Studio di campioni di midollo osseo da pazienti con leucemia acuta

OBIETTIVI:

• Per eseguire il sequenziamento ad alto rendimento di una serie di fattori di trascrizione specifici dei megacariociti, tirosina chinasi e chinasi Src nel DNA isolato da campioni di midollo osseo di adulti con leucemia megacarioblastica acuta (AMKL).
• Per testare la capacità degli inibitori della chinasi Src (SU6656, dasatinib) di indurre la differenziazione dei blasti AMKL in questi pazienti.

SCHEMA: Il DNA di campioni di midollo osseo precedentemente raccolti viene sequenziato per analizzare i geni associati ai fattori di trascrizione (GATA1, GATA2, SCL, FOG-1, ETS1, ETS2, ERG, FLI-1, GABP, HOXA11, NF-E2 e RUNX1) , tirosina chinasi (JAK2, JAK3 e c-MPL) e chinasi della famiglia Src (LYN, FYN e HCK) e confrontate con il DNA di controllo. Utilizzando la bioinformatica, le alterazioni geniche vengono confrontate con i polimorfismi noti e le successive modifiche nella sequenza amminoacidica della proteina codificata. Saggi successivi valutano l'effetto sulla proliferazione e differenziazione e studi in vitro valutano le conseguenze delle mutazioni sul fattore di trascrizione e sulle capacità di attività della chinasi. L'effetto di SU6656 e dasatinib sulla morte cellulare e sulla poliploidizzazione viene valutato mediante citometria a flusso e confrontato con il DNA di controllo.