Metformin은 B 세포 전구체(Ph+ 음성) 급성 림프구성 백혈병 환자의 재발률을 감소시킵니다.

MDR(Multidrug-Resistance) 유전자는 여러 종류의 암에 대한 내성과 관련이 있습니다. 백혈병에서 가장 중요한 것은 ABCB1이고 ABCG2입니다. ABCB1은 급성 골수성 백혈병 및 소아 급성 림프구성 백혈병에 대한 내성 및 중증도와 관련이 있습니다. 이러한 운송업자는 ATP를 사용하여 사용합니다. Metformin은 AMPK의 활성화를 통해 세포내 ATP(Adenosine triphosphate) 보유량을 감소시킵니다. 최근 MCF7-Adr(Michigan Cancer Foundation 7, 유방암 세포주) 암 세포주에서 Metformin은 핵 인자 -kappa-B의 억제에 의해 P-당단백질의 기능을 차단합니다.

현재 임상 증거는 소규모 임상 시험이나 관찰 연구에 근거하여 제한적입니다. 이 연구는 높은 수준의 mRNA(messenger ribonucleic acid) ABCB1을 발현하는 환자에 대한 표준 화학요법에 메트포르민을 추가한 효과를 평가하려고 합니다.

실험 프로토콜

환자는 진단 시 ABCB1의 mRNA 수준에 따라 고발현, 저발현 및 유전자 발현 부재의 세 그룹으로 계층화됩니다. 샘플은 단핵 말초 혈액 세포에서 얻습니다.

전체 RNA 추출 전체 RNA는 Chomczynski 및 Sacchi가 설명한 제조업체의 권장 사항에 따라 TRIzol®(Invtirogen Life Technologies)로 분리했습니다.

전체 RNA의 농도 및 순도는 UV-vis 분광광도계(Thermo Scientific, Genesis 10S UV-vis)에서 측정하였다. 유전 물질의 무결성은 70V에서 40분 동안 1.5% 아가로스 겔 전기영동으로 확인되었습니다. RNA는 필요할 때까지 -80°C에서 보관했습니다.

cDNA의 합성 c DNA(complementary deoxyribonucleic acid)의 합성을 위해 사용된 RNA의 양은 20μg의 최종 부피에 대해 2μg이었습니다. RNA를 1㎕ 올리고뉴클레오티드 12-18(INVITROGEN, Carlsbad, CA) 및 1㎕ de dNTPs(데옥시뉴클레오시드 트리포스페이트) 10mM(Applied Biosystems, Roche)와 혼합하였다. Buffer 5 X(Tris-HCl(염산) 250mM, KCl(염화칼륨) 375mM MgCl2 15mM) 4㎕, DTT(dithiothreitol)(0.1M) 2㎕ 및 물을 첨가한 후, 모든 혼합물을 배양하였다. 37°에서 2분 동안 MMLV(Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase) 역전사 효소-효소(200u)(INVITROGEN, Carlsbad, CA) 1 μl를 넣고 37°C에서 50분 동안 배양합니다.

실시간 중합효소연쇄반응(qRT-PCR) 분석 , 캘리포니아, 미국). GAPDH 유전자는 내인성 대조군으로 사용되었고, 각 샘플은 3중으로 분석되었다. 상대 발현 수준은 골수를 교정기로 사용하여 2-ΔΔCt 방법을 사용하여 계산되었습니다. 고발현 및 저발현 컷오프 포인트는 건강한 공여자에서 관찰된 평균값에 의해 결정되었습니다.

치료 프로토콜 모든 환자는 -7 일부터 -1 일까지 스테로이드(프레드니손)를 사용한 초기 사전 유도 단계로 유도 완화 치료를 받습니다(-7 ,-6 = 25mg , -5 , -4: 50mg , -3, -2: 75mg 및 -1일: 100mg). 유도 완화 치료는 +1일, +8일 및 +15일에 프레드니손(60mg/m2), 빈크리스틴(1.5mg/m2 최대 2mg) 및 Daunorubicin 60mg/m2를 사용한 28일 치료를 기반으로 합니다. 환자가 완전한 관해를 기록하는 경우, 시타라빈, 에토포사이드, 메토트렉세이트를 포함하는 순차적인 치료 블록으로 통합 요법을 계속합니다. 강화 요법 종료 시 여전히 관해 상태에 있는 환자가 약 2년 동안 6-메르캅토퓨린과 매주 메토트렉세이트 투여를 포함하는 유지 단계를 지속하는 경우

응답 유도 완화 치료 28일째에 골수 샘플 결과에 따라 환자는 관해(5% 미만 모세포) 또는 불응성(>5% 모세포)으로 선언됩니다. 환자가 임의의 치료 시점에 존재하는 경우 골수 모세포 수가 증가하면 환자는 재발로 간주됩니다.