Probióticos no tratamento da DHGNA

Projeto O estudo é um estudo de grupo paralelo, duplo-cego, controlado por placebo, de centro único. Os pacientes foram randomizados para receber o suplemento probiótico (1.109 Lactobacillus acidophilus ATCC SD5221 e 1.109 Bifidobacterium lactis HN019) ou placebo por 6 meses. Todos os participantes recebem sessões de orientação dietética individualizada com um nutricionista.

Randomização A randomização foi realizada usando o site www.randomization.com. A sequência de alocação permaneceu oculta durante todo o estudo. Pesquisadores, avaliadores de resultados e pacientes desconheciam o tratamento recebido.

O estudo foi registrado em www.clinicaltrials.gov. (número NCT02764047)

Intervenção Os pacientes recebem o suplemento de probiótico ou placebo em frascos de remédios idênticos para manter a cegueira. A instrução para administração das cápsulas é tomar 1 cápsula por dia antes de dormir com 1 xícara de água. Os pacientes também são orientados a manter os medicamentos em uso sem alteração até o final do estudo e a comunicar aos investigadores se fizeram uso de antibióticos.

Questionário - Perfil e fatores de risco para fibrose e NASH O perfil dos pacientes com NASH será analisado de acordo com as variáveis ​​coletadas (idade, sexo, tabagismo, diabetes, hipertensão, hipertensão, frequência cardíaca, peso, altura, IMC, cintura circunferência, AST, ALT, bilirrubina total, albumina, colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL, triglicerídeos, glicose, insulina, proteína C-reativa, plaquetas), bem como os possíveis fatores de risco para o desenvolvimento da doença. Acredita-se que a interação entre dieta, microbiota intestinal e background genético seja a mais importante no desenvolvimento e progressão da DHGNA.

Os participantes são solicitados a trazer todos os medicamentos que usam ou uma lista de seus farmacêuticos para o centro de pesquisa. Durante uma entrevista de medicação, o nome genérico, a dose e a frequência são registrados por pessoal treinado.

Avaliação nutricional e física A altura é medida na linha de base para confirmar o IMC. Em 0 (linha de base), 3 e 6 meses, o peso corporal é medido usando uma balança calibrada, circunferência da cintura, pressão arterial sistólica, pressão arterial diastólica, frequência cardíaca. A composição corporal é avaliada na linha de base e 6 meses ângulo de fase do método de análise de impedância bioelétrica (BIA), força de preensão manual.

Biópsia, pontuação Fibromax e NAFLD A melhora na lesão hepática será definida pela redução da fibrose, esteatose e inflamação na biópsia hepática e testes não invasivos Teste Fibromax e pontuação NAFLD de graus variados. escore NAFLD e o teste FibroMax ™ (Biopredictive, Paris, França), que avalia fibrose, inflamação e esteatose hepática. Sensibilidade, especificidade, valores preditivos positivos e negativos serão avaliados para comparação desses métodos não invasivos de avaliação de fibrose com biópsia hepática. As transaminases hepáticas (AST, ALT) também serão avaliadas.

Marcadores bioquímicos - Laboratórios gerais e amostra de citocinas Na linha de base, 3 e 6 meses, uma amostra de sangue em jejum é coletada para medição de testes laboratoriais de plasma (AST, ALT, bilirrubina total, albumina, colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL, triglicerídeos, glicose , insulina, proteína C-reativa, plaquetas), leptina sérica -1 e MCP serão quantificados. Para determinar os níveis séricos de leptina e MCP-1, amostras de 15 mL de sangue venoso foram retiradas da veia antecubital e transferidas para tubos sem anticoagulante (4 mL). As amostras de sangue foram coletadas entre 9:00 e 11:00, no início do estudo (PRE), após 3 meses e após 6 meses. Tubos sem anticoagulante foram centrifugados a 1048g por 10 min. As amostras de soro foram então divididas em várias alíquotas e armazenadas a -20 °C para posterior análise. Os níveis séricos de leptina e MCP-1 foram determinados pelo método de ensaio imunoenzimático (ELISA), utilizando kit específico (Peprotech, EUA) seguindo as instruções do fabricante. Todas as amostras foram medidas em duplicata pelo leitor de microplacas SpectraMax M2e (Molecular Devices, EUA). Os coeficientes de variação intraensaio foram sempre <5,0%, 3,8% para BDNF e cortisol, respectivamente.

Microbiota intestinal - Amostra de fezes As amostras de fezes são coletadas pelo paciente em frasco próprio e entregues no Ambulatório de Nutrição do Complexo Hospitalar de Hepatologia Santa Clara Santa Casa. As amostras são transportadas para o Laboratório de Imunologia. As amostras são aliquotadas em 4 amostras, congeladas e armazenadas em freezers de -20 e -80 graus. Ao final das coletas, será extraído o DNA (MoBio PowerFecal® DNA Isolation Kit). As amostras de DNA serão enviadas para o University Institute Research Center of Cardiology and Pneumology na University of Quebec Laval. Será realizado o sequenciamento genético da microflora das amostras. Os resultados serão analisados ​​e correlacionados com os resultados clínicos.

Registro alimentar Os pacientes elegíveis serão submetidos à avaliação alimentar por meio de um questionário de frequência alimentar validado para doenças hepáticas e um recordatório de 24 horas utilizado para possíveis comparações com o questionário de frequência alimentar. O método de execução de múltiplas etapas é aplicado durante a entrevista do paciente, com o objetivo de melhorar a precisão da coleta e reduzir o viés de memória.