Yhteisöpohjainen kliininen tutkimus mikrobiotan ohjaamilla täydennysruokilla (MDCF), jotka on valmistettu paikallisesti saatavilla olevista elintarvikeainesosista, lasten hoitoon, joilla on ensisijainen kohtalainen akuutti aliravitsemus

Tausta:

Keskivaikea akuutti aliravitsemus (MAM), joka on suuri maailmanlaajuinen terveysongelma, määritellään tuhlaamiseksi (ts. paino/pituus välillä < -2 ja -3 Z-pisteet WHO:n lasten kasvustandardien mukaan) ja/tai olkavarren keskimmäinen ympärysmitta (MUAC) on suurempi tai yhtä suuri kuin 115 mm ja pienempi kuin 125 mm. Global Nutrition Report 2017 -raportin mukaan 8 % eli 52 miljoonaa alle viisivuotiasta lasta oli akuutisti aliravittuja maailmanlaajuisesti vuonna 2016. Stunting vaikutti 23 %:iin eli 155 miljoonaan lapsiin. Noin joka kuudes alle 5-vuotias lapsi Etelä-Aasiassa kärsi MAM:sta vuonna 2013 (ts. 17 %). Näillä lapsilla on lisääntynyt vakavan akuutin aliravitsemuksen (SAM) riski, ja heillä on kolme kertaa suurempi riski kuolla tavallisiin tartuntatauteihin kuin hyvin ravituilla ikätovereilla. Bangladeshissa on yksi maailman suurimmista lapsuuden aliravitsemustaakasista. Bangladeshin demografisen terveystutkimuksen (BDHS) 2014 mukaan stuntuman esiintyvyys alle viisivuotiaiden lasten keskuudessa on 36 %, joista 12 % kärsii vakavasta kitustumisesta (Length-for-Age-Z, LAZ <-3). Noin 15 % lapsista menee hukkaan (paino/pituus Z-pisteet, WLZ <-2); yli 2 miljoonaa lasta kärsii MAM:sta, kun taas 3 % eli 450 000 lasta kärsii tappavasta SAM:sta. Aliravitsemus maksaa Bangladeshille arviolta miljardi dollaria vuodessa. WHO:n suositusten mukaan 6–59 kuukauden ikäisten imeväisten ja lasten, joilla on MAM, on nautittava ravintopitoista ruokaa täyttääkseen ylimääräiset painon- ja pituuden nousun ja toiminnan palautumisen tarpeet. Tällä hetkellä ei ole olemassa näyttöön perustuvia suosituksia MAM-lasten hoidossa käytettävien lisäelintarvikkeiden koostumuksesta. Ruokapulatilanteissa on käytetty lisäelintarvikkeita keskivaikean akuutin aliravitsemuksen hoitoon. Aliravitsemustoimenpiteisiin tulisi siksi sisällyttää vahva osa MAM-hallintaa. MAM-ehkäisy tulee ottaa huomioon elintarviketurvassa ja muissa kehitysstrategioissa, kun tilanne muuttuu kriittiseksi sellaisissa väestöryhmissä, joissa elintarviketurva on rehottaa. Elintarviketurvallisuudesta on tullut maailmanlaajuinen huolenaihe, koska yhä useammat ihmiset ovat aliravittuja ja ovat 842 miljoonaa, noin 12 prosenttia maailman väestöstä. Bangladeshissa vuosina 2011–2012 tekemämme kansallisen mikroravinteiden tilatutkimuksen mukaan vakavaa elintarviketurvaa havaittiin yleisimmin slummeissa (17,2 %), kun vastaava luku kansallisella tasolla oli 12,3 %, maaseutualueilla 12 % ja 12,4 %. maan kaupunkialueilla. Koska ruokaturvaa ei voida voittaa aivan helposti, on siksi tärkeää kehittää interventioita, jotka riippuvat paikallisesti saatavilla olevista elintarvikkeiden ainesosista ja jotka pystyvät valjastamaan suoliston mikrobiotan hyödyllisen voiman vauvojen ja lasten kasvuun.

