Profil d'expression des kinases ERK5 et PKM2 dans les maladies neuroinflammatoires. (NEUROKINASE)
NEUROKINASE : Profil d'expression des kinases ERK5 et PKM2 dans les maladies neuroinflammatoires.
Les maladies démyélinisantes représentent un large spectre de troubles et sont induites par une inflammation excessive déclenchée le plus souvent par un mécanisme auto-immun. Certaines de ces pathologies sont chroniques et touchent le système nerveux central comme la sclérose en plaques (SEP), d'autres sont monophasiques et ciblent le système nerveux périphérique comme le syndrome de Guillain Barré (SGB).
Dans les pathologies neuro-inflammatoires, la réponse excessive des lignées lymphocytaires pro-inflammatoires Th1 et Th17 et la réponse insuffisante des lymphocytes T régulateurs (Treg) provoquent une inflammation excessive, délétère pour le tissu nerveux. La régulation de ces voies de signalisation implique des protéines clés telles que les kinases. Modulation de ces kinases qui pourrait permettre le développement de nouvelles cibles pharmacologiques pour la neuroinflammation.
Des travaux récents (données non publiées) ont montré une association entre l'expression des kinases ERK5 et PMK2, et la sévérité clinique de l'encéphalomyélite allergique expérimentale, un modèle murin qui mime la sclérose en plaques.
Afin de rechercher de nouveaux biomarqueurs et d'améliorer notre connaissance des acteurs de la phase inflammatoire initiale des pathologies neuro-inflammatoires, nous proposons d'étudier les différences d'expression des kinases ERK5 et PKM2 dans le sang et le liquide céphalo-rachidien (LCR) de patients suivis pendant SEP récurrente-rémittente et GBS par RT-qPCR et quantification des protéines. Nous souhaitons également étudier d'autres paramètres biologiques dont la caractérisation de la balance pro/anti-inflammatoire par dosage des cytokines et phénotypage lymphocytaire, étude du métabolome, et dosage des neurofilaments de forme douce (NfL).
Aperçu de l'étude
Statut
Les conditions
Intervention / Traitement
Description détaillée
L'étude de l'expression des kinases ERK5 et PKM2 chez des patients suivis pour SEP RR ou SGB, au début de la pathologie, sera évaluée.
Le bilan diagnostique usuel de la SEP et du SGB sera réalisé afin de classer les patients en 4 groupes :
• Groupe 1 : groupe témoin. Patients qui ne remplissent pas les critères de SEP ou de SGB et chez qui aucun diagnostic différentiel n'a été posé.
Les sous-groupes 1a et 1b seront formés par appariement respectif avec les groupes 2 et 3.
- Groupe 2 : patients atteints de SEP RR confirmés selon les critères de Macdonald (2017)
- Groupe 3 : patients avec SGB confirmés par l'association des signes cliniques et électrophysiologiques habituels.
- Groupe 4 : patients chez qui un diagnostic différentiel a été identifié pour expliquer les symptômes. Ces patients seront exclus de l'analyse.
Un échantillon de sang supplémentaire (25 mL) et un échantillon de liquide céphalo-rachidien (LCR) (2 mL) seront prélevés chez tous les patients afin d'étudier les paramètres de laboratoire de cette étude. Les cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC) et les neutrophiles seront isolés du sang à l'aide d'un gradient de Percoll. Les échantillons du groupe 4 ne seront pas analysés.
L'analyse portera sur la comparaison des paramètres de laboratoire entre les groupes 2 et 3, entre les groupes 1a et 2, et entre 1b et 3.
/ Expression des kinases ERK5 et PKM2
Les chercheurs souhaitent analyser l'expression de ERK5 et PKM2 par RT-qPCR pour étudier le transcriptome au niveau de l'ARN et par Western Blot et ELISA pour étudier les formes phosphorylées et totales des deux kinases.
La RT-qPCR nécessite une extraction d'ARN, une transcription inverse en ADNc puis une amplification des gènes codant pour ERK5 et PKM2 à l'aide d'amorces spécifiques conçues au préalable. Les résultats seront comparés à ceux obtenus avec des amorces du gène HPRT.
/ Etude de l'équilibre entre action pro et anti-inflammatoire
Les chercheurs souhaitent caractériser l'équilibre de l'activité pro et anti-inflammatoire en étudiant le phénotypage des lymphocytes et en déterminant le niveau de cytokines.
Le phénotypage lymphocytaire sera réalisé par cytométrie en flux à partir de PBMC. Les populations étudiées comprendront les populations Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg et TFH.
