadas a partir de plasma e LCR. Estas análises serão realizadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) pela rede Metabohub (MetaboHUB-Clermont para análises de plasma e MetaboHUB-Saclay para análises de LCR).
Dia 0
Medida da cadeia leve de neurofilamento (NfL)
Prazo: Dia 0
Os níveis de NfL no sangue e no LCR serão estudados para determinar se há aumento nos níveis de NfL em pacientes acompanhados por GBS e para comparar os níveis de NfL desses pacientes com pacientes acompanhados por EM.
Dia 0

Colaboradores e Investigadores

É aqui que você encontrará pessoas e organizações envolvidas com este estudo.

Investigadores

  • Investigador principal: Pascal AUZOU, Dr, CHR Orleans

Publicações e links úteis

A pessoa responsável por inserir informações sobre o estudo fornece voluntariamente essas publicações. Estes podem ser sobre qualquer coisa relacionada ao estudo.

Publicações Gerais

Datas de registro do estudo

Essas datas acompanham o progresso do registro do estudo e os envios de resumo dos resultados para ClinicalTrials.gov. Os registros do estudo e os resultados relatados são revisados ​​pela National Library of Medicine (NLM) para garantir que atendam aos padrões específicos de controle de qualidade antes de serem publicados no site público.

Datas Principais do Estudo

Início do estudo (Antecipado)

1 de janeiro de 2023

Conclusão Primária (Antecipado)

1 de janeiro de 2023

Conclusão do estudo (Antecipado)

1 de janeiro de 2023

Datas de inscrição no estudo

Enviado pela primeira vez

14 de dezembro de 2020

Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ

14 de dezembro de 2020

Primeira postagem (Real)

19 de dezembro de 2020

Atualizações de registro de estudo

Última Atualização Postada (Real)

23 de janeiro de 2023

Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade

20 de janeiro de 2023

Última verificação

1 de janeiro de 2023

Mais Informações

Termos relacionados a este estudo

Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo

Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA

Não

Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA

Não

Essas informações foram obtidas diretamente do site clinicaltrials.gov sem nenhuma alteração. Se você tiver alguma solicitação para alterar, remover ou atualizar os detalhes do seu estudo, entre em contato com register@clinicaltrials.gov. Assim que uma alteração for implementada em clinicaltrials.gov, ela também será atualizada automaticamente em nosso site .

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