Yksi tärkeimmistä ravitsemustoimenpiteiden vaikutusta rajoittavista tekijöistä on aliravittujen lasten kyvyttömyys lisätä saantiaan vastatakseen lisääntyneisiin aineenvaihduntatarpeisiin. Yhteistyötutkimuksissa icddr,b:n ja Gordon Labin välillä Washingtonin yliopistossa St. Louisissa rintamaito-, mikrobiota- ja immuniteettiprojektin (BMMI) aloitusvaiheen aikana sovelsimme Random Forestsia, koneoppimiseen perustuvaa lähestymistapaa. bakteerien 16S rRNA (ribosomaalinen ribonukleiinihappo) -tietojoukot, jotka on luotu kuukausittaisista ulostenäytteistä, jotka on saatu Dhakan, Bangladeshin kaupunkislummissa asuvien lasten syntymäkohortista. Nämä lapset osoittivat jatkuvasti tervettä kasvua (WLZ -0,32+0,98). Bakteerikantoja tunnistettiin, joiden suhteellinen edustus määrittelee terveen suoliston mikrobiston, kun se kerääntyy ensimmäisten 2-3 postnataalisen vuoden aikana. Satunnaistetussa kliinisessä tutkimuksessa icddr,b:llä kahdella terapeuttisella ruoalla (tuodut käyttövalmis terapeuttinen ruoka [RUTF (Ready to Use Therapeutic Food), Plumpy'Nut] vs. paikallisesti valmistettu riisi/linssipohjainen Khichuri ja Halwa) Bangladeshissa Vaikeaa akuuttia aliravitsemusta (SAM) sairastavilla lapsilla havaittiin, että mikrobiotan kypsymättömyys on epätäydellisesti ja vain ohimenevästi parantunut, ja lapset pysyivät selvästi kitukasvuisina ja alipainoisina koko seurantajakson ajan. Bangladeshilaiset lapset, joilla oli MAM, osoittivat myös merkittävää mikrobiotan kypsymättömyyttä, vaikkakin vähemmän vakavaa kuin lapset, joilla oli SAM. Mikrobiootan kypsymättömyys toimii siten mahdollisena biomarkkerina aliravitsemusriskissä olevien imeväisten tunnistamiseksi ja hoito- ja ehkäisystrategioiden seuraamiseksi.

Tutkijat kehittivät äskettäin käyttövalmiita terapeuttisia ruokia käyttämällä paikallisesti saatavilla olevia elintarvikkeiden ainesosia - riisiä, linssiä ja kikherneitä, jotka ovat kulttuurisesti tärkeitä ja hyväksyttäviä. He havaitsivat kaksoissokkoutetun RCT:n (randomized Controlled Trial) avulla, että kikhernepohjainen ja riisilinssipohjainen RUTF olivat yhtä tehokkaita kuin kaupallinen maapähkinäpohjainen RUTF ja hyväksyivät hyvin SAM-sairaat lapset. Yllämainittujen RCT- ja kliinisten translaatiotutkimusten yhdistelmällä he ovat tunnistaneet kasvua edistävän ikääntyvän hyödyllisen mikrobiston ja paikallisesti saatavilla olevia elintarvikkeiden ainesosia, jotka tukevat näiden hyödyllisten mikrobiottojen lisääntymistä. Lisäksi aiempien tutkimusten tulokset, jotka on tehty gnotobioottisilla eläimillä Washingtonin yliopiston genomitieteen laitoksessa, ovat saaneet meidät ehdottamaan, että ruoan ainesosien (kikherne, soijajauho, maapähkinä ja vihreä banaani) yhdistelmä on tutkimisen arvoinen suhteessa ruokavalion vaikutuksiin. kasvua syrjivän mikrobiston lisääntymisen sekä kustannusten ja kestävyyden edistäminen. Arvioidakseen, missä määrin gnotobioottisilla hiiri- ja porsasmalleilla saadut tulokset siirtyvät ihmisiin, tutkijat suorittivat äskettäin RRC:n (Research Review Committee) ja ERC:n (Ethecial Review Committeen) hyväksymän tutkimuksen, icddr,b-protokolla (PR-16099). Pre-Proof of Concept -kliiniset kokeet optimoidakseen lyijymikrobiotan ohjaamaa täydentävää ruokaa (MDCF) prototyyppien kykyä korjata mikrobiotan kypsymättömyyttä ja varmistaa niiden aistinvarainen hyväksyttävyys "ja saivat tutkimuksen päätökseen. Tämä tutkimus oli suunniteltu testaamaan kolmen paikallisesti tuotetun MDCF-prototyypin (MDCF-1, MDCF-2 ja MDCF-3) ja paikallisesti tuotetun riisilinssipohjaisen RUSF:n vaikutuksia. Tämän pilottitutkimuksen tavoitteena oli osoittaa esikoe, että tietyillä täydennysruokilla olisi myönteinen vaikutus pieniin lapsiin, jotka kärsivät kohtalaisesta akuutista aliravitsemuksesta stimuloimalla tiettyjen suoliston mikrobiotan jäsenten lisääntymistä, jotka tunnetaan kasvua edistävänsä. vaikutus. Pilottitutkimuksessa he tutkivat mikrobiotan Z-pisteitä sekä suoliston mikrobiotan hyvien jäsenten lisääntymisen vaikutusta tiettyihin kehon järjestelmiin. Pre-POC-pilottitutkimuksen tulokset osoittivat lopullisesti, että yksi kolmesta mikrobiotaan suunnatusta täydentävästä ruoasta (MDCF-2; koostuu kikherneen, soijajauhojen, maapähkinöiden, vihreän banaanin, öljyn, sokerin ja hivenravinteiden yhdistelmästä) liittyi tiettyjen aminohappojen lisääntyminen, joilla on keskeinen rooli pitkien luiden kehityksessä, aivojen kehityksessä ja lisääntyneessä IGF-1:n tuotannossa. Tämä tehtiin käyttämällä uusinta DNA-aptameeripohjaista SomaLogic-skannausta. Ja tulokset viittaavat siihen, että tämä ehdokas MDCF-2 on tehokas stimuloimaan suoliston mikrobiotan kasvua edistävien jäsenten, esimerkiksi Faecalibacterium prausnitzii, kasvua. Siten MDCF-2 edistää suoliston mikrobiota, joka indusoi hormonin insuliinin kaltaista kasvutekijää 1 (IGF-1), joka edistää luun kasvua ja uudelleenmuotoilua.

