Probioottisen Lactobacillus Brevis CD2:n (Lb CD2) kariesvaikutus.

2 TUTKIMUKSEN PERUSTELUT Aiemmassa tutkimuksessa testattiin Lb CD2:n tehoa karieksen kehittymiseen liittyviin välimuuttujiin. Niinpä päätettiin suunnitella uusi tutkimus saman alueen koululaisista. Tämän tutkimusprotokollan tavoitteena oli arvioida päivittäin käytettyjen probioottien antikariogeenistä vaikutusta lasten karieksen kehittymiseen. Nollahypoteesi oli, että probiootti Lb CD2 ei muuta lasten kariesriskiä. Lisäksi tutkimuksella tutkitaan plakin happamuutta in situ probioottisen tuotteen säännöllisen kulutuksen jälkeen verrattuna kontrolliryhmään.

3 TUTKIMUKSEN TAVOITTEET

Ensisijainen tavoite:

Probioottien säännöllinen käyttö johtaa huomattavasti pienempään kariesin lisääntymiseen verrattuna lumelääkkeeseen. Säännöllinen suuhygienia on sallittu.

.

Kohdekriteerit:

Teho: Pienempi karieksen lisäys Turvallisuus: Sivuvaikutusten määrittäminen

Turvallisuus: Sivuvaikutusten määrittäminen Haittavaikutukset, kuten erityisesti suun limakalvon muutokset tuotteen nauttimisen jälkeen.

4 TUTKIMUKSEN SUUNNITTELU 4.1 Tutkimuksen suunnittelu ja tutkimuskeskus Kaksoissokko, lumekontrolloitu, pitkittäistutkimus 440 koehenkilöllä. Tutkimus toteutetaan Sassarin yliopiston kirurgian, mikrokirurgian ja lääketieteen laitoksen hammaslääketieteen laitoksella, Viale San Pietro 43/C Sassari.

Tutkimuksen suunniteltu kesto on tammi-helmikuusta 2013 maaliskuuhun 2015 (loppuraportin kera).

Koehenkilöiden rekrytoinnin ehdotettu aloitus tammi-helmikuussa 2013.

5 KOKIAHTEET 440 tervettä mies- tai naispuolista lasta koehenkilöä. Nämä rekrytoidaan Sassarin peruskouluista.

5.1 Samanaikainen hoito ei sallittu Yleensä muut probiootteja sisältävät tuotteet, paitsi maitotuotteet.

5.2 Sallittu samanaikainen lääkitys Kaikki muut lääkkeet ovat sallittuja. Kuitenkin seulontavaihetta edeltäviltä 30 vuorokaudelta ja koko tutkimusjakson ajan ne on kirjattava tapausraporttilomakkeeseen "Samanaikainen lääkitys" -osiossa.

5.3 Yksittäisten koehenkilöiden tutkimuksen ennenaikaisen lopettamisen kriteerit.

Yksittäisen koehenkilön ennenaikaiseen vetäytymiseen voidaan antaa syitä:

• Suostumuksen peruuttaminen
• Jos tutkimukseen osallistumisen jatkaminen ei ole enää hyväksyttävää tai perusteltua tutkijan arvioiden merkittävistä lääketieteellisistä syistä
• Sitoutumattomien sivuvaikutusten (SE) esiintyminen tutkijan arvioiden mukaan
• Pöytäkirjan rikkominen tutkijan päätöksen mukaan kirjallisesti perustellusti
• Koehenkilön poissaolo
• Koehenkilön suostumuksen ja motivaation puute (esim. ei käytä intraoraalista näytteen pidikettä yli kuusi tuntia päivässä) Koehenkilöille, jotka vetäytyvät tutkimuksesta ennenaikaisesti, on tehtävä lopputarkastus.

Tutkijan on kirjattava tutkimuksesta vetäytymisen syyt ja päivämäärä tapausraporttilomakkeeseen.

