Interés de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en tiempo real en el diagnóstico de infecciones fúngicas

Las infecciones fúngicas invasivas son una causa importante de morbilidad y mortalidad en pacientes inmunocomprometidos. Entre ellos, los pacientes con neoplasias hematológicas, pacientes neutropénicos, pacientes infectados por el virus de la inmunodeficiencia humana, diabéticos, pacientes con trasplante de órganos sólidos y pacientes ingresados ​​en una unidad de cuidados intensivos tienen un riesgo particularmente alto.

La supervivencia de estos pacientes depende de un diagnóstico precoz y de un tratamiento antifúngico oportuno y adecuado. El diagnóstico precoz de estas infecciones es difícil debido a la falta de métodos de prueba sensibles, en particular los hemocultivos. Su sensibilidad es pobre o cercana a cero para la aspergilosis. Además, el tiempo de respuesta es de varios días. Por estas razones, decidimos desarrollar un ensayo de PCR (reacción en cadena de la polimerasa) en tiempo real en muestras de sangre. Debería permitir una respuesta rápida para establecer un diagnóstico positivo o negativo de infección fúngica invasiva, podría contribuir fuertemente a la decisión de tratar con antifúngicos y debería monitorear la eficacia y la optimización de las prescripciones de antifúngicos.

Métodos:

Nuestro proyecto es un trabajo de colaboración interregional prospectivo multicéntrico entre los laboratorios micológicos y parasitológicos de Niza, Rennes y Toulouse. Nuestros objetivos son: En primer lugar, validar un método de extracción a partir de sangre infectada por especies de hongos. Los tres laboratorios trabajarán juntos para determinar el mejor método de extracción, ya que no existe un método de consenso para la extracción de ácidos nucleicos de origen fúngico en el contexto de infecciones humanas. Las numerosas técnicas de extracción ya utilizadas dan lugar a diferencias en los resultados de la PCR. Como consecuencia, las comparaciones entre laboratorios no son fáciles. En segundo lugar, nuestro objetivo es desarrollar tres ensayos de PCR en tiempo real: un ensayo de PCR en tiempo real panfúngico capaz de detectar la mayoría de las especies fúngicas responsables de enfermedades humanas; un ensayo de PCR en tiempo real dirigido a Candida albicans y otro dirigido a Aspergillus fumigatus, que son dos patógenos clínicamente importantes. Luego, se recolectarán muestras de sangre de los pacientes (clasificadas según el consenso de la EORTC) durante el estudio para evaluar y validar nuestro método en muestras clínicas. Los resultados nos permitirán determinar la sensibilidad, especificidad y reproducibilidad, valores negativos y predictivos.

Objetivos En general, nuestro trabajo tiene como objetivo evaluar el impacto clínico de la PCR en tiempo real en el diagnóstico precoz de infecciones fúngicas invasivas y en el inicio o suspensión de la terapia antifúngica. Se evaluará el impacto económico resultante del uso de este método. De hecho, un excelente valor predictivo negativo de un ensayo de PCR en tiempo real panfúngico podría justificar una disminución en el uso de la terapia antifúngica empírica