Exploración de los cambios y mecanismos dinámicos del microambiente inmune en el cáncer colorrectal avanzado tratado con terapia combinada IBI363

Exploración de los cambios dinámicos y los mecanismos del microambiente inmune en el cáncer colorrectal avanzado tratado con el protocolo de estudio de terapia combinada IBI363 Versión: 1.0.0 Fecha de versión: 2 de diciembre de 2024 I. Estudio de antecedentes El cáncer colorrectal (CRC) se ubica como el quinto tumor maligno más común en la población china. En la práctica clínica actual, los tratamientos estándar de primera y segunda línea para la CCR metastásica de microsatélites-estable (MSS)/reparación de falta de coincidencia (PMMR) se basan en regímenes de quimioterapia combinados múltiples combinados combinados con terapias dirigidas. Estos regímenes incluyen quimioterapia basada en fluoropirimidina (5-fluorouracilo [5-FU], leucovorina o capecitabina) en combinación con oxaliplatino o irinotecan, con o sin anticuerpos monoclonales específicos. Después de la progresión de la enfermedad después del tratamiento de segunda línea, las opciones de tratamiento aprobadas en China incluyen regorafenib, fruquintinib y TAS-102; Sin embargo, sus beneficios clínicos siguen siendo insatisfactorios, con tasas de respuesta objetiva (ORR) de 1-4%, supervivencia libre de progresión (SLP) de 2-3 meses y supervivencia general (OS) de 6-9 meses según las respectivas etiquetas de drogas. La inmunoterapia actualmente se aprueba actualmente solo para el CRC metastásico con el estado de la inestabilidad de microsatélites (MSI-H) o la reparación de desajuste deficiente (DMMR). En resumen, la eficacia del tratamiento para CRC avanzado sigue siendo limitada, destacando la necesidad urgente de medicamentos y estrategias terapéuticas para mejorar los resultados de los pacientes.

IBI363 es una molécula biespecífica recombinante que consiste en un anticuerpo antiprogramado del receptor de muerte 1 (PD-1) fusionado con interleucina-2 (IL-2), administrado como una formulación inyectable. Bloquea la vía PD-1/PD-L1 mientras se activa la vía de señalización IL-2, invirtiendo así el agotamiento de las células T y promoviendo la activación de la célula T/NK. Al 31 de julio de 2023, un total de 169 participantes se inscribieron en el estudio CIBI363A102, incluidos 22 participantes en la Parte A (titulación acelerada y fase de boin) y 147 en la Parte B (fase de expansión de la dosis). Con respecto a la eficacia, en la fase de escala de dosis, 21 participantes fueron evaluables para la eficacia, con tres participantes en el grupo de dosis QW de 100-300 μg/kg de QW logrando una mejor respuesta tumoral de la respuesta parcial (PR). En la fase de expansión de la dosis, 76 participantes fueron evaluables para la eficacia, con seis participantes en el grupo de dosis de QW de 100-1000 μg/kg logrando PR.

Está bien establecido que el sistema inmunitario puede eliminar las células tumorales a través del ciclo de inmunidad del cáncer. Sin embargo, este proceso no se sostiene, ya que los tumores pueden dar forma gradualmente al microambiente inmune del tumor (tiempo) en un estado inmunosupresor para contrarrestar la inmunidad del huésped. El equilibrio entre mediadores inflamatorios pro-tumor y antitumorales puede determinar la progresión tumoral (Figura 1). Las células inmunes antitumorales incluyen principalmente células T efectoras (como células T CD8+ citotóxicas y células T CD4+ efectoras), células asesinas naturales (NK), células dendríticas (DC) y macrófagos polarizados M1. Las células inmunes pro-tumorales consisten principalmente en células T reguladoras (Tregs), células supresoras derivadas de mieloides (MDSC), macrófagos asociados a tumores (TAM), macrófagos polarizados con M2, neutrófilos polarizados con N2 y células linfoides innatas tipo 2 (ILC2). Los tumores han evolucionado varios mecanismos para evadir la vigilancia inmune, como la presentación de antígeno defectuoso, la regulación positiva de las vías reguladoras inmunes negativas y el reclutamiento de células inmunes pro-tumorales. Como resultado, se suprime la función de las células inmunes antitumorales, y la respuesta inmune antitumoral es difícil de mantener. El objetivo de la inmunoterapia es restaurar la función citotóxica de las células inmunes antitumorales, particularmente los linfocitos T citotóxicos (CTL), contra los tumores. Por lo tanto, investigar la función y los mecanismos de diferentes componentes inmunes dentro del tiempo ayudará a mejorar las tasas de respuesta de inmunoterapia y facilitará el desarrollo de nuevas estrategias inmunoterapéuticas.

