Expressieprofiel van ERK5- en PKM2-kinasen bij neuro-inflammatoire ziekten. (NEUROKINASE)

De studie van de expressie van ERK5- en PKM2-kinases bij patiënten gevolgd voor RR MS of GBS, aan het begin van de pathologie, zal geëvalueerd worden.

De gebruikelijke diagnostische opwerking voor MS en GBS zal worden uitgevoerd om patiënten in 4 groepen in te delen:

• Groep 1 : controlegroep. Patiënten die niet voldoen aan de criteria voor MS of GBS en bij wie geen differentiële diagnose werd gesteld.

Subgroepen 1a en 1b worden gevormd door respectieve paren met groepen 2 en 3.

• Groep 2: patiënten met RR MS bevestigd door Macdonald-criteria (2017)
• Groep 3: patiënten met GBS bevestigd door de associatie van de gebruikelijke klinische en elektrofysiologische symptomen.
• Groep 4: patiënten bij wie een differentiële diagnose is vastgesteld om de symptomen te verklaren. Deze patiënten worden uitgesloten van de analyse.

Een extra bloedmonster (25 ml) en cerebrospinale vloeistof (CSF) monster (2 ml) zullen van alle patiënten worden genomen om de laboratoriumparameters van deze studie te bestuderen. Perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC's) en neutrofielen zullen uit het bloed worden geïsoleerd met behulp van een Percoll-gradiënt. Monsters van groep 4 worden niet geanalyseerd.

De analyse zal zich toespitsen op de vergelijking van laboratoriumparameters tussen groep 2 en 3, tussen groep 1a en 2, en tussen 1b en 3.

1. / Expressie van ERK5- en PKM2-kinasen

   De onderzoekers willen de expressie van ERK5 en PKM2 analyseren met RT-qPCR om het transcriptoom op RNA-niveau te onderzoeken en met Western Blot en ELISA om de gefosforyleerde en totale vormen van de twee kinasen te onderzoeken.

   RT-qPCR vereist RNA-extractie, reverse transcriptie in cDNA en vervolgens amplificatie van de genen die coderen voor ERK5 en PKM2 met behulp van vooraf ontworpen primers. De resultaten zullen worden vergeleken met die verkregen met primers van het HPRT-gen.

2. / Studie van de balans tussen pro- en ontstekingsremmende werking

   De onderzoekers willen de balans van pro- en anti-inflammatoire activiteit karakteriseren door de fenotypering van lymfocyten te bestuderen en het niveau van cytokines te bepalen.

   Fenotypering van lymfocyten zal worden uitgevoerd door middel van flowcytometrie van PBMC's. De bestudeerde populaties omvatten de Th1-, Th2-, Th9-, Th17-, Th22-, Treg- en TFH-populaties.

   Het panel van voornamelijk inflammatoire cytokines zal bestudeerd worden in plasma en in CSF door middel van ELISA. Het panel bevat de volgende cytokines: IL17, TNF, IL6, Il 1β, IL 10, IL33, IL12, IL 23

3. / Metabolome-analyse

   De databases over menselijke metabolomen omvatten meer dan 40.000 metabolieten en maken het mogelijk om metabolische profielen in verschillende pathologische contexten op te stellen door middel van statistische analysetechnieken onder toezicht en zonder toezicht. Er zullen metaboloomanalyses worden uitgevoerd van plasma en CSF. Deze analyses zullen worden uitgevoerd door middel van vloeistofchromatografie gekoppeld aan massaspectrometrie (LC-MS) door het Metabohub-netwerk (MetaboHUB-Clermont voor plasma-analyses en MetaboHUB-Saclay voor CSF-analyses).

4. / Meting van de lichte keten van neurofilamenten (NfL)

Er is een groeiende belangstelling voor de meting van neurofilament in het bloed en in het bijzonder in de CSF. Hoge niveaus van neurofilamenten zijn bewijs van neuronaal verlies, ongeacht het initiële mechanisme. Neurofilament lichte keten (NfL) lijkt de meest relevante vorm om axonaal verlies te meten. Bij MS werd tijdens de eerste twee maanden van acute terugval een verhoogde NfL waargenomen. Omgekeerd zijn er weinig gegevens over de kinetiek van de niveaus van NfL bij perifere demyeliniserende ziekten.

De onderzoekers zijn van plan NfL-waarden in bloed en CSF te bestuderen om te bepalen of er een toename is in NfL-waarden bij patiënten die worden gevolgd voor GBS en om NfL-waarden van deze patiënten (groep 3) te vergelijken met patiënten die worden gevolgd voor MS (groep 2).