Copenhague, Boston, Sídney (COBOS)

Los sujetos realizarán dos ensayos (ensayo A y B).

Ensayo A: Durante el ensayo A, el sujeto del estudio comerá a las 6:00 a. m. correspondiente al 5% de los requerimientos energéticos diarios y llegará al laboratorio de investigación a las 8:00 a.m. Se solicita que el sujeto de estudio llegue en automóvil o en transporte público. Después de la llegada, el sujeto de estudio descansará durante 1 hora y en ese momento se insertarán catéteres en ambas venas femorales y la arteria femoral en una de las piernas. A las 9:00 a. m., los sujetos del estudio realizarán un ejercicio de extensión de rodilla con una sola pierna durante 1 hora a una intensidad del 80 % de la capacidad máxima de trabajo. En este protocolo de trabajo se insertan 3 intervalos de 5 minutos de duración donde el sujeto de estudio trabaja al 100% de la intensidad máxima con el fin de conseguir una plena activación/reclutamiento de todas las fibras musculares. Biopsias musculares del m. Se tomará el músculo vasto lateral de ambas piernas antes (a las 8.45 h), inmediatamente después (a las 10.00 h) y 2 horas después de finalizar el ejercicio (a las 12.00 h) (en total 6 biopsias). El consumo de oxígeno pulmonar se mide con el uso de un sistema en línea antes, durante y después del ejercicio y se usa para determinar el metabolismo de sustratos. Se extraen muestras de sangre de las venas femorales de ambas piernas y de la arteria femoral de una de las piernas antes (a las 8:20, 8:40 y 9:00), durante el ejercicio (a las 9:20, 9: 40 am y 10:00 am) y durante el período de recuperación después del ejercicio (a las 10:10 am, 10:30 am, 11:00 am, 11:30 am y 12:00 pm). Al mismo tiempo se mide el flujo sanguíneo en las arterias femorales de ambas piernas con el uso de la técnica Doppler. La determinación de la diferencia arteriovenosa (diferencia AV) mediante la medición simultánea del flujo sanguíneo nos permite calcular la captación de glucosa del músculo esquelético y la captación/liberación de sustancias relevantes (proteínas, péptidos y metabolitos, etc.). La parte experimental del ensayo A se completa a las 12:00 p. m. Al sujeto del estudio se le dará comida y bebida y se le observará durante una hora antes de que pueda salir del laboratorio de investigación.

Prueba B: Durante la prueba de prueba B, los sujetos del estudio tomarán un desayuno a las 6:00 a. m. correspondiente al 5% de los requerimientos energéticos diarios y llegará al laboratorio de investigación a las 8:00 a.m. Se solicita que el sujeto de estudio llegue en automóvil o en transporte público.

Durante la prueba B, los sujetos del estudio realizarán el mismo protocolo de ejercicio de extensión de rodilla con una sola pierna que en la prueba A. A las 9:00 a. intervalos de 5 minutos de duración donde la carga está al 100% de la capacidad máxima de trabajo. Este protocolo de trabajo asegura la plena activación/reclutamiento de todas las fibras musculares. Después de completar el ejercicio de patadas, el sujeto de estudio descansará en posición supina durante 6 horas. Al comienzo de este período de descanso, se insertan catéteres en las venas femorales de ambas piernas y en la arteria femoral de una pierna. También se insertan catéteres en cada vena del antebrazo (venas antecubitales) para la infusión intravenosa de insulina, glucosa y 13C(u)-glucosa estable. La infusión intravenosa de 13C(u)-glucosa se inicia 2 horas después de la finalización del ejercicio para lograr un enriquecimiento del 10% de glucosa en sangre. A las 4 horas del cese del ejercicio se inicia un clamp euglucémico hiperinsulinémico de 120 minutos de duración. Esto implica una infusión intravenosa de insulina y glucosa durante 120 minutos para determinar la sensibilidad a la insulina para la captación de glucosa y el metabolismo de la glucosa. El pinzamiento se inicia con una inyección en bolo de insulina (9,0 mU/kg) seguida de una infusión constante (1,42 mU/kg/min). Simultáneamente, se ajustará la velocidad de infusión de glucosa para que se mantenga la euglucemia. Inmediatamente antes, después de 30 minutos y después de 120 minutos de infusión de insulina se toma una biopsia muscular del músculo vasto lateral de ambas piernas (un total de 6 biopsias). Se toman muestras de sangre de ambas venas femorales y una arteria femoral antes (a las 12:00, 12:30, 13:00, 13:30 y 14:00) y durante (a las 14:15, 2 :30 h, 14:45 h, 15:00 h, 15:15 h, 15:30 h, 15:45 h y 16:00 h) la pinza euglucémica hiperinsulinémica. Simultáneamente se mide el flujo sanguíneo en ambas arterias femorales con el uso de la técnica Doppler. La determinación de la diferencia arteriovenosa (diferencia AV) mediante la medición simultánea del flujo sanguíneo nos permite calcular la captación de glucosa y la captación/liberación de sustancias relevantes (proteínas, péptidos y metabolitos, etc.). La calorimetría indirecta para determinar el metabolismo de todo el cuerpo se mide de forma concomitante, comenzando 2 horas después de finalizar el ejercicio. La parte experimental del ensayo B finaliza a las 16:00 horas. Los sujetos del estudio reciben comida y bebida y son observados durante una hora antes de que puedan salir del laboratorio de investigación.

Las biopsias musculares y las muestras de sangre de los ensayos A y B se almacenan en un congelador cerrado a -80 ºC. Las muestras de músculo y de sangre se utilizarán posteriormente para análisis misceláneos descritos en los antecedentes.

Los ensayos (A y B) se realizarán en orden aleatorio y estarán separados por un mínimo de 14 días.