th2-modulaatio CRSwNP

Tarkoitus:

CRS on huonosti ymmärretty sairaus, jonka terapeuttiset strategiat eivät ole optimaalisia ja sairaustaakka on suuri. Adaptiivinen immuniteetti Th2-polarisoituneiden T-soluvasteiden ja B-solujen IgE-luokan vaihtamisen ja plasmasolujen infiltraation muodossa ovat eosinofiilisen CRS:n ja astman ydinkomponentti, mutta ymmärryksemme adaptiivisesta immuniteetista CRS:ssä on edelleen rajallinen. Th2-vasteen moduloiminen IL-5-salpauksen kautta johtaa ristiriitaisiin tuloksiin CRSwNP-potilailla. On useita potilaita, jotka saavuttavat paremman astman hallinnan IL-5-salpaushoidoilla, mutta eivät näe samoja parannuksia nenäsairauteensa, mikä osoittaa tällä hetkellä rajallisen ymmärryksen taudin aktiivisuuteen liittyvistä tekijöistä, sairauden endotyypeistä ja nenän moduloinnin vaikutuksista. Th2-vaste tässä kudosympäristössä. Parempi ymmärrys nenäkudoksen immuniteetin moduloinnista IL-5-salpauksella solutasolla on olennainen askel kohti asianmukaista potilaan valintaa ja uusien kohdennettujen lääkkeiden kehittämistä. Yksisoluinen transkriptomiikka on tehokas työkalu kudosten immuunimaisemien ja toiminnallisten variaatioiden karakterisoimiseen, ja sitä on toistaiseksi käytetty huonosti CRS:ssä tehtyjen nenäepiteelin tutkimusten lisäksi.

Hypoteesi

• IL-5-salpaus stimuloi nenäkudoksen T-solujen > ääreisveren T-solujen lisääntynyttä aktiivisuutta ja edistää kudosten T-solujen Th2-polarisaatiota.
• IL-5-salpaus stimuloi lisääntynyttä B-solujen itukeskuksen aktiivisuutta nenän sekundaarisissa ja tertiaarisissa lymfoidirakenteissa lisääntyneen Tfh-B-soluvuorovaikutuksen ja lisääntyneen kypsymisen kautta kudosten vasta-aineita erittäviksi soluiksi BLIMP1-ylössäätelyn kautta itukeskuksen B-soluissa.

Tavoitteet

1. Karakterisoi paikallista limakalvon B-soluvastetta tertiaarisissa (nasaalinen) ja sekundaarisissa (postnasaalinen tila) lymfoidisissa elimissä CRSwNP:ssä verrattuna kiertävään immuniteettiin visualisoimalla ja mallintamalla itukeskuksen aktiivisuutta, solutuen itukeskuksen aktiivisuutta ja arvioimalla B-solujen kloonaalisen valinnan , luokan vaihto, kohtalo ja somaattinen hypermutaatio käyttämällä yksisoluista transkriptomiikkaa, yksisoluista BCR-sekvensointia (B-solureseptori) ja spatiaalista erottelukykyä konfokaalimikroskopian avulla.
2. Käytä yksisoluista transkriptomiikkaa ja VDJ-repertuaarianalyysiä (variable, diversity and joining) karakterisoidaksesi Th2-modulaation vaikutukset IL-5-salpauksen kautta nenän T- ja B-solujen adaptiivisen immuunimuistin muodostumiseen ja ylläpitoon.
3. Paikallista nenän pro-inflammatorisen signaalin lähteet CRSwNP:ssä IL-5:n salpauksen läsnä ollessa käyttämällä yksisoluista transkriptomiikkaa, konfokaalimikroskopiaa ja nenän sytokiinianalyysiä.
4. Vertaa nenän pro-inflammatorisia solujen alaryhmiä parillisiin perifeerisiin verinäytteisiin yksittäisen solun transkriptomiikan avulla korreloidaksesi aktiivisuutta biomarkkeriehdokkaiden kanssa.

Tutkimus suunnittelu

Ehdotettu tutkimus on prospektiivinen kokeellinen lääketieteellinen tutkimus, jossa käytetään IL-5-salpausta keinona tutkia Th2-modulaation vaikutuksia paikallisen kudoksen adaptiivisen immuniteetin muodostumiseen CRSwNP:ssä. Osallistujat luokitellaan:

• Hoitoryhmä: 20 henkilöä, joilla on CRSwNP ja astma ja jotka aloittavat mepolitsumabihoidon
• Taudin kontrolliryhmä: 10 potilasta, joilla on CRSsNP ilman astmaa ja jotka eivät aloita mepolitsumabia ja jatkavat normaalia hoitoa.
• Kontrolliryhmä: 10 tervettä henkilöä, joilla ei ollut poskionteloiden sairautta

Tämä tutkimus sisältää kolme tutkimuskäyntiä hoitoryhmälle (perustilanne, viikot 6 ja 30), kaksi käyntiä sairauden torjunta-aineille ja yhden (perustason) käynnin terveille kontrolliryhmille.

Tutkimuslääkitystä saavat osallistujat saavat 100 mg mepolitsumabia 4 viikon välein ihon alle.

Hoitovarsi:

CRSwNP (NPS 1-8) ja astma, jolle tehdään IL-5:n salpaus (mepolitsumabi)

• Viikko 0: Rekrytointi, seulonta ja tavanomaisen hoitohoidon aloittaminen

o Nenä- ja verinäytteet Viikko 6 – Mepolitsumabi-hoidon aloitus (esihoito) Viikko 30 – Mepolitsumabihoidon aloittamisen jälkeen (hoidon aikana)

Ohjausvarsi:

1. Sairauksien torjunta:

   CRSsNP ilman astmaa

   • Viikko 0: Rekrytointi, seulonta ja tavanomaisen hoitohoidon aloittaminen

   o Nenä- ja verinäytteet Viikko 6 - 6 viikon normaalin hoitohoidon jälkeen

2. Terve kontrolli • Viikko 0: Rekrytointi ja seulonta, nenä- ja verinäytteet

Tilastollinen analyysi Yksisoluisen RNA:n sekvensointitiedot Sekvensoidut tiedot kohdistetaan CellRanger v7.0:n kanssa. Tuloksena olevat tulostiedostot käsitellään Scanpyn vakiosuodatuksen ja laadunvalvontaprosessin avulla. Eräkorjaus suoritetaan scVI:llä, ja Leiden-klusterointi suoritetaan. Klusterileimat määritetään käyttämällä kanonisia markkerigeenejä ja julkaistuja geeniallekirjoituksia, ja validoinnissa käytetään julkaistua lajiteltujen immuunisolujen tietojoukkoa SingleR-paketin kautta. Alavirran analyysi sisältää, mutta ei rajoittuen, Hallmark- ja Gene Ontology -geenisarjojen geenisarjan ilmentymisanalyysin (GSEA), differentiaalisen runsauden testauksen, painotetun geenin yhteisilmentymisverkoston analyysin ja solujen ja solujen vuorovaikutuksen imputoinnin CellphoneDB:n avulla. TCR-analyysi suoritetaan käyttämällä Scirpyä ja BCR-analyysiä Dandelion- ja Immmcantation-sviiteillä