Metformine Vermindert het terugvalpercentage bij patiënten met B-cel-precursor (Ph+-negatief) Acute lymfoblastische leukemie

De MDR-genen (Multidrug-Resistance) zijn betrokken bij de resistentie van verschillende soorten kanker. De belangrijkste bij leukemie zijn de ABCB1 en ABCG2- ABCB1 zijn betrokken bij resistentie en ernst bij acute myeloïde leukemie en pediatrische acute lymfoblastische leukemie. Die transporters gebruiken ATP voor gebruik. Metformine vermindert de intracellulaire ATP-reserve (adenosinetrifosfaat) door activering van AMPK. Onlangs blokkeerde Metformine op MCF7-Adr (Michigan Cancer Foundation 7, borstkankercellijn) kankercellijn de functie van het P-glycoproteïne door de remming van de nucleaire factor -kappa-B.

Het klinisch bewijs is op dit moment beperkt, gebaseerd op kleine klinische studies of observationele studies. Deze studie probeert het effect te evalueren van de toevoeging van metformine aan een standaard chemotherapieregime bij patiënten die hoge niveaus van expressie van mRNA (messenger ribonucleïnezuur) ABCB1 tot expressie brengen.

experimenteel protocol

De patiënten zullen worden gestratificeerd in drie groepen: de hoge expressie, lage expressie en afwezige genexpressie volgens het mRNA-niveau van ABCB1 bij diagnose. De monsters worden verkregen uit mononucleaire perifere bloedcellen

Extractie van totaal RNA Totaal RNA werd geïsoleerd door TRIzol® (Invtirogen Life Technologies) volgens de aanbevelingen van de fabrikant beschreven door Chomczynski en Sacchi.

De concentratie en zuiverheid van totaal RNA werd bepaald in een UV-vis spectrofotometer (Thermo Scientific, Genesis 10S UV-vis). De integriteit van het genetische materiaal werd bevestigd door 1,5% agarosegelelektroforese bij 70 V gedurende 40 minuten. Het RNA werd bewaard bij -80°C totdat het nodig was.

Synthese van cDNA Voor de synthese van c DNA (complementair desoxyribonucleïnezuur) was de gebruikte hoeveelheid RNA 2 µg voor een uiteindelijk volume van 20 µg. Het RNA werd gemengd met 1 µl oligonucleotide 12-18 (INVITROGEN, Carlsbad, CA) en 1 µl de dNTP's (deoxynucleosidetrifosfaat) 10 mM (Applied Biosystems, Roche). Na toevoeging van 4 µl Buffer 5 X (Tris-HCl (zoutzuur) 250 mM, KCl (kaliumchloride) 375 mM MgCl2 15 mM), 2 µl DTT (dithiothreitol) (0,1 M) en water werd het hele mengsel geïncubeerd. bij 37° gedurende twee minuten en 1 µl MMLV (Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase) reverse transcriptase-enzym (200u) (INVITROGEN, Carlsbad, CA) en geïncubeerd bij 37°C gedurende 50 minuten.

Real-time analyse van de polymerasekettingreactie (qRT-PCR) De mRNA-expressieniveaus van de genen ABCB1 (Hs01069047) en glyceraldehyde 3-fosfaatdehydrogenase (GAPDH; Hs00985689) werden gemeten met behulp van de TaqMan® genexpressietest (Applied Biosystems, Foster City , CA, VS). Het GAPDH-gen werd gebruikt als een endogene controle en elk monster werd in drievoud geanalyseerd. De relatieve expressieniveaus werden berekend met behulp van de 2-ΔΔCt-methode met beenmerg als kalibrator. De afkappunten voor hoge en lage expressie werden bepaald door de gemiddelde waarden die werden waargenomen bij gezonde donoren.

Behandelingsprotocol Alle patiënten krijgen een inductie-remissiebehandeling met een initiële pre-inductiefase met steroïden (prednison) van dag -7 tot dag -1 (-7 , -6 = 25 mg , -5 , -4 : 50 mg , -3, -2: 75 mg en op dag -1: 100 mg). De inductieremissiebehandeling is gebaseerd op een behandeling van 28 dagen met prednison (60 mg/m2), vincristine (1,5 mg/m2 maxium 2 mg) en daunorubicine 60 mg/m2 op dag +1, +8 en +15. Als de patiënt een volledige remissie archiveert, gaat hij verder met een consolidatietherapie met opeenvolgende behandelingsblokken die Cytarabine, Etoposide, Methotrexaat omvatten. Als de patiënt aan het einde van de consolidatietherapie nog steeds in remissie is, doorgaat met de onderhoudsfase met 6-mercaptopurine en een wekelijkse dosis methotrexaat gedurende ongeveer twee jaar

Respons Op dag 28 van de inductie-remissiebehandeling zullen de patiënten, afhankelijk van het resultaat van het beenmergmonster, worden verklaard in remissie (minder dan 5% blast) of refractair (>5% blastcellen). Als de patiënt op enig punt van de behandeling een toename van het aantal beenmergblasten vertoont, wordt de patiënt beschouwd als een terugval.