Estudo de amostras de medula óssea de pacientes com leucemia aguda

OBJETIVOS:

• Realizar o sequenciamento de alto rendimento de um conjunto de fatores de transcrição específicos de megacariócitos, tirosina quinases e Src quinases em DNA isolado de espécimes de medula óssea de adultos com leucemia megacarioblástica aguda (AMKL).
• Testar a capacidade dos inibidores da quinase Src (SU6656, dasatinib) de induzir a diferenciação de blastos AMKL nesses pacientes.

ESBOÇO: DNA de amostras de medula óssea coletadas anteriormente são sequenciados para analisar genes associados a fatores de transcrição (GATA1, GATA2, SCL, FOG-1, ETS1, ETS2, ERG, FLI-1, GABP, HOXA11, NF-E2 e RUNX1) , tirosina quinases (JAK2, JAK3 e c-MPL) e quinases da família Src (LYN, FYN e HCK) e comparados com DNA de controle. Usando a bioinformática, as alterações genéticas são comparadas com polimorfismos conhecidos e subsequentes alterações na sequência de aminoácidos da proteína codificada. Ensaios subseqüentes avaliam o efeito na proliferação e diferenciação e estudos in vitro avaliam as consequências de mutações no fator de transcrição e habilidades de atividade de quinase. O efeito de SU6656 e dasatinib na morte celular e poliploidização é avaliado por citometria de fluxo e comparado com DNA de controle.