Efecto anticaries del probiótico Lactobacillus Brevis CD2 (Lb CD2).

2 FUNDAMENTO DEL ESTUDIO En un estudio anterior, se probó la eficacia de Lb CD2 en las covariables provisionales relacionadas con el desarrollo de caries. Entonces, se decidió planificar un nuevo estudio en escolares de la misma zona. El objetivo del presente protocolo de investigación fue evaluar el efecto anticariogénico de los probióticos de uso diario, sobre el desarrollo de caries en niños. La hipótesis nula fue que el probiótico Lb CD2 no modificaría el riesgo de caries de los niños. Además, el estudio se llevará a cabo para investigar la acidogenicidad de la placa in situ tras el consumo regular de un producto probiótico en comparación con un grupo control.

3 OBJETIVOS DE ESTUDIO

Objetivo primario:

El consumo regular de probióticos conducirá a un incremento de caries significativamente menor en comparación con un placebo. Se permite la higiene bucal regular.

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Criterios de destino:

Eficacia: Menor incremento de caries Seguridad: Determinación de efectos secundarios

Seguridad: Determinación de efectos secundarios Efectos secundarios como especialmente cambios de la mucosa oral después del consumo del producto.

4 DISEÑO DEL ESTUDIO 4.1 Diseño del estudio y centro del estudio Estudio longitudinal, doble ciego, controlado con placebo en 440 sujetos de prueba. El estudio se llevará a cabo en un solo centro en el Departamento de Cirugía, Microcirugía y Ciencias Médicas - Facultad de Odontología de la Universidad de Sassari, Viale San Pietro 43/C Sassari.

La duración prevista del estudio es de enero-febrero de 2013 a marzo de 2015 (con Informe Final).

Propuesta de inicio del reclutamiento de sujetos de prueba enero-febrero 2013.

5 SUJETOS DE PRUEBA 440 sujetos sanos de prueba de niños masculinos o femeninos. Estos serán reclutados de las escuelas primarias en Sassari.

5.1 Tratamiento concomitante no permitido En general, otros productos que contengan probióticos, excepto los lácteos.

5.2 Medicamentos concomitantes permitidos Todos los demás medicamentos están permitidos. No obstante, durante los 30 días previos a la fase de cribado y durante todo el periodo del estudio, deberán ser consignados en el informe de caso en el apartado “Medicación concomitante”.

5.3 Criterios para la finalización prematura del estudio en sujetos de prueba individuales.

Las razones que se pueden dar para el retiro prematuro de un sujeto de prueba individual son:

• Retractación del consentimiento
• Si la participación continua en el estudio ya no es aceptable o justificada por razones médicas importantes según lo evaluado por el investigador
• Aparición de efectos secundarios intolerables (SE) evaluados por el investigador
• Violación del protocolo, según decisión del investigador, con justificación por escrito
• Inasistencia del sujeto de prueba
• Falta de cumplimiento y motivación por parte del sujeto de prueba (p. no usar el portamuestras intraoral durante más de seis horas al día) Los sujetos de prueba que se retiren del estudio prematuramente deben someterse al examen final.

Los motivos del retiro del estudio y la fecha deben ser registrados por el investigador en el formulario de reporte de caso.

5.4 Criterios para suspender todo el estudio En particular, el reconocimiento de nueva información y/o riesgos que requieran una reevaluación de la relación riesgo/beneficio. En el caso de un resultado negativo, el LKP puede suspender el estudio en discusión con el investigador principal y el patrocinador.

Si hay un reclutamiento inadecuado o una objeción grave persistente o recurrente al protocolo del ensayo, el patrocinador, de acuerdo con el LKP y luego de discutirlo con el investigador principal, puede decidir terminar el estudio prematuramente por razones administrativas.

Si la terminación prematura del estudio es inevitable, se deben decidir e introducir medidas para proteger los intereses y el bienestar de los sujetos de prueba en la medida de lo posible.

6 PRODUCTOS DEL ESTUDIO 6.1 Productos de prueba y placebo Los productos de prueba para el estudio son fabricados y proporcionados por CD Investments srl, Italia. Las pastillas de placebo se verán como las pastillas activas con el mismo sabor y peso de 1 gramo que contienen solo los ingredientes enumerados anteriormente en la misma proporción que el activo pero sin L. brevis CD2. No será posible diferenciar los dos productos.

El centro de estudio y el monitor deben ser informados de cualquier deficiencia en los productos del estudio (los productos se mantendrán a 4° grados durante el estudio).

6.2 Pasta de dientes y cepillos de dientes estándar Pasta de dientes estándar que contiene fluoruro: pasta de dientes que contiene monofluorofosfato (800/1000 ppm)

6.3 Envasado y etiquetado 6.3.1 Producto de prueba Antes de su uso, el investigador almacenará las muestras de prueba a 4° grados de temperatura. Para cada sujeto se entregará un envase de medicación del estudio para el periodo de estudio, así como un envase de reposición en cada caso. Las muestras de prueba fueron producidas y suministradas por CD Investments (Italia) y codificadas como 'verde' o 'roja'. El código fue sellado por un monitor independiente y no se descifró hasta que finalizó el análisis estadístico.

