- ICH GCP
- Registro de ensaios clínicos dos EUA
- Ensaio Clínico NCT04674163
Perfil de Expressão das Quinases ERK5 e PKM2 em Doenças Neuroinflamatórias. (NEUROKINASE)
NEUROKINASE: Perfil de Expressão das Quinases ERK5 e PKM2 em Doenças Neuroinflamatórias.
As doenças desmielinizantes representam um amplo espectro de distúrbios e são induzidas por inflamação excessiva, na maioria das vezes desencadeada por um mecanismo autoimune. Algumas dessas patologias são crônicas e afetam o sistema nervoso central, como a esclerose múltipla (EM), outras são monofásicas e atingem o sistema nervoso periférico, como a síndrome de Guillain Barré (SGB).
Nas patologias neuroinflamatórias, a resposta excessiva das linhas de linfócitos pró-inflamatórios Th1 e Th17 e a resposta insuficiente dos linfócitos T reguladores (Treg) causam inflamação excessiva que é deletéria ao tecido nervoso. A regulação dessas vias de sinalização envolve proteínas-chave, como as quinases. A modulação dessas quinases pode permitir o desenvolvimento de novos alvos farmacológicos para a neuroinflamação.
Trabalhos recentes (dados não publicados) mostraram uma associação entre a expressão das quinases ERK5 e PMK2 e a gravidade clínica da encefalomielite alérgica experimental, um modelo de camundongo que imita a esclerose múltipla.
Com o objetivo de buscar novos biomarcadores e aprimorar nosso conhecimento sobre os atores da fase inflamatória inicial das patologias neuroinflamatórias, propomos estudar as diferenças na expressão das quinases ERK5 e PKM2 no sangue e líquido cefalorraquidiano (LCR) de pacientes acompanhados por EM remitente-recorrente e GBS por RT-qPCR e quantificação de proteínas. Também pretendemos estudar outros parâmetros biológicos que incluem a caracterização do equilíbrio pró/anti-inflamatório por ensaio de citocinas e fenotipagem de linfócitos, estudo de metaboloma e ensaio de neurofilamento de forma leve (NfL).
Visão geral do estudo
Status
Intervenção / Tratamento
Descrição detalhada
Será avaliado o estudo da expressão das quinases ERK5 e PKM2 em pacientes acompanhados por EM RR ou GBS, no início da patologia.
A investigação diagnóstica usual para EM e GBS será realizada para classificar os pacientes em 4 grupos:
• Grupo 1: grupo de controle. Pacientes que não preenchem os critérios para EM ou GBS e nos quais nenhum diagnóstico diferencial foi feito.
Os subgrupos 1a e 1b serão formados pelos respectivos pareamentos com os grupos 2 e 3.
- Grupo 2: pacientes com EM RR confirmado pelos critérios de Macdonald (2017)
- Grupo 3: pacientes com SGB confirmada pela associação dos sinais clínicos e eletrofisiológicos usuais.
- Grupo 4: pacientes nos quais foi identificado um diagnóstico diferencial para explicar os sintomas. Esses pacientes serão excluídos da análise.
Uma amostra adicional de sangue (25 mL) e amostra de líquido cefalorraquidiano (LCR) (2 mL) será coletada de todos os pacientes para estudar os parâmetros laboratoriais deste estudo. Células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) e neutrófilos serão isolados do sangue usando um gradiente de Percoll. As amostras do Grupo 4 não serão analisadas.
A análise centrar-se-á na comparação de parâmetros laboratoriais entre os grupos 2 e 3, entre os grupos 1a e 2 e entre 1b e 3.
/ Expressão de quinases ERK5 e PKM2
Os pesquisadores desejam analisar a expressão de ERK5 e PKM2 por RT-qPCR para investigar o transcriptoma em nível de RNA e por Western Blot e ELISA para investigar as formas fosforiladas e totais das duas quinases.
RT-qPCR requer extração de RNA, transcrição reversa em cDNA e, em seguida, amplificação dos genes que codificam ERK5 e PKM2 usando primers específicos projetados previamente. Os resultados serão comparados com aqueles obtidos com primers do gene HPRT.
/ Estudo do equilíbrio entre ação pró e anti-inflamatória
Os pesquisadores desejam caracterizar o equilíbrio da atividade pró e anti-inflamatória estudando a fenotipagem dos linfócitos e determinando o nível de citocinas.
A fenotipagem de linfócitos será realizada por citometria de fluxo de PBMCs. As populações estudadas incluirão as populações Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg e TFH.