Figura 1. Las células inmunes asociadas al tumor en el microambiente tumoral con el rápido desarrollo y la iteración de tecnologías de OMICS, como la inmunohistoquímica multiplex (MIHC), la secuenciación de transcriptoma único (secuenciación de transcriptoma unicelular (SCRNA-seq) y la secuenciación de transcriptoma espacial (STRNA-STNA-STNA), ahora podemos investigar células individuales o subpoblaciones especificadas en una subpoblación más alta en una mayor resolución de la resolución de la resolución de una mayor resolución.

Este estudio tiene como objetivo inscribir a pacientes con cáncer colorrectal avanzado de MSS/PMMR (CCR) y realizar secuenciación de transcriptoma de células individuales en muestras de base y de seguimiento. El objetivo es mapear dinámicamente la heterogeneidad espacial y el paisaje evolutivo del microambiente inmune tumoral (tiempo) a lo largo del curso de la enfermedad, desde el diagnóstico inicial hasta la progresión de la enfermedad. Al analizar el tiempo en diferentes puntos de tiempo, buscamos dilucidar los posibles mecanismos de acción de IBI363 en el cáncer colorrectal. Además, aprovecharemos análisis transcriptómicos espacio -temporales para validar las interacciones de la subpoblación celular in situ dentro del microambiente tumoral.

II. Objetivos de investigación Este estudio tiene como objetivo recopilar e integrar datos de ensayos clínicos de pacientes sometidos a inmunoterapia tumoral y realizar una minería de datos en profundidad para mapear dinámicamente la heterogeneidad espacial y el paisaje evolutivo del microambiente inmunitario tumoral (tiempo) a lo largo de la progresión de la enfermedad en los pacientes con cáncer colorrectal (CCR).

Desde la perspectiva del tiempo, investigaremos los posibles mecanismos de acción de IBI363 en la terapia combinada en comparación con los tratamientos de control en CCR. Además, al analizar los mecanismos de resistencia y evasión inmune, este estudio busca proporcionar una base mecanicista para el diagnóstico de precisión, la optimización del tratamiento y la toma de decisiones terapéuticas futuras para los pacientes con CCR.

Iii. Contenido de investigación

1. Mapeo del microambiente inmune tumoral (tiempo) en pacientes con MSS/PMMR CRC avanzado Este estudio planea inscribir a 50 pacientes con cáncer colectal de reparación de desajuste de microsatélites (CCR) avanzado con microsatélites con el agente inmunoterapéutico IBI363 y bevacizumab más quimioterapia. Los tejidos tumorales se recolectarán en diferentes puntos de tiempo durante el tratamiento (línea de base y después de cada dos ciclos de tratamiento para la evaluación de eficacia) a través de la biopsia de tejido (incluida la biopsia con aguja central o la biopsia de pinzas endoscópicas).

   Una porción de las muestras de tejido recolectado sufrirá una secuenciación de ARN de una sola célula de 3 'genómica (SCRNA-seq), mientras que otra porción será incrustada para parafina para el posterior inmunohistoquímica multiplex (MIHC)/análisis de inmunofluorescencia (IF). El análisis de agrupación celular se realizará utilizando el software CellRanger o Seurat basado en perfiles de expresión génica a través de métodos de reducción de dimensionalidad T-SNE y UMAP. Las células T, las células T, las células B, las células B tumorales y las células inmunes, las células asesinas naturales (NK), los monocitos, los macrófagos, las células dendríticas (DC) y las células estromales, como los fibroblastos, las células endoteliales y las células mesoteliales se identificarán en base a los genes marcadores, que construyen un tiempo de tiempo comprensivo.

