Copenhague, Boston, Sidney (COBOS)

Os sujeitos realizarão duas tentativas (tentativa A e B).

Ensaio A: Durante o ensaio A, o sujeito do estudo fará uma refeição matinal às 6:00 da manhã. correspondente a 5% das necessidades diárias de energia e chegará ao laboratório de pesquisa às 8h00. Solicita-se que o sujeito do estudo chegue de carro ou com transporte público. Após a chegada, o sujeito do estudo descansará por 1 hora e, nesse momento, cateteres serão inseridos em ambas as veias femorais e na artéria femoral em uma das pernas. Às 9:00 da manhã, os sujeitos do estudo realizarão exercícios de extensão de joelho de uma perna por 1 hora a uma intensidade de 80% da capacidade máxima de trabalho. Neste protocolo de trabalho são inseridos 3 intervalos de 5 minutos de duração onde o sujeito em estudo trabalha a 100% da intensidade máxima com o objetivo de assegurar uma plena ativação/recrutamento de todas as fibras musculares. Biópsias musculares do m. músculo vasto lateral em ambas as pernas serão tomadas antes (às 8h45), imediatamente após (às 10h00) e 2 horas após a conclusão do exercício (às 12h00) (no total de 6 biópsias). O consumo pulmonar de oxigênio é medido com o uso de um sistema online antes, durante e após o exercício e é usado para determinação do metabolismo do substrato. Amostras de sangue das veias femorais em ambas as pernas e da artéria femoral em uma das pernas são coletadas antes (às 8h20, 8h40 e 9h00), durante o exercício (às 9h20, 9h: 40h e 10h) e durante o período de recuperação após o exercício (às 10h10, 10h30, 11h, 11h30 e 12h). Ao mesmo tempo, o fluxo sanguíneo é medido nas artérias femorais em ambas as pernas com o uso da técnica Doppler. A determinação da diferença arteriovenosa (diferença AV) por medição simultânea do fluxo sanguíneo nos permite calcular a captação de glicose no músculo esquelético e a captação/liberação de substâncias relevantes (proteínas, peptídeos e metabólitos, etc.). A parte experimental da tentativa A é concluída às 12h00. O sujeito do estudo receberá comida e bebida e será observado por uma hora antes de deixar o laboratório de pesquisa.

Ensaio B: Durante o ensaio de teste B, os sujeitos do estudo comerão uma refeição matinal às 6:00 da manhã. correspondente a 5% das necessidades diárias de energia e chegará ao laboratório de pesquisa às 8h00. Solicita-se que o sujeito do estudo chegue de carro ou com transporte público.

Durante o ensaio B, os sujeitos do estudo realizarão o mesmo protocolo de exercícios de extensão do joelho de uma perna como no ensaio A. Às 9:00 da manhã, o sujeito do estudo começa a realizar exercícios de extensão do joelho de uma perna por 1 hora a 80% da capacidade máxima de trabalho com 3 intervalos de 5 minutos de duração onde a carga está em 100% da capacidade máxima de trabalho. Este protocolo de trabalho garante a ativação/recrutamento total de todas as fibras musculares. Após a conclusão do exercício de chute, o sujeito do estudo descansará em posição supina por 6 horas. No início deste período de repouso, cateteres são inseridos nas veias femorais em ambas as pernas e na artéria femoral em uma perna. Também são inseridos cateteres em cada veia do antebraço (veias antecubitais) para infusão intravenosa de insulina, glicose e 13C(u)-glicose estável. A infusão intravenosa de 13C(u)-glicose é iniciada 2 horas após o término do exercício para atingir um enriquecimento de 10% da glicose sanguínea. 4 horas após a cessação do exercício, é iniciado um clamp euglicêmico hiperinsulinêmico de 120 minutos de duração. Isso implica infusão intravenosa de insulina e glicose por 120 minutos para determinar a sensibilidade da insulina para captação e metabolismo da glicose. O clamp é iniciado com uma injeção em bolus de insulina (9,0 mU/kg) seguida de uma infusão constante (1,42 mU/kg/min). Simultaneamente, a taxa de infusão de glicose será ajustada para que a euglicemia seja mantida. Imediatamente antes, após 30 minutos e após 120 minutos de infusão de insulina, uma biópsia muscular é retirada do músculo vasto lateral em ambas as pernas (um total de 6 biópsias). Amostras de sangue de ambas as veias femorais e uma artéria femoral são colhidas antes (às 12h00, 12h30, 13h00, 13h30 e 14h00) e durante (às 14h15, 2 :30h, 14h45, 15h, 15h15, 15h30, 15h45 e 16h) o clamp euglicêmico hiperinsulinêmico. Simultaneamente, o fluxo sanguíneo é medido em ambas as artérias femorais com o uso da técnica de Doppler. A determinação da diferença arteriovenosa (diferença AV) por medição simultânea do fluxo sanguíneo permite calcular a captação de glicose e a captação/liberação de substâncias relevantes (proteínas, peptídeos e metabólitos etc.). A calorimetria indireta para determinação do metabolismo corporal total é medida concomitantemente, iniciando 2 horas após o término do exercício. A parte experimental da prova B termina às 16h00. Os sujeitos do estudo recebem comida e bebida e são observados por uma hora antes de poderem deixar o laboratório de pesquisa.

Biópsias musculares e amostras de sangue dos ensaios A e B são armazenadas em um freezer trancado a -80ºC. Amostras de músculo e amostras de sangue serão subsequentemente utilizadas para análises diversas descritas em segundo plano.

Os ensaios (A e B) serão realizados em ordem aleatória e serão separados por um intervalo mínimo de 14 dias.