Le panel de cytokines majoritairement inflammatoires sera étudié dans le plasma et dans le LCR par ELISA. Le panel comprend les cytokines suivantes : IL17, TNF, IL6, IL 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
/ Analyse du métabolome
Les bases de données sur les métabolomes humains comprennent plus de 40 000 métabolites et permettent l'établissement de profils métaboliques dans différents contextes pathologiques par des techniques d'analyses statistiques supervisées et non supervisées. Des analyses de métabolome seront effectuées à partir du plasma et du LCR. Ces analyses seront réalisées par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) par le réseau Metabohub (MetaboHUB-Clermont pour les analyses plasma et MetaboHUB-Saclay pour les analyses LCR).
- / Mesure de la chaîne légère des neurofilaments (NfL)
Il existe un intérêt croissant pour la mesure des neurofilaments dans le sang et en particulier dans le LCR. Des niveaux élevés de neurofilaments sont la preuve d'une perte neuronale, quel que soit le mécanisme initial. La chaîne légère des neurofilaments (NfL) semble être la forme la plus pertinente pour mesurer la perte axonale. Dans la SEP, une augmentation de la NfL a été observée au cours des deux premiers mois de rechute aiguë. A l'inverse, il existe peu de données sur la cinétique des taux de NfL dans les maladies démyélinisantes périphériques.
Les chercheurs ont l'intention d'étudier les niveaux de NfL dans le sang et le LCR pour déterminer s'il y a une augmentation des niveaux de NfL chez les patients suivis pour le SGB et de comparer les niveaux de NfL de ces patients (groupe 3) avec les patients suivis pour la SEP (groupe 2).
Type d'étude
Phase
- N'est pas applicable
Contacts et emplacements
Lieux d'étude
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Orléans, France, 45067
- CHR Orléans
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Critères de participation
Critère d'éligibilité
Âges éligibles pour étudier
Accepte les volontaires sains
Sexes éligibles pour l'étude
La description
Critère d'intégration:
- Homme et femme
- 18 à 80 ans
- Signes cliniques suggérant une SEP ou un SGB dans le mois suivant l'apparition des symptômes
Critère d'exclusion:
- Patient traité par thérapie immunosuppressive, immunomodulateur ou corticoïdes en traitement chronique
- Patient traité par corticoïdes au cours du mois précédent
- sans sécurité sociale
- Sérologie VIH positive
- démence
- femme enceinte ou allaitante
- participation antérieure à l'étude
- sous protection judiciaire
- patient non coopératif
Plan d'étude
Comment l'étude est-elle conçue ?
Détails de conception
- Objectif principal: Autre
- Répartition: N / A
- Modèle interventionnel: Affectation à un seul groupe
- Masquage: Aucun (étiquette ouverte)
Armes et Interventions
Groupe de participants / Bras |
Intervention / Traitement |
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Expérimental: Patients présentant des signes cliniques suggérant une sclérose en plaques (SEP) ou un syndrome de Guillain Barré (SGB)
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Un échantillon de sang supplémentaire (25 ml) et un échantillon de liquide céphalo-rachidien (LCR) (2 ml) seront prélevés.
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Que mesure l'étude ?
Principaux critères de jugement
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Expression des gènes codant pour les kinases ERK5 et PKM2 par RT-qPCR
Délai: Jour 0
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L'expression de ERK5 et PKM2 par RT-qPCR sera analysée pour étudier le transcriptome au niveau de l'ARN. La RT-qPCR nécessite une extraction d'ARN, une transcription inverse en ADNc puis une amplification des gènes codant pour ERK5 et PKM2 à l'aide d'amorces spécifiques conçues au préalable. Les résultats seront comparés à ceux obtenus avec des amorces du gène HPRT. Ces analyses sont réalisées à partir de lymphocytes et de neutrophiles isolés de l'échantillon sanguin. |
Jour 0
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Mesures de résultats secondaires
Mesure des résultats |
Description de la mesure |
Délai |
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Phénotypage lymphocytaire
Délai: Jour 0
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Le phénotypage lymphocytaire sera réalisé par cytométrie en flux à partir de PBMC.
Nous utiliserons des anticorps contre les populations Th1, Th2, Th9, Th17, Th22, Treg et TFH.
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Jour 0
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Niveaux de cytokines
Délai: Jour 0
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Un panel de cytokines, principalement pro-inflammatoires, sera étudié dans le plasma et dans le LCR par ELISA.
Le panel comprend les cytokines suivantes : IL17, TNF, IL6, IL 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23
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Jour 0
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Analyse du métabolome
Délai: Jour 0
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Des analyses de métabolome seront effectuées à partir du plasma et du LCR.
Ces analyses seront réalisées par chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse (LC-MS) par le réseau Metabohub (MetaboHUB-Clermont pour les analyses plasma et MetaboHUB-Saclay pour les analyses LCR).
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Jour 0
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Mesure de la chaîne légère des neurofilaments (NfL)
Délai: Jour 0
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Les niveaux de NfL dans le sang et le LCR seront étudiés pour déterminer s'il y a une augmentation des niveaux de NfL chez les patients suivis pour le SGB et pour comparer les niveaux de NfL de ces patients avec ceux des patients suivis pour la SEP.