O painel de citocinas principalmente inflamatórias será estudado no plasma e no LCR por ELISA. O painel inclui as seguintes citocinas: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
/ Análise de metaboloma
Os bancos de dados de metabolomas humanos incluem mais de 40.000 metabólitos e permitem o estabelecimento de perfis metabólicos em diferentes contextos patológicos por meio de técnicas de análise estatística supervisionadas e não supervisionadas. Análises de metaboloma serão realizadas a partir de plasma e LCR. Estas análises serão realizadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) pela rede Metabohub (MetaboHUB-Clermont para análises de plasma e MetaboHUB-Saclay para análises de LCR).
- / Medida da cadeia leve do neurofilamento (NfL)
Há um interesse crescente na medida dos neurofilamentos no sangue e em particular no LCR. Níveis elevados de neurofilamentos são evidências de perda neuronal, independentemente do mecanismo inicial. A cadeia leve de neurofilamento (NfL) parece ser a forma mais relevante para medir a perda axonal. Na EM, o NfL aumentado foi observado durante os primeiros dois meses de recaída aguda. Por outro lado, existem poucos dados sobre a cinética dos níveis de NfL em doenças desmielinizantes periféricas.
Os investigadores pretendem estudar os níveis de NfL no sangue e no LCR para determinar se há um aumento nos níveis de NfL em pacientes acompanhados por GBS e comparar os níveis de NfL desses pacientes (grupo 3) com pacientes acompanhados por EM (grupo 2).
Tipo de estudo
Estágio
- Não aplicável
Contactos e Locais
Contato de estudo
- Nome: Elodie POUGOUE TOUKO
- Número de telefone: +33238744086
- E-mail: elodie.pougoue-touko@chr-orleans.fr
Locais de estudo
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Orléans, França, 45067
- CHR Orleans
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Investigador principal:
- Pascal AUZOU, Dr
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Critérios de participação
Critérios de elegibilidade
Idades elegíveis para estudo
Aceita Voluntários Saudáveis
Gêneros Elegíveis para o Estudo
Descrição
Critério de inclusão:
- homem e mulher
- 18 a 80 anos
- Sinais clínicos que sugerem EM ou GBS dentro de um mês do início dos sintomas
Critério de exclusão:
- Paciente tratado com terapia imunossupressora, imunomodulador ou corticoides em tratamento crônico
- Paciente tratado com corticosteroides no último mês
- sem segurança social
- sorologia HIV positiva
- demência
- mulher grávida ou amamentando
- participação anterior no estudo
- sob proteção judicial
- paciente não cooperativo
Plano de estudo
Como o estudo é projetado?
Detalhes do projeto
- Finalidade Principal: Outro
- Alocação: N / D
- Modelo Intervencional: Atribuição de grupo único
- Mascaramento: Nenhum (rótulo aberto)
Armas e Intervenções
Grupo de Participantes / Braço |
Intervenção / Tratamento |
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Experimental: Pacientes com sinais clínicos que sugerem Esclerose Múltipla (EM) ou Síndrome de Guillain Barré (GBS)
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Uma amostra de sangue adicional (25 ml) e uma amostra de líquido cefalorraquidiano (LCR) (2 ml) serão coletadas.
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O que o estudo está medindo?
Medidas de resultados primários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Expressão de genes que codificam ERK5 e PKM2 quinases por RT-qPCR
Prazo: Dia 0
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A expressão de ERK5 e PKM2 por RT-qPCR será analisada para investigar o transcriptoma em nível de RNA. RT-qPCR requer extração de RNA, transcrição reversa em cDNA e, em seguida, amplificação dos genes que codificam ERK5 e PKM2 usando primers específicos projetados previamente. Os resultados serão comparados com aqueles obtidos com primers do gene HPRT. Essas análises são realizadas a partir de linfócitos e neutrófilos isolados da amostra de sangue. |
Dia 0
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Medidas de resultados secundários
Medida de resultado |
Descrição da medida |
Prazo |
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Fenotipagem de Linfócitos
Prazo: Dia 0
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A fenotipagem de linfócitos será realizada por citometria de fluxo de PBMCs.
Utilizaremos anticorpos contra as populações Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg e TFH.
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Dia 0
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Níveis de citocinas
Prazo: Dia 0
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Um painel de citocinas, principalmente pró-inflamatórias, será estudado no plasma e no LCR por ELISA.
O painel inclui as seguintes citocinas: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
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Dia 0
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Análise de metaboloma
Prazo: Dia 0
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Análises de metaboloma serão realizadas a partir de plasma e LCR.
Estas análises serão realizadas por cromatografia líquida acoplada à espectrometria de massas (LC-MS) pela rede Metabohub (MetaboHUB-Clermont para análises de plasma e MetaboHUB-Saclay para análises de LCR).
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Dia 0
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Medida da cadeia leve de neurofilamento (NfL)
Prazo: Dia 0
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Os níveis de NfL no sangue e no LCR serão estudados para determinar se há aumento nos níveis de NfL em pacientes acompanhados por GBS e para comparar os níveis de NfL desses pacientes com pacientes acompanhados por EM.