2. Identificación de biomarcadores predictivos de la eficacia de IBI363 Al comparar las diferencias de tiempo en los respondedores y los no respondedores entre los 50 pacientes con CCR inscritos, aproximadamente 30 recibirán terapia combinada IBI363, mientras que 20 se someterán a tratamiento de control. Según los datos de seguimiento, los pacientes se estratificarán en grupos respondedores (CR+PR) y no respondedores (SD+PD). Al comparar los resultados de la agrupación basal y los perfiles de expresión del gen marcador entre los dos grupos, nuestro objetivo es identificar subpoblaciones celulares, vías de señalización enriquecidas o firmas de expresión génica asociadas significativamente con la eficacia terapéutica y el beneficio del paciente.

   La transcriptómica espacial se utilizará para mapear las relaciones espaciales entre las subpoblaciones celulares clave y los patrones de expresión génica, lo que permite la identificación de los biomarcadores predictivos más relevantes asociados con la respuesta al tratamiento.

3. Investigando el impacto de IBI363 en el tiempo y su posible mecanismo de acción al realizar la secuenciación de células individuales en los tejidos tumorales al inicio y después del tratamiento (ciclo 2) en todos los pacientes, realizaremos un análisis de trayectoria de seudotima para estudiar la dinámica de diferenciación de las poblaciones celulares. Los análisis basados ​​en la integridad del ARN se utilizarán para inferir trayectorias del desarrollo celular, mientras que los análisis de interacción receptor-ligando proporcionarán información sobre las redes de comunicación intercelular.

Este enfoque integral nos permitirá caracterizar sistemáticamente los efectos de remodelación de los diferentes regímenes de tratamiento en las células tumorales y las poblaciones de células inmunosupresoras dentro del microambiente tumoral, incluidas las células Treg intratumorales, los macrófagos asociados a tumores (TAMS), las células supresoras derivadas de mieloides (MDSC) y los macrófagos M2. En última instancia, este estudio tiene como objetivo descubrir las posibles implicaciones clínicas de diferentes subtipos celulares en inmunoterapia para CCR.

Iv. Ruta técnica

V. Criterios de inclusión y criterios de exclusión para los participantes del estudio

Criterios de inclusión:

1. El participante debe firmar un formulario de consentimiento informado por escrito (ICF) y poder cumplir con el programa de visita especificado por el protocolo y los procedimientos relacionados.
2. Edad ≥18 años y ≤75 años, sin restricciones de género.
3. Diagnóstico confirmado histológicamente o citológicamente de tumores malignos avanzados, cumpliendo con los siguientes criterios específicos de cohorte:

Cohorte 2:

• Los pacientes con cáncer colorrectal avanzado (CCR) confirmado histopatológicamente.
• Confirmado localmente como proceso de reparación de desajuste (PMMR)/inestabilidad de microsatélites-LOW (MSI-L) o estable de microsatélites (MSS) basado en pruebas estándar.

Cohorte 9:

• Los pacientes con cáncer colorrectal avanzado (CCR) confirmado histopatológicamente.
• Confirmado localmente como proceso de reparación de desajuste (PMMR)/Inestabilidad de microsatélites-LOW (MSI-L) o estable de microsatélites (MSS) (si se aplican resultados de pruebas disponibles).
• Las imágenes de línea de base deben indicar la ausencia de metástasis hepáticas activas. Nota: Los pacientes con metástasis hepáticas previamente tratadas (incluida la resección quirúrgica, la ablación por microondas o la radiofrecuencia o la radioterapia estereotáctica, pero excluyendo la quimioembolización transarterial) son elegibles si recibieron un tratamiento definitivo al menos 6 meses antes de estudiar la inscripción y las imágenes posteriores confirman la ausencia de las metástasis en los hígado.

Criterios de exclusión

1. Mujeres embarazadas o lactantes, o mujeres que planean quedar embarazadas antes, durante o dentro de los 6 meses posteriores a la última administración del medicamento del estudio.

