Probióticos en el tratamiento de NAFLD

Diseño El estudio es un estudio de grupos paralelos, doble ciego, controlado con placebo, de un solo centro. Los pacientes fueron aleatorizados para recibir el suplemento probiótico (1.109 Lactobacillus acidophilus ATCC SD5221 y 1.109 Bifidobacterium lactis HN019) o placebo durante 6 meses. Todos los participantes reciben sesiones de asesoramiento dietético individualizadas con un nutricionista.

Aleatorización La aleatorización se realizó utilizando el sitio web www.randomization.com. La secuencia de asignación permaneció oculta durante todo el estudio. Los investigadores, los evaluadores de resultados y los pacientes desconocían el tratamiento recibido.

El ensayo se registró en www.clinicaltrials.gov. (número NCT02764047)

Intervención Los pacientes reciben el suplemento de probiótico o placebo en frascos de medicamentos idénticos para mantener el cegamiento. La instrucción para la administración de las cápsulas es tomar 1 cápsula por día antes de acostarse con 1 taza de agua. También se recomienda a los pacientes que mantengan los medicamentos en uso sin cambios hasta el final del estudio y que comuniquen a los investigadores si usaron antibióticos.

Cuestionario - Perfil y factores de riesgo de fibrosis y EHNA Se analizará el perfil de los pacientes con EHNA en función de las variables recogidas (edad, sexo, tabaquismo, diabetes, hipertensión, hipertensión arterial, frecuencia cardiaca, peso, talla, IMC, cintura circunferencia, AST, ALT, bilirrubina total, albúmina, colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL, triglicéridos, glucosa, insulina, proteína C reactiva, plaquetas), así como los posibles factores de riesgo para el desarrollo de la enfermedad. Se cree que la interacción entre la dieta, la microbiota intestinal y los antecedentes genéticos es la más importante en el desarrollo y progresión de NAFLD.

Se solicita a los participantes que traigan todos los medicamentos que usan o una lista de sus farmacéuticos al centro de investigación. Durante una entrevista de medicación, el nombre genérico, la dosis y la frecuencia son registrados por personal capacitado.

Evaluación nutricional y física La altura se mide al inicio del estudio para confirmar el IMC. A los 0 (línea de base), a los 3 y 6 meses se mide el peso corporal utilizando una balanza calibrada, la circunferencia de la cintura, la presión arterial sistólica, la presión arterial diastólica, la frecuencia cardíaca. La composición corporal se evalúa al inicio y a los 6 meses, ángulo de fase del método de análisis de impedancia bioeléctrica (BIA), fuerza de agarre manual.

Biopsia, Fibromax y puntuación NAFLD La mejora en la lesión hepática se definirá por la reducción de la fibrosis, la esteatosis y la inflamación en la biopsia hepática y las pruebas no invasivas Prueba Fibromax y puntuación NAFLD de diversos grados. puntuación NAFLD y el test FibroMax™ (Biopredictive, París, Francia), que evalúa fibrosis, inflamación y esteatosis hepática. Se evaluarán la sensibilidad, la especificidad y los valores predictivos positivo y negativo para comparar estos métodos no invasivos de evaluación de la fibrosis con la biopsia hepática. También se evaluarán las transaminasas hepáticas (AST, ALT).

Marcadores bioquímicos - Laboratorios generales y muestra de citocinas Al inicio, a los 3 y 6 meses, se toma una muestra de sangre en ayunas para la medición de los exámenes de laboratorio de plasma (AST, ALT, bilirrubina total, albúmina, colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL, triglicéridos, glucosa , insulina, proteína C reactiva, plaquetas), leptina sérica -1 y MCP. Para determinar los niveles de leptina sérica y MCP-1, se tomaron muestras de sangre venosa de 15 mL de la vena antecubital, y se transfirieron a tubos sin anticoagulante (4 mL). Las muestras de sangre se recolectaron entre las 9:00 am y las 11:00 am, al inicio (PRE), después de 3 meses y después de 6 meses. Los tubos sin anticoagulante se centrifugaron a 1048 g durante 10 min. A continuación, las muestras de suero se dividieron en varias alícuotas y se almacenaron a -20 °C para su posterior análisis. Los niveles séricos de leptina y MCP-1 se determinaron mediante el método de ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), utilizando el kit específico (Peprotech, EUA) siguiendo las instrucciones del fabricante. Todas las muestras se midieron por duplicado con un lector de microplacas SpectraMax M2e (Molecular Devices, EUA). Los coeficientes de variación intraensayo siempre fueron <5,0 %, 3,8 % para BDNF y cortisol, respectivamente.

Microbiota intestinal - Muestra de heces Las muestras de heces son recolectadas por los pacientes en su propia botella y entregadas a la Clínica de Nutrición del Hospital de Hepatología del Hospital de Hepatología Santa Clara Complejo Hospitalario Santa Casa. Las muestras son transportadas al Laboratorio de Inmunología. Las muestras se dividen en alícuotas en 4 muestras, se congelan y se almacenan en congeladores de -20 y -80 grados. Al final de las recolecciones, se extraerá el ADN (MoBio PowerFecal® DNA Isolation Kit). Las muestras de ADN se enviarán al Centro de Investigación del Instituto Universitario de Cardiología y Neumología de la Universidad de Quebec Laval. Se realizará la secuenciación genética de la microflora en las muestras. Los resultados serán analizados y correlacionados con los resultados clínicos.

Registro de alimentos Los pacientes elegibles se someterán a una evaluación de alimentos utilizando un cuestionario de frecuencia de alimentos validado para enfermedades hepáticas y una encuesta de recordatorio de 24 horas utilizada para posibles comparaciones con el cuestionario de frecuencia de alimentos. El método de múltiples pasos para realizar se aplica durante la entrevista con el paciente, con el objetivo de mejorar la precisión de la recopilación y reducir el sesgo de memoria.