Probiotici nel trattamento della NAFLD

Design Lo studio è uno studio a gruppi paralleli in doppio cieco, controllato con placebo, a centro singolo. I pazienti sono stati randomizzati a ricevere il supplemento probiotico (1.109 Lactobacillus acidophilus ATCC SD5221 e 1.109 Bifidobacterium lactis HN019) o il placebo per 6 mesi. Tutti i partecipanti ricevono sessioni di consulenza dietetica individualizzate con un nutrizionista.

Randomizzazione La randomizzazione è stata eseguita utilizzando il sito web www.randomization.com. La sequenza di assegnazione è rimasta nascosta per tutto lo studio. I ricercatori, i valutatori dei risultati e i pazienti erano all'oscuro del trattamento ricevuto.

Lo studio è stato registrato su www.clinicaltrials.gov. (numero NCT02764047)

Intervento I pazienti ricevono il supplemento probiotico o placebo in flaconi di medicinali identici per mantenere l'accecamento. L'istruzione per la somministrazione delle capsule è di assumere 1 capsula al giorno prima di coricarsi con 1 tazza d'acqua. Si consiglia inoltre ai pazienti di mantenere i farmaci in uso senza modifiche fino alla fine dello studio e di comunicare agli investigatori se hanno usato antibiotici.

Questionario - Profilo e fattori di rischio per fibrosi e NASH Il profilo dei pazienti con NASH sarà analizzato in base alle variabili raccolte (età, sesso, fumo, diabete, ipertensione, ipertensione, frequenza cardiaca, peso, altezza, BMI, girovita circonferenza, AST, ALT, bilirubina totale, albumina, colesterolo totale, colesterolo HDL, colesterolo LDL, trigliceridi, glucosio, insulina, proteina C-reattiva, piastrine), nonché i possibili fattori di rischio per lo sviluppo della malattia. Si ritiene che l'interazione tra dieta, microbiota intestinale e background genetico sia la più importante nello sviluppo e nella progressione della NAFLD.

I partecipanti sono pregati di portare al centro di ricerca tutti i farmaci che usano o un elenco dei loro farmacisti. Durante un colloquio farmacologico, il nome generico, la dose e la frequenza vengono registrati da personale qualificato.

Valutazione nutrizionale e fisica L'altezza viene misurata al basale per confermare il BMI. A 0 (basale), 3 e 6 mesi il peso corporeo viene misurato utilizzando una bilancia calibrata, circonferenza vita, pressione arteriosa sistolica, pressione arteriosa diastolica, frequenza cardiaca. La composizione corporea viene valutata al basale e a 6 mesi con il metodo dell'analisi dell'impedenza bioelettrica (BIA), la forza della presa della mano.

Biopsia, punteggio Fibromax e NAFLD Il miglioramento del danno epatico sarà definito dalla riduzione della fibrosi, della steatosi e dell'infiammazione nella biopsia epatica e nei test non invasivi Test Fibromax e punteggio NAFLD di vari gradi. Punteggio NAFLD e test FibroMax™ (Biopredictive, Parigi, Francia), che valuta la fibrosi, l'infiammazione e la steatosi epatica. La sensibilità, la specificità, i valori predittivi positivi e negativi saranno valutati per il confronto di questi metodi di valutazione della fibrosi non invasivi con la biopsia epatica. Saranno valutate anche le transaminasi epatiche (AST, ALT).

Marcatori biochimici - Campione di laboratorio generale e citochine Al basale, 3 e 6 mesi, viene prelevato un campione di sangue a digiuno per la misurazione dei test di laboratorio del plasma (AST, ALT, bilirubina totale, albumina, colesterolo totale, colesterolo HDL, colesterolo LDL, trigliceridi, glucosio , insulina, proteina C-reattiva, piastrine), leptina sierica -1 e MCP saranno quantificati. Per determinare i livelli di leptina sierica e MCP-1, sono stati prelevati campioni di sangue venoso da 15 mL dalla vena antecubitale e trasferiti in provette senza anticoagulante (4 mL). I campioni di sangue sono stati raccolti tra le 9:00 e le 11:00, al basale (PRE), dopo 3 mesi e dopo 6 mesi. Le provette senza anticoagulante sono state centrifugate a 1048 g per 10 min. I campioni di siero sono stati quindi divisi in diverse aliquote e conservati a -20 °C per ulteriori analisi. I livelli sierici di leptina e MCP-1 sono stati determinati utilizzando il metodo ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay), utilizzando il kit specifico (Peprotech, EUA) seguendo le istruzioni del produttore. Tutti i campioni sono stati misurati in duplicato dal lettore di micropiastre SpectraMax M2e (Molecular Devices, EUA). I coefficienti di variazione intra-saggio erano sempre <5,0%, 3,8% rispettivamente per BDNF e cortisolo.

Microbiota intestinale - Campione di feci I campioni fecali vengono raccolti dai pazienti nella propria bottiglia e consegnati alla Clinica Nutrizionale del Complesso Ospedaliero di Epatologia dell'Ospedale Santa Clara Santa Casa. I campioni vengono trasportati al Laboratorio di Immunologia. I campioni vengono aliquotati in 4 campioni, congelati e conservati in congelatori a -20 e -80 gradi. Al termine delle raccolte verrà estratto il DNA (MoBio PowerFecal® DNA Isolation Kit). I campioni di DNA saranno inviati al Centro di ricerca di cardiologia e pneumologia dell'Istituto universitario presso l'Università del Quebec Laval. Verrà eseguito il sequenziamento genetico della microflora nei campioni. I risultati saranno analizzati e correlati con i risultati clinici.

Registro alimentare I pazienti idonei saranno sottoposti alla valutazione del cibo utilizzando un questionario sulla frequenza alimentare validato per le malattie del fegato e un sondaggio di richiamo di 24 ore utilizzato per possibili confronti con il questionario sulla frequenza alimentare. Il metodo in più fasi per l'esecuzione viene applicato durante l'intervista al paziente, con l'obiettivo di migliorare l'accuratezza della raccolta e ridurre il bias di memoria.