2. Metástasis activas o no tratadas del sistema nervioso central (SNC), confirmadas por imágenes durante la detección o evaluaciones previas (por ejemplo, metástasis cerebrales o leptomeníngeas).

   • Los pacientes con metástasis cerebrales asintomáticas pueden participar.
   • Los pacientes que han recibido tratamiento por metástasis cerebrales y han estado sintomáticamente estables durante ≥2 semanas sin evidencia de lesiones nuevas o agrandadas también pueden ser elegibles, siempre que cumplan con todo lo siguiente:
   • Presencia de enfermedad extracraneal medible.
   • No hay metástasis en las meninges, el cerebro medio, las altas, la médula o la médula espinal, y no hay metástasis cerebelosas múltiples.
   • No hay compresión del acueducto cerebral, tercer o cuarto ventrículo, o médula espinal.
   • Descontinuación de la terapia con esteroides al menos 14 días antes de la primera dosis de fármaco de estudio.
3. La trombosis activa, la trombosis venosa profunda (TVP) o la embolia pulmonar dentro de las 4 semanas previas a la primera administración del fármaco del estudio, a menos que el investigador sea tratado adecuadamente y considerado estable.

4. Enfermedades cardiovasculares o cerebrovasculares clínicamente significativas, que incluyen, entre otros::

   • Arritmias ventriculares u otras arritmias cardíacas no controladas que requieren intervención médica (por ejemplo, terapia antiarrítmica).
   • Trastornos de conducción severos (por ejemplo, bloque de Atrioventricular de tercer grado).
   • Intervalo QTC (corregido por la fórmula de Fridericia) ≥480 ms.
   • Hipertensión arterial no controlada a pesar del tratamiento estándar (PA sistólica ≥160 mmHg o PA diastólica ≥100 mmHg).
   • Historia de miocarditis.
   • Insuficiencia cardíaca congestiva que requiere un tratamiento continuo.
   • Fracción de eyección ventricular izquierda (VEF) <50%.
   • New York Heart Association (NYHA) Enfermedad cardiovascular de Clase III o IV.
   • Síndrome coronario agudo (por ejemplo, infarto de miocardio, angina inestable), angioplastia coronaria o colocación de stent dentro de los 6 meses previos a la primera administración de medicamentos del estudio.
   • Accidente cerebrovascular o ataque isquémico transitorio dentro de los 6 meses previos al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
   • Convulsiones activas conocidas.
5. Enfermedad pulmonar intersticial (ILD), fibrosis pulmonar, neumoconiosis, neumonitis inducida por fármacos, neumonitis por radiación que requiere tratamiento con esteroides o disfunción pulmonar severa/enfermedad pulmonar restrictiva.
6. Historia de diátesis alérgica, asma o dermatitis atópica.
7. Efusiones pleurales, pericárdicas o peritoneales recurrentes o sintomáticas que requieren drenaje repetido.
8. Enfermedades autoinmunes activas que requieren terapia sistémica dentro de los 2 años previos al primer estudio de la Administración de Medicamentos (a excepción de las terapias de reemplazo como la hormona tiroidea, la insulina o los corticosteroides para insuficiencia suprarrenal o pituitaria).
9. Historia de trasplante de órganos alogénicos o trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas.
10. Hipersensibilidad conocida o sospechosa al fármaco del estudio o cualquier excipiente.
11. Historial de toxicidad significativa relacionada con el inhibidor del punto de control inmune que requiere una interrupción permanente.

12. Grado no resuelto Toxicidad de tratamientos antitumorales anteriores, excepto:

    • Alopecia de grado 2 persistente, neuropatía periférica o hipomagnesemia.
    • Toxicidades estables y controladas (por ejemplo, hipotiroidismo manejado con reemplazo hormonal o hipertensión controladas a <160/100 mmHg con terapia antihipertensiva).
13. Recuperación incompleta de cirugía o cirugía mayor dentro de las 4 semanas previas al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
14. Sangrado activo, no controlado o trastornos hemorrágicos conocidos.