5.4 Kriteerit koko tutkimuksen keskeyttämiselle Erityisesti uuden tiedon ja/tai riskien tunnistaminen, joka edellyttää hyöty/haittasuhteen uudelleenarviointia. Jos tulos on negatiivinen, LKP voi keskeyttää tutkimuksen keskusteltuaan päätutkijan ja toimeksiantajan kanssa.

Jos rekrytointi on riittämätöntä tai tutkimussuunnitelmaa vastustetaan jatkuvasti tai toistuvasti vakavasti, toimeksiantaja voi yhteisymmärryksessä LKP:n kanssa ja päätutkijan kanssa keskusteltuaan päättää keskeyttää tutkimuksen ennenaikaisesti hallinnollisista syistä.

Jos tutkimuksen ennenaikainen lopettaminen on väistämätöntä, on päätettävä ja otettava käyttöön toimenpiteitä koehenkilöiden etujen ja hyvinvoinnin turvaamiseksi mahdollisimman pitkälle.

6 TUTKIMUSTUOTTEET 6.1 Testituotteet ja lumelääke Tutkimuksen testituotteet valmistaa ja toimittaa CD Investments srl, Italia. Plasebo-imeskelytabletit näyttävät aktiivisilta imeskelytableteilta, joilla on sama maku ja 1 gramman paino ja jotka sisältävät vain yllä lueteltuja aineosia samassa suhteessa kuin aktiiviset, mutta joissa ei ole L. brevis CD2:ta. Näitä kahta tuotetta ei voida erottaa toisistaan.

Tutkimustuotteissa olevista puutteista on ilmoitettava tutkimuskeskukselle ja monitorille (tuotteet säilytetään 4°:ssa tutkimuksen aikana).

6.2 Vakiohammastahna ja hammasharjat Tavallinen fluoria sisältävä hammastahna: monofluorifosfaattia sisältävä hammastahna (800/1000 ppm)

6.3 Pakkaus ja merkinnät 6.3.1 Testituote Ennen käyttöä tutkija säilyttää testinäytteet 4° asteen lämpötilassa. Jokaista koehenkilöä kohden toimitetaan yksi kontti tutkimuslääkettä opiskelujaksolle sekä yksi korvaava säiliö kussakin tapauksessa. Testinäytteet tuotti ja toimitti CD Investiments (Italia) ja koodattiin joko "vihreäksi" tai "punaiseksi". Koodi suljettiin riippumattomalla monitorilla, eikä sitä rikottu ennen kuin tilastollinen analyysi oli saatu päätökseen.

6.4 Vaatimustenmukaisuuden määrittäminen 6.4.1 Testilääkitys Säiliöt punnitaan ennen tutkimusjaksoa ja sen jälkeen.

6.4.2 Vakiohammastahna Koehenkilöiden on käytettävä tavallista hammastahnaa koko tutkimuksen ajan. Vaatimustenmukaisuus tarkistetaan kyselemällä koehenkilöä.

6.5 Testinäytteiden sijainnin dokumentointi Tutkija kirjaa testinäytteiden olinpaikan inventaarioon. Lähetys- ja palautusilmoitukset allekirjoittaa tutkija.

7 ANNOSTUS Hoitovaiheessa koehenkilöt käyttävät 2 losanssia päivässä.

8 OPINTOJEN AIKATAULU JA TESTIMENETELMÄT 8.1 Opintojakso 8.1.1 Suunniteltu aikataulu Ennen tutkimuksen alkua kerätään demografisia, etnisiä ja ennustetietoja (seulontavaihe). Tutkija ottaa sairaushistorian, johon liitetään dokumentit aiemmasta ja samanaikaisesta hoidosta, ja tutkija suorittaa kliinisen suuontelon tutkimuksen (hammastila, suun limakalvo). Jos koehenkilö täyttää kaikki osallistumiskriteerit täyttämättä yhtään poissulkemiskriteeriä, hänet rekisteröidään kliiniseen tutkimukseen ja hänelle annetaan koehenkilön tunnusnumero.

Kaikki koehenkilöt saavat potilaspäiväkirjan seulontavaiheessa. Jokaiselle koehenkilölle valmistetaan nyt yksittäiset näytepidikkeet.

