Copenaghen, Boston, Sydney (COBOS)

I soggetti eseguiranno due prove (prova A e B).

Prova A: durante la prova A il soggetto dello studio mangerà un pasto mattutino alle 6:00 corrispondente al 5% del fabbisogno energetico giornaliero e arriverà al laboratorio di ricerca alle ore 8:00. Si richiede che il soggetto dello studio arrivi in ​​auto o con i mezzi pubblici. Dopo l'arrivo il soggetto dello studio riposerà per 1 ora e in quel momento i cateteri vengono inseriti in entrambe le vene femorali e l'arteria femorale in una delle gambe. Alle 9:00 i soggetti dello studio eseguiranno l'esercizio di estensione del ginocchio su una gamba per 1 ora a un'intensità dell'80% della capacità di lavoro massima. In questo protocollo di lavoro sono inseriti 3 intervalli della durata di 5 minuti in cui il soggetto dello studio lavora al 100% dell'intensità massima con lo scopo di garantire una piena attivazione/reclutamento di tutte le fibre muscolari. Biopsie muscolari dal m. il muscolo vasto laterale di entrambe le gambe verrà prelevato prima (alle 8:45), immediatamente dopo (alle 10:00) e 2 ore dopo la conclusione dell'esercizio (alle 12:00) (per un totale di 6 biopsie). L'assorbimento polmonare di ossigeno viene misurato con l'uso di un sistema online prima, durante e dopo l'esercizio e viene utilizzato per la determinazione del metabolismo del substrato. I campioni di sangue dalle vene femorali di entrambe le gambe e dall'arteria femorale di una delle gambe vengono prelevati prima (alle 8:20, 8:40 e 9:00), durante l'esercizio (alle 9:20, 9:00). 40:00 e 10:00) e durante il periodo di recupero dopo l'esercizio (alle 10:10, 10:30, 11:00, 11:30 e 12:00). Allo stesso tempo viene misurato il flusso sanguigno nelle arterie femorali di entrambe le gambe con l'uso della tecnica Doppler. La determinazione della differenza artero-venosa (differenza AV) mediante misurazione simultanea del flusso sanguigno ci consente di calcolare l'assorbimento del glucosio da parte del muscolo scheletrico e l'assorbimento/rilascio di sostanze rilevanti (proteine, peptidi e metaboliti ecc.). La parte sperimentale della prova A si conclude alle 12:00. Il soggetto dello studio riceverà cibo e bevande e sarà osservato per un'ora prima di poter lasciare il laboratorio di ricerca.

Prova B: durante la prova di prova B i soggetti dello studio mangeranno un pasto mattutino alle 6:00 corrispondente al 5% del fabbisogno energetico giornaliero e arriverà al laboratorio di ricerca alle ore 8:00. Si richiede che il soggetto dello studio arrivi in ​​auto o con i mezzi pubblici.

Durante la prova B i soggetti dello studio eseguiranno lo stesso protocollo di esercizio di estensione del ginocchio su una gamba come nella prova A. Alle 9:00 il soggetto dello studio inizia a eseguire l'esercizio di estensione del ginocchio su una gamba per 1 ora all'80% della capacità di lavoro massima con 3 intervalli della durata di 5 minuti in cui il carico è al 100% della capacità massima di lavoro. Questo protocollo di lavoro assicura la piena attivazione/reclutamento di tutte le fibre muscolari. Dopo che l'esercizio di calci è stato completato, il soggetto dello studio riposerà in posizione supina per 6 ore. All'inizio di questo periodo di riposo i cateteri vengono inseriti nelle vene femorali di entrambe le gambe e nell'arteria femorale di una gamba. Inoltre vengono inseriti cateteri in ciascuna vena dell'avambraccio (vene antecubitali) per l'infusione endovenosa di insulina, glucosio e 13C(u)-glucosio stabile. L'infusione endovenosa di 13C(u)-glucosio viene iniziata 2 ore dopo la conclusione dell'esercizio per ottenere un arricchimento del 10% della glicemia. 4 ore dopo la cessazione dell'esercizio viene avviato un clamp euglicemico iperinsulinemico della durata di 120 minuti. Ciò implica l'infusione endovenosa di insulina e glucosio per 120 minuti al fine di determinare la sensibilità all'insulina per l'assorbimento del glucosio e il metabolismo del glucosio. Il clamp viene avviato con un'iniezione in bolo di insulina (9,0 mU/kg) seguita da un'infusione costante (1,42 mU/kg/min). Contemporaneamente la velocità di infusione del glucosio verrà regolata in modo da mantenere l'euglicemia. Immediatamente prima, dopo 30 minuti e dopo 120 minuti di infusione di insulina viene prelevata una biopsia muscolare dal muscolo vasto laterale di entrambe le gambe (per un totale di 6 biopsie). I campioni di sangue di entrambe le vene femorali e di un'arteria femorale vengono prelevati prima (alle 12:00, 12:30, 13:00, 13:30 e 14:00) e durante (alle 14:15, 2 :30, 14:45, 15:00, 15:15, 15:30, 15:45 e 16:00) il clamp euglicemico iperinsulinemico. Contemporaneamente viene misurato il flusso sanguigno in entrambe le arterie femorali con l'uso della tecnica Doppler. La determinazione della differenza artero-venosa (differenza AV) mediante misurazione simultanea del flusso sanguigno ci consente di calcolare l'assorbimento di glucosio e l'assorbimento/rilascio di sostanze rilevanti (proteine, peptidi e metaboliti, ecc.). La calorimetria indiretta per la determinazione del metabolismo dell'intero corpo viene misurata in concomitanza, a partire da 2 ore dopo la conclusione dell'esercizio. La parte sperimentale della prova B si conclude alle 16:00. I soggetti dello studio ricevono cibo e bevande e vengono osservati per un'ora prima di poter lasciare il laboratorio di ricerca.

Le biopsie muscolari e i campioni di sangue delle prove A e B vengono conservati in un congelatore chiuso a -80ºC. Campioni muscolari e campioni di sangue verranno successivamente utilizzati per analisi varie descritte in background.

Le prove (A e B) saranno effettuate in ordine casuale e saranno separate da un minimo di 14 giorni.