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Dia 0
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Colaboradores e Investigadores
Patrocinador
Investigadores
- Investigador principal: Pascal AUZOU, Dr, CHR Orleans
Publicações e links úteis
Publicações Gerais
- Thompson AJ, Banwell BL, Barkhof F, Carroll WM, Coetzee T, Comi G, Correale J, Fazekas F, Filippi M, Freedman MS, Fujihara K, Galetta SL, Hartung HP, Kappos L, Lublin FD, Marrie RA, Miller AE, Miller DH, Montalban X, Mowry EM, Sorensen PS, Tintore M, Traboulsee AL, Trojano M, Uitdehaag BMJ, Vukusic S, Waubant E, Weinshenker BG, Reingold SC, Cohen JA. Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria. Lancet Neurol. 2018 Feb;17(2):162-173. doi: 10.1016/S1474-4422(17)30470-2. Epub 2017 Dec 21.
- Gaetani L, Salvadori N, Lisetti V, Eusebi P, Mancini A, Gentili L, Borrelli A, Portaccio E, Sarchielli P, Blennow K, Zetterberg H, Parnetti L, Calabresi P, Di Filippo M. Cerebrospinal fluid neurofilament light chain tracks cognitive impairment in multiple sclerosis. J Neurol. 2019 Sep;266(9):2157-2163. doi: 10.1007/s00415-019-09398-7. Epub 2019 May 25.
- Kuhle J, Plattner K, Bestwick JP, Lindberg RL, Ramagopalan SV, Norgren N, Nissim A, Malaspina A, Leppert D, Giovannoni G, Kappos L. A comparative study of CSF neurofilament light and heavy chain protein in MS. Mult Scler. 2013 Oct;19(12):1597-603. doi: 10.1177/1352458513482374. Epub 2013 Mar 25.
- Kamil K, Yazid MD, Idrus RBH, Das S, Kumar J. Peripheral Demyelinating Diseases: From Biology to Translational Medicine. Front Neurol. 2019 Mar 19;10:87. doi: 10.3389/fneur.2019.00087. eCollection 2019.
- Khalil M, Teunissen CE, Otto M, Piehl F, Sormani MP, Gattringer T, Barro C, Kappos L, Comabella M, Fazekas F, Petzold A, Blennow K, Zetterberg H, Kuhle J. Neurofilaments as biomarkers in neurological disorders. Nat Rev Neurol. 2018 Oct;14(10):577-589. doi: 10.1038/s41582-018-0058-z.
- Rostami A, Ciric B. Role of Th17 cells in the pathogenesis of CNS inflammatory demyelination. J Neurol Sci. 2013 Oct 15;333(1-2):76-87. doi: 10.1016/j.jns.2013.03.002. Epub 2013 Apr 8.
- Venken K, Hellings N, Thewissen M, Somers V, Hensen K, Rummens JL, Medaer R, Hupperts R, Stinissen P. Compromised CD4+ CD25(high) regulatory T-cell function in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis is correlated with a reduced frequency of FOXP3-positive cells and reduced FOXP3 expression at the single-cell level. Immunology. 2008 Jan;123(1):79-89. doi: 10.1111/j.1365-2567.2007.02690.x. Epub 2007 Sep 25.
- Yuan A, Rao MV, Veeranna, Nixon RA. Neurofilaments and Neurofilament Proteins in Health and Disease. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2017 Apr 3;9(4):a018309. doi: 10.1101/cshperspect.a018309.
Datas de registro do estudo
Datas Principais do Estudo
Início do estudo (Antecipado)
Conclusão Primária (Antecipado)
Conclusão do estudo (Antecipado)
Datas de inscrição no estudo
Enviado pela primeira vez
Enviado pela primeira vez que atendeu aos critérios de CQ
Primeira postagem (Real)
Atualizações de registro de estudo
Última Atualização Postada (Real)
Última atualização enviada que atendeu aos critérios de controle de qualidade
Última verificação
Mais Informações
Termos relacionados a este estudo
Palavras-chave
Termos MeSH relevantes adicionais
- Processos Patológicos
- Doenças do Sistema Nervoso
- Doenças do sistema imunológico
- Doenças Autoimunes Desmielinizantes, SNC
- Doenças Autoimunes do Sistema Nervoso
- Doenças Desmielinizantes
- Doenças autoimunes
- Doenças Neuromusculares
- Doenças do Sistema Nervoso Periférico
- Polirradiculoneuropatia
- Polineuropatias
- Esclerose múltipla
- Inflamação
- A síndrome de Guillain-Barré
Outros números de identificação do estudo
- CHRO-2018-07
Informações sobre medicamentos e dispositivos, documentos de estudo
Estuda um medicamento regulamentado pela FDA dos EUA
Estuda um produto de dispositivo regulamentado pela FDA dos EUA
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