15. Enfermedades gastrointestinales significativas dentro de los 6 meses previos al primer estudio de la Administración de Medicamentos, que incluye, entre otros::

    • Historia de la enfermedad inflamatoria intestinal (EII).
    • ≥ Grade 2 diarrea dentro de las 2 semanas previas al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
    • Enteritis por radiación.
16. Dolor no controlado relacionado con el tumor o hipercalcemia sintomática.

17. Infección conocida del VIH, hepatitis B activa (VHB), hepatitis C (VHC) o tuberculosis activa:

    • Los pacientes positivos para el VHB deben someterse a pruebas de ADN del VHB. Los pacientes son elegibles si el ADN de VHB es ≤2.5 × 10³ copias/ml o ≤500 UI/ml.
    • Los pacientes positivos para HBSAG deben recibir terapia antiviral durante el estudio para prevenir la reactivación.
    • Los pacientes con HBCAB (+), HBSAG (-), HBS (-) y ADN de HBV (-) no requieren profilaxis antiviral, sino que deben ser monitoreadas de cerca para su reactivación.
    • Los pacientes seropositivos de VHC con ARN de VHC negativo o indetectable son elegibles.
    • Los pacientes que han completado el tratamiento con VHC y lograron una carga viral indetectable son elegibles.
18. Infecciones graves/no controladas que requieren antibióticos IV dentro de las 2 semanas previas al primer estudio de administración de medicamentos o fiebre inexplicada (> 38 ° C).
19. Diagnóstico de otra neoplasia maligna en los últimos 5 años, a excepción del carcinoma de células basal/escamosas tratadas curativamente, carcinoma in situ, cáncer de próstata localizado o carcinoma de tiroides papilar.

20. Medicamentos y terapias prohibidos, que incluyen, entre otros::

    • Citocinas IL-2/IL-15 (excepto por su uso en terapia celular adoptiva o modulación inmune en pacientes inmunocomprometidos).
    • La quimioterapia o la terapia dirigida a la molécula pequeña dentro de las 2 semanas (o 5 vidas medias) antes del primer estudio de la administración de medicamentos, a menos que no se espere toxicidad retrasada. Excepciones:
    • La nitrosoureas y la mitomicina C requieren un período de lavado de 6 semanas.
    • Terapias basadas en anticuerpos dentro de las 4 semanas previas al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
    • Participación en otro ensayo intervencionista dentro de las 2 semanas previas al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
    • Radioterapia paliativa dentro de las 2 semanas previas al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
    • Vacunas vivas dentro de las 4 semanas previas al primer estudio de la Administración de Medicamentos.
    • Terapia inmunosupresora o corticosteroides sistémicos (> 10 mg/día de prednisona equivalente) dentro de las 2 semanas previas al primer estudio de la administración de medicamentos.
    • Medicina tradicional china con efectos antitumorales conocidos dentro de la 1 semana anterior al primer estudio de la Administración de Medicamentos.

21. Contraindicaciones para terapias combinadas, incluidas, entre otros,:

    • UGT1A1*6/*6, UGT1A1*28/*28, o UGT1A1*6/*28 Genotipos, que pueden afectar el metabolismo de Irinotecan.
    • Radioterapia abdominal/pélvica extensa previa, según lo evaluado por el investigador, que puede afectar la función de la médula ósea o la función gastrointestinal.
22. Cualquier condición, tratamiento o anomalía de laboratorio que, a juicio del investigador, pueda comprometer la seguridad del paciente, interferir con el consentimiento informado, afectar el cumplimiento o el impacto de la evaluación del medicamento del estudio.
23. Los trastornos psiquiátricos graves, el deterioro cognitivo o el abuso de sustancias que pueden interferir con el proceso de consentimiento o el cumplimiento del estudio.
24. Cualquier otro factor conocido o anticipado que, en opinión del investigador, haría que el paciente sea inadecuado para el estudio.

Criterios de exclusión para cohortes específicas

Cohorte 2:

1. Síntomas o riesgo de sangrado, perforación u obstrucción en el sitio tumoral colorrectal primario.
2. Historia de toxicidad significativa que requiere una interrupción permanente de bevacizumab, oxaliplatino, capecitabina o 5-FU.
3. Alergia conocida para estudiar drogas o excipientes.

