Interesse della reazione a catena della polimerasi in tempo reale (PCR) nella diagnosi delle infezioni fungine

Le infezioni fungine invasive sono una delle principali cause di morbilità e mortalità nei pazienti immunocompromessi. Tra questi, i pazienti con neoplasie ematologiche, i pazienti neutropenici, i pazienti con infezione da virus dell'immunodeficienza umana, i diabetici, i pazienti trapiantati di organi solidi ei pazienti ricoverati in un'unità di terapia intensiva sono particolarmente a rischio.

La sopravvivenza di questi pazienti dipende dalla diagnosi precoce e dal tempestivo trattamento antifungino appropriato. La diagnosi precoce di queste infezioni è difficile a causa della mancanza di metodi di test sensibili, in particolare emocolture. La sua sensibilità è scarsa o prossima allo zero per l'aspergillosi. Inoltre, il tempo di risposta è di diversi giorni. Per questi motivi, abbiamo deciso di sviluppare un test PCR (Polymerase Chain Reaction) in tempo reale su campioni di sangue. Dovrebbe consentire una risposta rapida per stabilire una diagnosi positiva o negativa di infezione fungina invasiva, potrebbe contribuire fortemente alla decisione di trattare con antimicotici e dovrebbe monitorare l'efficacia e l'ottimizzazione delle prescrizioni antimicotiche.

Metodi:

Il nostro progetto è un lavoro di collaborazione interregionale prospettico multicentrico tra Nizza, Rennes e Tolosa Laboratori micologici e parassitologici. I nostri obiettivi sono: In primo luogo, convalidare un metodo di estrazione dal sangue infetto da specie fungine. I tre laboratori lavoreranno insieme per determinare il miglior metodo di estrazione, poiché non esiste un metodo di consenso per l'estrazione di acidi nucleici di origine fungina nel contesto delle infezioni umane. Le numerose tecniche di estrazione già utilizzate portano a differenze nei risultati della PCR. Di conseguenza, i confronti interlaboratorio non sono facili. In secondo luogo, miriamo a sviluppare tre test PCR in tempo reale: un test PCR in tempo reale per panfungini in grado di rilevare la maggior parte delle specie fungine responsabili di malattie umane; un test PCR in tempo reale mirato alla Candida albicans e uno mirato all'Aspergillus fumigatus, che sono due patogeni clinicamente importanti. Quindi i campioni di sangue dei pazienti (classificati secondo il consenso EORTC) saranno raccolti durante lo studio per valutare e validare il nostro metodo su campioni clinici. I risultati ci permetteranno di determinare la sensibilità, la specificità e la riproducibilità, i valori negativi e predittivi.

Obiettivi Nel complesso, il nostro lavoro mira a valutare l'impatto clinico della PCR in tempo reale nella diagnosi precoce delle infezioni fungine invasive e sull'inizio o l'interruzione della terapia antimicotica. Sarà valutato l'impatto economico derivante dall'utilizzo di tale metodo. In effetti, un eccellente valore predittivo negativo di un test PCR panfungino in tempo reale potrebbe giustificare una diminuzione dell'uso della terapia antifungina empirica