Metformiini vähentää uusiutumistiheyttä potilailla, joilla on B-soluprekursori (Ph+ negatiivinen) akuutti lymfoblastinen leukemia

MDR-geenit (Multidrug-Resistance) ovat osallisena useiden syöpien vastustuskykyyn. Tärkeimmät leukemiassa ovat ABCB1 ja ABCG2 - ABCB1 liittyvät vastustuskykyyn ja vaikeusasteeseen akuutissa myelooisessa leukemiassa ja lasten akuutissa lymfoblastisessa leukemiassa. Nämä kuljettajat käyttävät ATP:tä käyttöön. Metformiini vähentää solunsisäistä ATP:tä (adenosiinitrifosfaattia) aktivoimalla AMPK:ta. Äskettäin MCF7-Adr (Michigan Cancer Foundation 7, rintasyöpäsolulinja) syöpäsolulinjassa metformiini estää P-glykoproteiinin toiminnan estämällä ydintekijä -kappa-B:tä.

Kliininen näyttö on tällä hetkellä rajallinen, ja se perustuu pieniin kliinisiin kokeisiin tai havainnointitutkimuksiin. Tässä tutkimuksessa yritetään arvioida metformiinin lisäämisen tavanomaiseen kemoterapiaan potilaisiin, joilla on korkea mRNA:n (lähettiribonukleiinihapon) ABCB1 ekspressio.

Kokeellinen protokolla

Potilaat jaetaan kolmeen ryhmään: korkea-ekspressio, alhainen ilmentyminen ja puuttuva geeniekspressio ABCB1:n mRNA-tason mukaan diagnostisessa vaiheessa. Näytteet saadaan mononukleaarisista perifeerisistä verisoluista

Kokonais-RNA:n uuttaminen Kokonais-RNA eristettiin TRIzol®:lla (Invtirogen Life Technologies) valmistajan Chomczynskin ja Sacchin kuvaamien suositusten mukaisesti.

Kokonais-RNA:n pitoisuus ja puhtaus määritettiin UV-vis-spektrofotometrillä (Thermo Scientific, Genesis 10S UV-vis). Geneettisen materiaalin eheys varmistettiin 1,5 % agaroosigeelielektroforeesilla 70 V jännitteellä 40 minuutin ajan. RNA:ta säilytettiin -80 °C:ssa, kunnes sitä tarvittiin.

cDNA:n synteesi c-DNA:n (komplementaarinen deoksiribonukleiinihappo) synteesin osalta käytetty RNA:n määrä oli 2 ug lopputilavuudelle 20 ug. RNA sekoitettiin 1 ul:aan oligonukleotidia 12-18 (INVITROGEN, Carlsbad, CA) ja 1 ul:aan de dNTP:itä (deoksinukleosiditrifosfaatti) 10 mM (Applied Biosystems, Roche). Kun oli lisätty 4 µl puskuria 5 X (Tris-HCl (suolahappo) 250 mM, KCl (kaliumkloridi) 375 mM MgCl2, 15 mM), 2 µl de DTT:tä (ditiotreitoli) (0,1 M) ja seos inkuboitiin veteen. 37 °C:ssa kaksi minuuttia ja 1 ui MMLV:tä (Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase) -käänteiskopioijaentsyymiä (200u) (INVITROGEN, Carlsbad, CA) ja inkuboitiin 37 °C:ssa 50 minuuttia.

Reaaliaikainen polymeraasiketjureaktio (qRT-PCR) -analyysi ABCB1 (Hs01069047) ja glyseraldehydi-3-fosfaattidehydrogenaasi (GAPDH; Hs00985689) geenien mRNA:n ilmentymistasot mitattiin käyttämällä TaqMan®-geeniekspressiomääritystä (Applied City Biosystems, Foster Biosystems). , CA, USA). GAPDH-geeniä käytettiin endogeenisenä kontrollina, ja jokainen näyte analysoitiin kolmena rinnakkaisena. Suhteelliset ilmentymistasot laskettiin käyttämällä 2-ΔΔCt-menetelmää luuytimen kanssa kalibraattorina. Korkeat ja matalat ekspression raja-arvot määritettiin terveillä luovuttajilla havaittujen keskiarvojen perusteella.

Hoitoprotokolla Kaikki potilaat saavat induktioremissiohoitoa, jossa on ensimmäinen pre-induktiovaihe steroideilla (prednisoni) päivästä -7 päivään -1 (-7,-6 = 25mg, -5, -4:50mg, -3, -2: 75 mg ja päivänä -1: 100 mg). Induktioremissiohoito perustuu 28 päivän hoitoon prednisonilla (60 mg/m2), vinkristiinillä (1,5 mg/m2 max. 2 mg) ja daunorubisiinilla 60 mg/m2 päivinä +1, +8 ja +15. Jos potilas saa täydellisen remission, hän jatkaa konsolidaatiohoidolla peräkkäisillä hoitolohkoilla, jotka sisältävät sytarabiinia, etoposidia ja metotreksaattia. Jos potilas on edelleen remissiossa konsolidointihoidon lopussa, jatkaa ylläpitovaihetta, joka sisältää 6-merkaptopuriinin ja viikoittaisen metotreksaattiannoksen noin kahden vuoden ajan

Vaste Induktioremissiohoidon päivänä 28, luuydinnäytteen tuloksen mukaan potilaat julistetaan remissioksi (alle 5 % blasti) tai refraktaariseksi (> 5 % blastisolu). Jos potilas on läsnä missä tahansa hoidon vaiheessa, luuytimen blastien määrä lisääntyy, potilaan katsotaan olevan uusiutumassa.