Cohorte 9:

1. Historia de toxicidad significativa que requiere una interrupción permanente de bevacizumab, fruquintinib o trifluridina/tipiracilo, o contraindicaciones para estudiar medicamentos según lo evaluado por el investigador.
2. Alergia conocida para estudiar drogas o excipientes.

VI. Plan de gestión para eventos adversos comunes

I. Las reacciones adversas más comunes en este estudio son las asociadas con la biopsia de tejido. Los principales principios y métodos de gestión son los siguientes:

1. Causa de sangrado: biopsia indujo daño a los vasos sanguíneos (especialmente en tumores con coagulación anormal o suministro vascular rico).

   Síntomas: sangrado o hematoma en el sitio de punción; vómitos de sangre, heces negras (sangrado gastrointestinal) después de la biopsia endoscópica; El sangrado significativo puede conducir a hipotensión, taquicardia y signos de shock.

   Medidas de gestión:

   • Presión local: aplique presión durante 10-15 minutos para sangrado superficial; El sangrado endoscópico se puede controlar rociando agentes hemostáticos (por ejemplo, solución de epinefrina) o electrocauteria.
   • Hemostasia farmacológica: administración intravenosa de fármacos hemostáticos (por ejemplo, ácido tranexámico, vitamina K).
   • Intervención/quirúrgico: el sangrado severo puede requerir embolización vascular o hemostasia quirúrgica.
   • Monitoreo: monitorear los signos vitales, los niveles de hemoglobina y transfundir sangre si es necesario.

   Prevención:

   • Evaluación de coagulación preoperatoria (INR, plaquetas) y corrección de anormalidades.
   • Evite la biopsia en áreas con un suministro vascular alto (basado en imágenes).
   • Controle la presión arterial en pacientes hipertensos antes de continuar.

2. Causa de infección: contaminación durante el procedimiento o estado inmune comprometido del paciente.

   Síntomas: enrojecimiento, hinchazón y formación de pus en el sitio de punción; fiebre, escalofríos, mayor recuento de glóbulos blancos; Infecciones profundas (por ejemplo, absceso hepático, neumonía).

   Medidas de gestión:

   • Antibióticos: antibióticos de amplio espectro (por ejemplo, cefalosporinas de tercera generación) adaptadas al sitio de infección y patógenos, administración intravenosa para infecciones graves.
   • Drenaje: drenaje por punción o cirugía si se forma un absceso.
   • Tratamiento de apoyo: reemplazo de líquidos, antipiréticos, etc.

   Prevención:

   • Técnica aséptica estricta, desinfección adecuada de instrumentos endoscópicos.
   • Antibióticos profilácticos para pacientes de alto riesgo (por ejemplo, diabetes, inmunosuprimidos).
   • Cuidado postoperatorio para mantener el sitio de punción limpio y seco.

3. Dolor Causa: daño tisular o estimulación nerviosa. Síntomas: dolor localizado persistente, posiblemente irradiador a las áreas circundantes; dolor referido después de la biopsia visceral (por ejemplo, dolor de hombro derecho después de la biopsia hepática) .-

   Medidas de gestión:

   • Dolor leve: compresa fría local, descanso, AINE oral (por ejemplo, ibuprofeno).
   • Dolor severo: después de excluir el sangrado o la lesión de los órganos, se pueden usar opioides débiles (por ejemplo, tramadol) a corto plazo.
   • Bloque nervioso: el dolor persistente puede requerir un tratamiento intervencionista.

   Prevención:

   • Técnica suave para evitar punciones repetidas.
   • Anestesia local adecuada (por ejemplo, infiltración de lidocaína).

4. Lesión de órgano

   Sitios de alto riesgo:

   • Biopsia pulmonar → neumotórax, hemopneumotórax.
   • Biopsia hepática → fuga de bilis, hemorragia biliar.
   • Biopsia intestinal endoscópica → Perforación.

   Síntomas:

   • Neumotórax: dolor de pecho repentino, disnea, disminución de los sonidos de respiración en el lado afectado.
   • Perforación: dolor abdominal severo, irritación peritoneal, aire libre bajo el diafragma (en imágenes).