6.4 Determinación del cumplimiento 6.4.1 Medicamento de prueba Los envases se pesarán antes y después del período de estudio.

6.4.2 Pasta de dientes estándar Los sujetos de prueba deben usar la pasta de dientes estándar durante todo el estudio. Se verificará el cumplimiento interrogando al sujeto de prueba.

6.5 Documentación sobre el paradero de las muestras de prueba El investigador registrará el paradero de las muestras de prueba en un inventario. Los albaranes y avisos de devolución serán firmados por el investigador.

7 DOSIS En la fase de tratamiento los sujetos utilizarán 2 pastillas al día.

8 PROGRAMA DE ESTUDIO Y MÉTODOS DE PRUEBA 8.1 Programa de estudio 8.1.1 Cronograma previsto Previo al inicio del estudio, se recopilarán datos demográficos, étnicos y pronósticos (fase de cribado). Se realizará una historia clínica, con documentación del tratamiento previo y concomitante y se realizará un examen clínico de la cavidad oral (estado dental, mucosa oral) por parte del investigador. Si el sujeto de prueba cumple con todos los criterios de inclusión sin cumplir ninguno de los criterios de exclusión, se le inscribirá en el ensayo clínico y se le otorgará un número de identificación de sujeto de prueba.

Todos los sujetos de prueba recibirán un diario del paciente en la fase de selección. Ahora se prepararán portamuestras individuales para cada sujeto de prueba.

Período 1: (180 días) consumo del producto del estudio, higiene oral regular Al comienzo del período se registrará la puntuación ICDAS con el pH de la placa y los estreptococos mutans salivales. Todos los sujetos son instruidos sobre higiene bucal y sobre el consumo del producto de estudio. En el día 90, el pH de la placa y los estreptococos mutans salivales también se registrarán nuevamente.

Período 2: (90 días) se registrará nuevamente el pH de la placa de higiene oral regular y los estreptococos mutans salivales. Período 3: (180 días) consumo del producto de estudio, higiene oral regular Al inicio del período se registrará la puntuación ICDAS con el pH de la placa y estreptococos mutans salivales. Todos los sujetos son instruidos sobre higiene bucal y sobre el consumo del producto de estudio. En el día 90, el pH de la placa y los estreptococos mutans salivales también se registrarán nuevamente.

Período 4: (90 días) se registrará nuevamente el pH de la placa de higiene oral regular y los estreptococos mutans salivales. Período 5: (180 días) consumo del producto de estudio, higiene oral regular Al inicio del período se registrará la puntuación ICDAS con pH de placa y estreptococos mutans salivales. Todos los sujetos son instruidos sobre higiene bucal y sobre el consumo del producto de estudio. En el día 90, el pH de la placa y los estreptococos mutans salivales también se registrarán nuevamente.

9 MATERIALES Y MÉTODOS 9.1 Parámetros clínicos Índice ICDAS (Sistema Internacional de Detección y Evaluación de Caries), Mucosa oral

9.2 Investigación de factores de saliva Factores de saliva El pH y la tasa de flujo se medirán durante la fase de selección durante tres días, cada vez por la mañana. Se calculará la media de las tres mediciones.

Se utilizará el kit de prueba Dentobuff® (Vivadent, Liechtenstein).

9.3 Técnica de cepillado de dientes Se requiere que los sujetos de prueba se limpien los dientes al menos dos veces al día con la pasta de dientes que contiene fluoruro y un cepillo de dientes suave. Durante ese tiempo, cada día se colocará una gasa fresca y húmeda (empapada en agua) en el recipiente para proporcionar un ambiente húmedo a los aparatos. No se debe permitir que las muestras se sequen.

Los especímenes de esmalte en sí también se limpian cuidadosamente con un cepillo de dientes suave, excepto el último día de cada período.

9.4 Aleatorización Mediante un programa informático (Excel 2010 para Mac OsX), la aleatorización se realizará de forma individual.

9.5 Aplicación del producto del estudio No se permite que los sujetos mastiquen las pastillas. Se les permite tragar las pastillas.

9.6 Evaluación del pH de la placa Al final de cada fase, la acidogenicidad de la placa se evaluará mediante la técnica MicroTouch después de una exposición previa a la sacarosa. Las evaluaciones de pH se llevarán a cabo en cada espécimen. El pH se medirá por quintuplicado en 6 puntos de tiempo diferentes: al inicio (antes del enjuague con sacarosa) y 2, 5, 10, 20 y 30 min después de un enjuague de 1 min con 10 ml de sacarosa al 10%, usando movimientos activos.

Se utilizará un microelectrodo táctil de iridio (diámetro 0,1 mm; Beetrode NMPH-1, World Precision Instruments, Sarasota, Fla., EE. UU., con un electrodo de referencia de vidrio poroso (MERE 1, World Precision Instruments). Se creará un puente salino en una solución de KCl (3 M) entre el electrodo de referencia y un dedo del sujeto. Antes de cada sesión de evaluación de pH, se calibrará el electrodo con solución tampón a pH 7,00 y 4,00.