Estudio de muestras de médula ósea de pacientes con leucemia aguda

OBJETIVOS:

• Para realizar una secuenciación de alto rendimiento de un conjunto de factores de transcripción específicos de megacariocitos, tirosina cinasas y cinasas Src en ADN aislado de muestras de médula ósea de adultos con leucemia megacarioblástica aguda (AMKL).
• Ensayar la capacidad de los inhibidores de la cinasa Src (SU6656, dasatinib) para inducir la diferenciación de los blastos de AMKL en estos pacientes.

ESQUEMA: Se secuencia ADN de muestras de médula ósea recolectadas previamente para analizar genes asociados con factores de transcripción (GATA1, GATA2, SCL, FOG-1, ETS1, ETS2, ERG, FLI-1, GABP, HOXA11, NF-E2 y RUNX1) , tirosina cinasas (JAK2, JAK3 y c-MPL) y cinasas de la familia Src (LYN, FYN y HCK) y se compararon con el ADN de control. Utilizando la bioinformática, las alteraciones genéticas se comparan con polimorfismos conocidos y los cambios posteriores en la secuencia de aminoácidos de la proteína codificada. Los ensayos posteriores evalúan el efecto sobre la proliferación y la diferenciación y los estudios in vitro evalúan las consecuencias de las mutaciones en el factor de transcripción y las capacidades de actividad de la quinasa. El efecto de SU6656 y dasatinib sobre la muerte celular y la poliploidización se evalúa mediante citometría de flujo y se compara con el ADN de control.