   Medidas de gestión:

   • Neumotórax: pequeña (compresión pulmonar <20%) → observación, oxigenerapia; Moderado a grande → Drenaje en el pecho cerrado.
   • Perforación: NPO, descompresión gastrointestinal, antibióticos intravenosos; Recorte endoscópico o cirugía de emergencia.
   • Fuga biliar: drenaje intervencionista o gestión quirúrgica.

   Prevención:

   • Enfoque guiado por imágenes para evitar estructuras críticas.
   • Controle la profundidad de la punción (por ejemplo, para la biopsia pulmonar, inserte al final de la exhalación).

5. Reacciones alérgicas desencadenantes: anestésicos locales, desinfectantes (por ejemplo, tintura de yodo), látex (por ejemplo, guantes).

   Síntomas: eritema de la piel, picazón; Edema laríngeo, broncoespasmo, shock anafiláctico.

   Medidas de gestión:

   - Deseche al agente ofensivo, garantice la permeabilidad de las vías respiratorias.

   • Tratamiento antiallérgico:
   • Epinefrina (reacción severa): 0.3-0.5mg SOY.
   • Corticosteroides (por ejemplo, dexametasona 10 mg IV).
   • Antihistamínicos (por ejemplo, difenhidramina 20mg IM).
   • Manejo de choque: reanimación de líquidos, vasopresores, RCP si es necesario.

   Prevención:

   • Historia de alergia detallada preoperatoria.
   • Disponibilidad de medicamentos de emergencia (por ejemplo, epinefrina, oxígeno).

6. Reflejo del nervio vagal común en: biopsia endoscópica o punción que estimula el nervio vago. Síntomas: palidez, sudoración, bradicardia, hipotensión.

   Gestión:

   • Detenga el procedimiento, coloque al paciente en la posición supina.
   • Atropina 0.5 mg IV (para frecuencia cardíaca <50 lpm).
   • Reanimación rápida de líquidos, vasopresores si es necesario.

   Prevención:

   - Técnica suave, evite la tracción excesiva.

7. Riesgo de siembra tumoral (raro): diseminación de células tumorales a lo largo de la vía de la aguja de biopsia o la ruta de biopsia endoscópica.

Gestión:

• Radioterapia local o resección quirúrgica.
• Monitorear los signos metastásicos (por ejemplo, a través del seguimiento de imágenes).

Prevención:

• Elija la ruta de biopsia más corta.
• Realice la desactivación posterior al procedimiento de la pista de biopsia (por ejemplo, ablación por radiofrecuencia).

II. Proceso de manejo de reacción adversa

1. Evaluación inmediata: monitoree los signos vitales e identifique el tipo de reacción adversa.

2. Estabilizar la condición:

   • Sangrado → Aplicar presión, reanimación fluida.
   • Reacción alérgica → epinefrina, antihistamínicos.
   • Neumotórax → oxigenerapia, drenaje torácico.
3. Colaboración multidisciplinaria: cirugía de contacto, radiología intervencionista, UCI para asistencia.
4. Registro e informe: Documente el incidente a fondo e informe eventos adversos severos de acuerdo con los protocolos hospitalarios.

Iii. Consideraciones especiales para diferentes tipos de biopsia

Tipo de biopsia Complicaciones de alto riesgo Medidas preventivas de mordedura endoscópica Hemorra de biopsia, perforación Evite las picaduras de tejido profundo, use electrocauteria para áreas vasculares.

Biopsia pulmonar Neumotórax, hemoptisis Final-Exalation Inserción de aguja, rayos X de tórax postoperatorios inmediatos.

Biopsia de hígado sangrado, fugas biliares guiadas por ultrasonido para evitar los principales vasos sanguíneos y conductos biliares, aplique apósito a presión después de la operación.

Biopsia de próstata hematuria, Preparación del intestino preoperatorio de infección, antibióticos profilácticos.

Vii. Análisis de datos (a) Tamaño de la muestra El tamaño de la muestra de este estudio no se basa en pruebas de hipótesis estadística. Se planean que aproximadamente 50 sujetos se inscriban.

