Probiotika v léčbě NAFLD

Design Studie je jednocentrová, dvojitě slepá, placebem kontrolovaná, paralelní skupinová studie. Pacienti byli randomizováni tak, aby dostávali buď probiotický doplněk (1,109 Lactobacillus acidophilus ATCC SD5221 a 1,109 Bifidobacterium lactis HN019) nebo placebo po dobu 6 měsíců. Všichni účastníci absolvují individuální dietní poradenství s výživovým poradcem.

Randomizace Randomizace byla provedena pomocí webové stránky www.randomization.com. Alokační sekvence zůstala po celou dobu studie skrytá. Výzkumníci, hodnotitelé výsledků a pacienti byli vůči přijaté léčbě zaslepeni.

Zkouška byla registrována na www.clinicaltrials.gov. (číslo NCT02764047)

Intervence Pacienti dostávají probiotický nebo placebový doplněk v identických lékovkách, aby se zachovala slepota. Návod k podávání kapslí je užívání 1 kapsle denně před spaním s 1 šálkem vody. Pacientům se také doporučuje, aby užívali léky beze změny až do konce studie a informovali zkoušející, zda užívali antibiotika.

Dotazník - Profil a rizikové faktory fibrózy a NASH Profil pacientů s NASH bude analyzován podle shromážděných proměnných (věk, pohlaví, kouření, diabetes, hypertenze, vysoký krevní tlak, srdeční frekvence, hmotnost, výška, BMI, pas obvod, AST, ALT, celkový bilirubin, albumin, celkový cholesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol, triglyceridy, glukóza, inzulín, C-reaktivní protein, krevní destičky), jakož i možné rizikové faktory rozvoje onemocnění. Předpokládá se, že interakce mezi stravou, střevní mikrobiotou a genetickým pozadím je nejdůležitější ve vývoji a progresi NAFLD.

Účastníci jsou žádáni, aby do výzkumného centra přinesli všechny léky, které užívají, nebo seznam od svých lékárníků. Během rozhovoru o medikaci zaregistruje vyškolený personál obecný název, dávku a frekvenci.

Nutriční a fyzické hodnocení Výška se měří na začátku pro potvrzení BMI. V 0 (základní hodnota) se měří tělesná hmotnost ve 3 a 6 měsících pomocí kalibrované váhy, obvodu pasu, systolického krevního tlaku, diastolického krevního tlaku, srdeční frekvence. Složení těla je hodnoceno při výchozím a 6měsíčním fázovém úhlu metody bioelektrické impedanční analýzy (BIA), síla stisku ruky.

Biopsie, Fibromax a NAFLD skóre Zlepšení jaterního poškození bude definováno snížením fibrózy, steatózy a zánětu v jaterní biopsii a neinvazivních testech Fibromax test a NAFLD skóre různého stupně. skóre NAFLD a test FibroMax™ (Biopredictive, Paříž, Francie), který hodnotí fibrózu, zánět a steatózu jater. Senzitivita, specificita, pozitivní a negativní prediktivní hodnoty budou hodnoceny pro srovnání těchto metod neinvazivního hodnocení fibrózy s jaterní biopsií. Hodnoceny budou také jaterní transaminázy (AST, ALT).

Biochemické markery – obecné laboratoře a vzorek cytokinů Na začátku, 3 a 6 měsíců, je odebrán vzorek krve nalačno pro měření laboratorních testů plazmy (AST, ALT, celkový bilirubin, albumin, celkový cholesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol, triglyceridy, glukóza budou kvantifikovány inzulin, C-reaktivní protein, trombocyty), sérový -1 leptin a MCP. Pro stanovení hladin sérového leptinu a MCP-1 bylo odebráno 15 ml vzorků žilní krve z antekubitální žíly a přeneseno do zkumavek bez antikoagulantu (4 ml). Vzorky krve byly odebírány mezi 9:00 a 11:00, na začátku (PRE), po 3 měsících a po 6 měsících. Zkumavky bez antikoagulantu byly centrifugovány při 1048 g po dobu 10 minut. Vzorky séra byly poté rozděleny do několika alikvotů a skladovány při -20 °C pro další analýzu. Hladiny leptinu a MCP-1 v séru byly stanoveny pomocí metody ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) za použití specifické soupravy (Peprotech, EUA) podle pokynů výrobce. Všechny vzorky byly měřeny duplicitně čtečkou mikrodestiček SpectraMax M2e (Molecular Devices, EUA). Intra-testové variační koeficienty byly vždy <5,0 %, 3,8 % pro BDNF a kortizol, v daném pořadí.

Střevní mikroflóra – vzorek stolice Vzorky stolice odebírají pacienti do vlastní lahvičky a doručují je na Nutriční kliniku v hepatologické nemocnici Santa Clara v nemocničním komplexu Santa Casa. Vzorky jsou transportovány do imunologické laboratoře. Vzorky se alikvotně rozdělí na 4 vzorky, zmrazí se a skladují v mrazácích -20 a -80 stupňů. Na konci odběrů bude DNA extrahována (MoBio PowerFecal® DNA Isolation Kit). Vzorky DNA budou zaslány do Výzkumného centra kardiologie a pneumologie univerzitního institutu na University of Quebec Laval. Bude provedeno genetické sekvenování mikroflóry ve vzorcích. Výsledky budou analyzovány a korelovány s klinickými výsledky.

Záznam o jídle Vhodní pacienti budou podrobeni hodnocení jídla pomocí dotazníku o frekvenci jídla validovaného pro onemocnění jater a 24hodinového průzkumu, který se používá pro možná srovnání s dotazníkem o frekvenci jídla. Vícestupňová metoda provádění se používá během rozhovoru s pacientem s cílem zlepšit přesnost sběru a snížit zkreslení paměti.