Jakso 1: (180 päivää) tutkimustuotteen nauttiminen, säännöllinen suuhygienia Jakson alussa ICDAS-pisteet kirjataan plakin pH:lla ja syljen mutans streptokokkeilla. Kaikille koehenkilöille opastetaan suuhygieniasta ja tutkimustuotteen kulutuksesta. 90. päivänä plakin pH ja syljen mutans streptokokit rekisteröidään myös uudelleen.

Jakso 2: (90 päivää) säännöllinen suuhygieniaplakin pH ja syljen mutans-streptokokit rekisteröidään uudelleen. Jakso 3: (180 päivää) tutkimustuotteen nauttiminen, säännöllinen suuhygienia Jakson alussa ICDAS-pisteet kirjataan plakin pH:lla ja syljen mutans streptokokkeilla. Kaikille koehenkilöille opastetaan suuhygieniasta ja tutkimustuotteen kulutuksesta. 90. päivänä plakin pH ja syljen mutans streptokokit rekisteröidään myös uudelleen.

Jakso 4: (90 päivää) säännöllinen suuhygieniaplakin pH ja syljen mutans streptokokit rekisteröidään uudelleen. Jakso 5: (180 päivää) tutkimustuotteen nauttiminen, säännöllinen suuhygienia Jakson alussa ICDAS-pisteet kirjataan plakin pH:lla ja syljen mutans streptokokkeilla. Kaikille koehenkilöille opastetaan suuhygieniasta ja tutkimustuotteen kulutuksesta. 90. päivänä plakin pH ja syljen mutans streptokokit rekisteröidään myös uudelleen.

9 MATERIAALIT JA MENETELMÄT 9.1 Kliiniset parametrit ICDAS (International Caries Detection and Assessment System) -indeksi, suun limakalvo

9.2 Sylkitekijöiden tutkimus Sylkitekijöiden pH ja virtausnopeus mitataan seulontavaiheen aikana kolmena päivänä, joka kerta aamuisin. Kolmen mittauksen keskiarvo lasketaan.

Käytetään Dentobuff®-testisarjaa (Vivadent, Liechtenstein).

9.3 Hampaiden harjaustekniikka Koehenkilöiden tulee puhdistaa hampaat vähintään kaksi kertaa päivässä fluoripitoisella hammastahnalla ja pehmeällä hammasharjalla. Tänä aikana säiliöön laitetaan joka päivä tuore, kostea sideharso (veteen liotettu), jotta laitteille saadaan kostea ilmapiiri. Näytteiden ei saa antaa kuivua.

Myös itse emalinäytteet puhdistetaan huolellisesti pehmeällä hammasharjalla, paitsi jokaisen kuukautisen viimeisenä päivänä.

9.4 Satunnaistaminen Satunnaistaminen suoritetaan tietokoneohjelmalla (Excel 2010 Mac OsX:lle) yksilöllisesti.

9.5 Tutkimustuotteen käyttö Tutkittavat eivät saa pureskella imeskelytabletteja. He saavat niellä pastillit.

9.6 Plakki-pH-arviointi Kunkin vaiheen lopussa plakin asidogeenisuus arvioidaan MicroTouch-tekniikalla edellisen sakkaroosialtistuksen jälkeen. pH-arvot suoritetaan jokaiselle näytteelle. pH mitataan viisinkertaisena 6 eri ajankohdassa: lähtötasolla (ennen sakkaroosihuuhtelua) ja 2, 5, 10, 20 ja 30 minuuttia 1 minuutin huuhtelun jälkeen 10 ml:lla 10 % sakkaroosia käyttäen aktiivisia liikkeitä.

Käytetään iridium-kosketusmikroelektrodia (halkaisija 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Fla., USA), jossa on huokoinen lasi vertailuelektrodi (MERE 1, World Precision Instruments). Suolasilta luodaan KCl-liuokseen (3 M) vertailuelektrodin ja kohteen sormen välille. Ennen jokaista pH-arviointikertaa elektrodi kalibroidaan puskuriliuoksella pH-arvoissa 7,00 ja 4,00.