A metformin csökkenti a visszaesések arányát B-sejtes prekurzor (Ph+ negatív) akut limfoblasztos leukémiában szenvedő betegeknél

Az MDR (Multidrug-Resistance) gének számos rákfajta rezisztenciájában szerepet játszanak. A leukémiában a legfontosabbak az ABCB1 és az ABCG2 – az ABCB1 szerepet játszik az akut myeloid leukémia és a gyermekkori akut limfoblasztos leukémia rezisztenciájában és súlyosságában. Ezek a transzporterek ATP-t használnak a használatra. A metformin az AMPK aktiválásával csökkenti az intracelluláris ATP (adenozin-trifoszfát) tartalékot. A közelmúltban az MCF7-Adr (Michigan Cancer Foundation 7, mellrák sejtvonal) rákos sejtvonalán a metformin blokkolja a P-glikoprotein működését a -kappa-B nukleáris faktor gátlásával.

A klinikai bizonyítékok jelenleg korlátozottak, kis klinikai vizsgálatokon vagy megfigyeléses vizsgálatokon alapulnak. Ez a tanulmány megpróbálja értékelni a metformin standard kemoterápiás kezeléshez való hozzáadásának hatását azokra a betegekre, akiknél magas mRNS (messenger ribonukleinsav) ABCB1 expressziója van.

Kísérleti protokoll

A betegeket három csoportba soroljuk: A magas expressziójú, alacsony expressziójú és hiányzó génexpresszió az ABCB1 mRNS-szintje alapján a diagnosztikában. A mintákat mononukleáris perifériás vérsejtekből nyerik

A teljes RNS extrakciója A teljes RNS-t a TRIzol® (Invtirogen Life Technologies) segítségével izoláltuk a gyártó Chomczynski és Sacchi által leírt ajánlásai szerint.

A teljes RNS koncentrációját és tisztaságát UV-vis spektrofotométerrel (Thermo Scientific, Genesis 10S UV-vis) határoztuk meg. A genetikai anyag integritását 1,5%-os agaróz gélelektroforézissel igazoltuk 70 V-on 40 percig. Az RNS-t -80 °C-on tároltuk, amíg szükség volt rá.

A cDNS szintézise A cDNS (komplementer dezoxiribonukleinsav) szintéziséhez a felhasznált RNS mennyisége 2 µg volt 20 µg végső térfogathoz. Az RNS-t összekevertük 1 µl 12-18 oligonukleotiddal (INVITROGEN, Carlsbad, CA) és 1 µl de dNTP-vel (dezoxinukleozid-trifoszfát) 10 mM (Applied Biosystems, Roche). 4 µl 5X puffer (trisz-HCl (sósav) 250 mM, KCl (kálium-klorid) 375 mM MgCl2, 15 mM), 2 µl de DTT (ditiotreitol) (0,1 M) hozzáadása után a keveréket inkubáltuk, 37 °C-on két percig és 1 µl MMLV (Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase) Reverz transzkriptáz enzimet (200u) (INVITROGEN, Carlsbad, CA), majd 37 °C-on 50 percig inkubáltuk.

Valós idejű polimeráz láncreakció (qRT-PCR) analízis Az ABCB1 (Hs01069047) és a glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenáz (GAPDH; Hs00985689) gének mRNS expressziós szintjét a TaqMan® génexpressziós vizsgálattal (Applied City Biosystems, Foster Biosystems) mérték. , CA, USA). A GAPDH gént endogén kontrollként használtuk, és minden mintát három párhuzamosban elemeztünk. A relatív expressziós szinteket a 2-ΔΔCt módszerrel számítottuk ki csontvelővel mint kalibrátorral. A magas és alacsony expressziós határértékeket az egészséges donoroknál megfigyelt átlagértékek határozták meg.

Kezelési protokoll Minden beteg indukciós remissziós kezelést kap kezdeti pre-indukciós fázissal szteroidokkal (prednizon) a -7. naptól az -1. napig (-7,-6 = 25mg, -5, -4: 50mg, -3, -2: 75 mg és a -1. napon: 100 mg). Az indukciós remissziós kezelés 28 napos prednizon (60 mg/m2), Vincristine (1,5 mg/m2 max. 2 mg) és Daunorubicin 60 mg/m2 kezelésen alapul a +1., +8. és +15. napon. Ha a beteg teljes remissziót archivált, konszolidációs terápiát kell folytatni szekvenciális kezelési blokkokkal, amely magában foglalja a citarabint, etopozidot és metotrexátot. Ha a beteg a konszolidációs terápia végén még mindig remisszióban van, a fenntartó fázisban folytatódik, amely 6-merkaptopurint és heti adag metotrexátot tartalmaz körülbelül két évig

Válasz Az indukciós remissziós kezelés 28. napján a csontvelő-minta eredménye alapján a betegeket remissziónak (kevesebb mint 5% blast) vagy refrakternek (>5% blastos sejt) nyilvánítják. Ha a beteg a kezelés bármely pontján jelen van, a csontvelői blastok száma megnövekszik, a beteg visszaesésnek minősül.