La metformine réduit le taux de rechute chez les patients atteints de leucémie aiguë lymphoblastique à précurseurs des lymphocytes B (Ph+ négatif)

Les gènes MDR (Multidrug-Resistance) sont impliqués dans la résistance de plusieurs types de cancers. Les plus importants sur la leucémie sont les ABCB1 et ABCG2 - ABCB1 sont impliqués dans la résistance et la sévérité de la leucémie myéloïde aiguë et de la leucémie lymphoblastique aiguë pédiatrique. Ces transporteurs utilisent l'ATP pour leur utilisation. La metformine diminue la réserve intracellulaire d'ATP (adénosine triphosphate) par l'activation de l'AMPK. Récemment sur la lignée cellulaire cancéreuse MCF7-Adr (Michigan Cancer Foundation 7, lignée cellulaire du cancer du sein), la metformine bloque la fonction de la glycoprotéine P par inhibition du facteur nucléaire -kappa-B.

Les preuves cliniques à l'heure actuelle sont limitées, basées sur de petits essais cliniques ou des études observationnelles. Cette étude tente d'évaluer l'effet de l'ajout de metformine à un schéma de chimiothérapie standard sur des patients qui expriment des niveaux élevés d'expression de l'ARNm (acide ribonucléique messager) ABCB1

protocole experimental

Les patients seront stratifiés sur trois groupes : les gènes à haute expression, à faible expression et à expression absente selon le niveau d'ARNm d'ABCB1 au moment du diagnostic. Les échantillons sont obtenus à partir de cellules sanguines périphériques mononucléaires

Extraction de l'ARN total L'ARN total a été isolé par TRIzol® (Invtirogen Life Technologies) selon les recommandations du fabricant décrites par Chomczynski et Sacchi.

La concentration et la pureté de l'ARN total ont été déterminées dans un spectrophotomètre UV-vis (Thermo Scientific, Genesis 10S UV-vis). L'intégrité du matériel génétique a été confirmée par électrophorèse sur gel d'agarose à 1,5 % à 70 V pendant 40 min. L'ARN a été stocké à -80°C jusqu'à utilisation.

Synthèse d'ADNc Pour la synthèse d'ADNc (acide désoxyribonucléique complémentaire) la quantité d'ARN utilisée était de 2 µg pour un volume final de 20 µg. L'ARN a été mélangé avec 1 ul d'oligonucléotide 12-18 (INVITROGEN, Carlsbad, CA) et 1 ul de dNTPs (désoxynucléoside triphosphate) 10 mM (Applied Biosystems, Roche). Après l'ajout de 4 µl de tampon 5 X (Tris- HCl (acide chlorhydrique) 250 mM, KCl (chlorure de potassium) 375 mM MgCl2 15 mM), 2 µl de DTT (dithiothréitol) (0,1 M) et d'eau, tout le mélange a été incubé à 37° pendant deux minutes et 1 ul de MMLV (Moloney Murine Leukemia Virus Reverse Transcriptase) Reverse transcriptase-enzyme (200u) (INVITROGEN, Carlsbad, CA) et incubé à 37°C pendant 50 minutes.

Analyse en temps réel de la réaction en chaîne par polymérase (qRT-PCR) Les niveaux d'expression de l'ARNm des gènes ABCB1 (Hs01069047) et de la glycéraldéhyde 3-phosphate déshydrogénase (GAPDH; Hs00985689) ont été mesurés à l'aide du test d'expression génique TaqMan® (Applied Biosystems, Foster City , Californie, États-Unis). Le gène GAPDH a été utilisé comme témoin endogène et chaque échantillon a été analysé en triple. Les niveaux d'expression relatifs ont été calculés en utilisant la méthode 2-ΔΔCt avec de la moelle osseuse comme étalon. Les seuils d'expression haute et basse ont été déterminés par les valeurs moyennes observées chez les donneurs sains.

Protocole de traitement Tous les patients reçoivent un traitement d'induction rémission avec une phase initiale de pré-induction par corticoïdes (prednisone) du jour -7 au jour -1 (-7 ,-6 = 25mg , -5 , -4 : 50mg , -3, -2 : 75mg et le jour -1 : 100mg). Le traitement d'induction de la rémission repose sur un traitement de 28 jours avec de la prednisone (60mg/m2), de la Vincristine (1,5mg/m2 maximum 2mg) et de la Daunorubicine 60mg/m2 aux jours +1, +8 et +15. Si le patient archive une rémission complète, continue avec une thérapie de consolidation avec des blocs séquentiels de traitement qui comprend la cytarabine, l'étoposide, le méthotrexate. Si le patient toujours en rémission à la fin du traitement de consolidation poursuit la phase d'entretien qui comprend la 6-mercaptopurine et une dose hebdomadaire de méthotrexate pendant environ deux ans

Réponse Au jour 28 du traitement d'induction de la rémission, selon le résultat du prélèvement de moelle osseuse les patients seront déclarés en rémission (moins de 5% de blastes) ou réfractaires (>5% de blastes). Si le patient présente à n'importe quel moment du traitement une augmentation du nombre de blastes médullaires, le patient est considéré en rechute.