(B) Métodos estadísticos

1. Métodos básicos A menos que se especifique lo contrario, los datos en este estudio se resumirán utilizando estadísticas descriptivas. Los datos categóricos se presentarán como recuentos de frecuencia (N) y porcentajes (%), con intervalos de confianza (IC) del 95% cuando sea necesario. Las variables continuas se resumirán utilizando media, desviación estándar (DE), mediana, mínima y máxima. Los datos de tiempo de evento se analizarán utilizando estimaciones de Kaplan-Meier con curvas de supervivencia y 95% de IC. Los datos farmacocinéticos (PK) se resumirán utilizando media, media geométrica, SD, coeficiente de variación (CV), CV geométrico, mediana, máxima y mínima según corresponda.
2. Análisis de eficacia

1. Análisis de eficacia primaria:

   El punto final de eficacia primario es la tasa de respuesta objetiva (ORR). Las estadísticas descriptivas resumirán la mejor respuesta general (BOR) a través de cohortes y brazos de tratamiento. Se proporcionará el número y proporción de respondedores (CR+PR), y el IC del 95% para ORR se estimará utilizando el método Clopper-Pearson. La diferencia ORR entre los grupos A y B dentro de cada cohorte se resumirá utilizando estadísticas descriptivas, y el IC del 95% se calculará utilizando el método de aproximación normal.

2. Análisis de eficacia secundaria:

La tasa de control de la enfermedad (DCR) se analizará de manera similar a Orr. Para puntos finales de eficacia, como la duración de la respuesta (DOR), la supervivencia libre de progresión (PFS) y la supervivencia general (OS), el método Kaplan-Meier se utilizará para estimar los tiempos medios y las curvas de supervivencia de la trama. El IC del 95% para las estimaciones medias se calculará utilizando el método Brookmeyer-Crowley. La tasa de SG de 12 meses y su IC del 95% se estimarán utilizando la transformación log (-log) y la transformación posterior en función de la aproximación normal.

3. Mapeo del microambiente inmune tumoral (tiempo) El mapa de tiempo es una herramienta de visualización utilizada para describir la composición celular y las interacciones dentro del microambiente tumoral. Proporciona información sobre la distribución espacial de varios tipos de células, como células tumorales, células inmunes y células estromales.

1. Software CellRanger y Seurat:

   - CellRanger: una herramienta de análisis para datos de secuenciación de ARN de una sola célula que genera matrices de expresión génica y realiza el procesamiento de datos iniciales.

   - Seurat: un paquete R para el análisis de datos de secuenciación de ARN de una sola célula, que ofrece funcionalidades como el preprocesamiento de datos, la agrupación y la visualización.

2. T-SNE y UMAP:

   • T-SNE (incrustación estocástica de vecino estocástico) y UMAP (aproximación y proyección de colectores uniformes uniformes) son técnicas de reducción de dimensionalidad que proyectan datos de alta dimensión (por ejemplo, datos de expresión génica) en un espacio dos o tridimensional para la visualización.
   • Estos métodos preservan la estructura de datos locales y ayudan a identificar diferentes poblaciones celulares.

3. Análisis de agrupación celular:

   - Después de la reducción de la dimensionalidad, las células se agrupan según los patrones de expresión génica. Las células similares se agrupan, mientras que las células diferentes se separan.

4. Genes marcadores:

   • Los genes marcadores son característicos de tipos de células específicos. Al analizar su expresión, los investigadores pueden identificar varios tipos de células en el tejido tumoral.

   En el microambiente inmune tumoral (tiempo), los siguientes tipos de células son de interés primario:

   Células tumorales: células cancerosas dentro del tejido tumoral.

   Células inmunes:

   - Células T: responsable de la respuesta inmune celular.

   • Células B: células productoras de anticuerpos.
   • Células NK: células asesinas naturales involucradas en la inmunidad antitumoral.
   • Monocitos y macrófagos: participe en respuestas inmunes y eliminación de restos celulares.
   • Células dendríticas: células inmunes presentadoras de antígeno.

   Células estromales:

   • Fibroblastos: involucrado en la reparación de tejidos y la formación de la matriz extracelular.
   • Células endoteliales: constituyen vasos sanguíneos.
   • Células mesoteliales: cubren cavidades corporales.