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Jour 0
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Collaborateurs et enquêteurs
Parrainer
Les enquêteurs
- Chercheur principal: Pascal AUZOU, Dr, CHR Orléans
Publications et liens utiles
Publications générales
- Thompson AJ, Banwell BL, Barkhof F, Carroll WM, Coetzee T, Comi G, Correale J, Fazekas F, Filippi M, Freedman MS, Fujihara K, Galetta SL, Hartung HP, Kappos L, Lublin FD, Marrie RA, Miller AE, Miller DH, Montalban X, Mowry EM, Sorensen PS, Tintore M, Traboulsee AL, Trojano M, Uitdehaag BMJ, Vukusic S, Waubant E, Weinshenker BG, Reingold SC, Cohen JA. Diagnosis of multiple sclerosis: 2017 revisions of the McDonald criteria. Lancet Neurol. 2018 Feb;17(2):162-173. doi: 10.1016/S1474-4422(17)30470-2. Epub 2017 Dec 21.
- Gaetani L, Salvadori N, Lisetti V, Eusebi P, Mancini A, Gentili L, Borrelli A, Portaccio E, Sarchielli P, Blennow K, Zetterberg H, Parnetti L, Calabresi P, Di Filippo M. Cerebrospinal fluid neurofilament light chain tracks cognitive impairment in multiple sclerosis. J Neurol. 2019 Sep;266(9):2157-2163. doi: 10.1007/s00415-019-09398-7. Epub 2019 May 25.
- Kuhle J, Plattner K, Bestwick JP, Lindberg RL, Ramagopalan SV, Norgren N, Nissim A, Malaspina A, Leppert D, Giovannoni G, Kappos L. A comparative study of CSF neurofilament light and heavy chain protein in MS. Mult Scler. 2013 Oct;19(12):1597-603. doi: 10.1177/1352458513482374. Epub 2013 Mar 25.
- Kamil K, Yazid MD, Idrus RBH, Das S, Kumar J. Peripheral Demyelinating Diseases: From Biology to Translational Medicine. Front Neurol. 2019 Mar 19;10:87. doi: 10.3389/fneur.2019.00087. eCollection 2019.
- Khalil M, Teunissen CE, Otto M, Piehl F, Sormani MP, Gattringer T, Barro C, Kappos L, Comabella M, Fazekas F, Petzold A, Blennow K, Zetterberg H, Kuhle J. Neurofilaments as biomarkers in neurological disorders. Nat Rev Neurol. 2018 Oct;14(10):577-589. doi: 10.1038/s41582-018-0058-z.
- Rostami A, Ciric B. Role of Th17 cells in the pathogenesis of CNS inflammatory demyelination. J Neurol Sci. 2013 Oct 15;333(1-2):76-87. doi: 10.1016/j.jns.2013.03.002. Epub 2013 Apr 8.
- Venken K, Hellings N, Thewissen M, Somers V, Hensen K, Rummens JL, Medaer R, Hupperts R, Stinissen P. Compromised CD4+ CD25(high) regulatory T-cell function in patients with relapsing-remitting multiple sclerosis is correlated with a reduced frequency of FOXP3-positive cells and reduced FOXP3 expression at the single-cell level. Immunology. 2008 Jan;123(1):79-89. doi: 10.1111/j.1365-2567.2007.02690.x. Epub 2007 Sep 25.
- Yuan A, Rao MV, Veeranna, Nixon RA. Neurofilaments and Neurofilament Proteins in Health and Disease. Cold Spring Harb Perspect Biol. 2017 Apr 3;9(4):a018309. doi: 10.1101/cshperspect.a018309.
Dates d'enregistrement des études
Dates principales de l'étude
Début de l'étude (Anticipé)
Achèvement primaire (Anticipé)
Achèvement de l'étude (Anticipé)
Dates d'inscription aux études
Première soumission
Première soumission répondant aux critères de contrôle qualité
Première publication (Réel)
Mises à jour des dossiers d'étude
Dernière mise à jour publiée (Réel)
Dernière mise à jour soumise répondant aux critères de contrôle qualité
Dernière vérification
Plus d'information
Termes liés à cette étude
Mots clés
Termes MeSH pertinents supplémentaires
- Processus pathologiques
- Maladies du système nerveux
- Maladies du système immunitaire
- Maladies auto-immunes démyélinisantes, SNC
- Maladies auto-immunes du système nerveux
- Maladies démyélinisantes
- Maladies auto-immunes
- Maladies neuromusculaires
- Maladies du système nerveux périphérique
- Polyradiculonévrite
- Polyneuropathies
- Sclérose en plaques
- Inflammation
- Le syndrome de Guillain Barre
Autres numéros d'identification d'étude
- CHRO-2018-07
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Étudie un produit pharmaceutique réglementé par la FDA américaine
Étudie un produit d'appareil réglementé par la FDA américaine
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