Parsakaaliverouutteen vaikutus keratinosyyttien erilaistumiseen normaalissa ihossa

10 aikuista vapaaehtoista, mukaan lukien afroamerikkalaiset, valkoihoiset, mies- ja naispuoliset osallistujat, rekrytoidaan lasten ihotautiklinikalla vastaanotettujen potilaiden vanhemmista. Jokainen osallistuja saa 7 ml parsakaalin versouutetta (BSE) jojobaöljyssä, joka sisältää 3500 nmol sulforafaania (katso parsakaalin versouutteen valmistus alta). 500 nmol sulforafaania levitetään joka yö. Osallistujat levittävät BSE-jojobaöljyseosta 3 cm halkaisijaltaan ympyrän yli olkavarteen joka ilta 7 peräkkäisenä yönä. Ohjausvarteen levitetään vain jojobaöljyä. Molemmat kädet suljetaan sarankääreellä joka ilta. Seitsemännen yön jälkeen vapaaehtoisille otetaan 6 mm:n biopsia kummastakin käsivarresta (yhteensä 2), jonka tekee ihotautilääkäri. Biopsiat puhdistetaan alkoholilla, turrutetaan 0,5–1 cm3:llä 1-prosenttista lidokaiinia, jossa on epinefriiniä, ja suljetaan yhdellä 4–0 nailonista, joka ei imeydy. Biopsiakohta peitetään vaseliinilla ja siteellä. Aluetta pidetään peitettynä 24 tuntia, jonka jälkeen se voidaan pestä saippualla ja vedellä ja sitten ottaa talteen vaseliinilla ja sideaineella. Ompele poistetaan 10-14 päivän kuluttua toimenpiteestä. Ensimmäisestä käynnistä viimeiseen ompeleenpoistokäyntiin arvioimme kokeen kestävän noin kuukauden. Osallistujia kehotetaan välttämään paikallisten lääkkeiden tai käsikauppavoiteiden tai -voiteiden käyttöä tutkimuksen ajan, ja heitä kehotetaan myös peseytymään Dove-saippualla suihkussa. Heitä kehotetaan myös välttämään ruokavaliota, jossa on runsaasti ristikukkaisia ​​kasveja, kuten parsakaalia, sinappia ja piparjuurta. Biopsian tulokset jaetaan kumpikin puoliksi. Toinen puolikas pakastetaan kryosektiota ja immunofluoresenssivärjäystä varten ja toinen puoli käytettävä proteiinin tai RNA:n uuttamiseen molekyylimäärityksissä (reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio ja/tai kvantitatiivinen polymeraasiketjureaktio valikoiduille lähetti-RNA:ille ja Western blot -menetelmä valikoiduille proteiiniantigeeneille) . Keratiini 1:n, keratiini 5:n, keratiini 10:n, keratiini 14:n, keratiini 16:n, keratiini 17:n ja Nrf2:n tasoja tutkitaan sekä immunofluoresenssilla että RNA PCR:llä.