Näiden todisteiden perusteella tutkijat haluaisivat nyt tehdä paljon laajemman kliinisen kokeen käyttäen lupaaviinta MDCF:ää, joka on MDCF-2 ja jonka ensisijainen päätepiste on lineaarinen kasvu. Tämä kokeilu koskisi lapsia, joilla on ensisijainen MAM.

Tutkimuksen suunnittelu ja menetelmät Tutkijat suorittavat kliinisen tutkimuksen 12–18 kuukauden ikäisillä lapsilla, joilla on ensisijainen MAM (WLZ <-2 - -3).

Tutkimussuunnitelma: Satunnaistettu kontrolloitu interventiokoe. Tutkimuspaikka: Tämä tutkimus suoritetaan Bauniabadhissa, RADDA MCH-FP (äitien ja lasten terveys - perhesuunnittelu) klinikalla Mirpurin alueella ja Gabtolissa Dhakan kaupungissa, ja mahdollisesti Terre des Hommesin erikoisravitsemusyksikössä Kurigramissa.

Tutkimukseen osallistujat: Tutkimukseen osallistuvat 12-18 kuukauden ikäiset lapset molemmista sukupuolista, joilla on MAM (WLZ <-2 - -3).

Alkuseulonta ja ilmoittautuminen: Field Research Assistantin (FRA) seulotaan ja rekisteröidään lapset kotitaloustutkimuksilla ennalta määritettyjen mukaanottokriteerien mukaisesti. Ilmoittautumiskriteerien täyttyessä ja saatuaan vanhemmilta tai laillisilta huoltajilta suostumuksen tutkimukseen osallistumiseen, lapset, joilla on vastaava äiti/hoitaja, merkitään ja jaetaan satunnaisesti jompaankumpaan kahdesta haarasta tietokoneella luotujen satunnaislukujen perusteella. Määrätyn ruokavaliotyypin koodia säilytetään kullekin yksilölle suljetussa läpinäkymättömässä kirjekuoressa, ja se avataan vasta, kun hoitaja allekirjoittaa suostumuslomakkeen.

Opintojen suunnittelu:

Varsi 1 – Riisilinssipohjainen RUSF (perustelut: MAM:n hoidon vertailustandardi; perustuu tietoon sen vaikutuksista suoliston mikrobiotaan tai mikrobiotan kypsymättömyyteen) Varsi 2 – MDCF2 (Microbiota Directed Complementary Food 2), jossa on neljä täydentävää elintarvikkeiden ainesosaa (perustelut) : lyijy ja todisteita Pre-POC-kliinisistä tutkimuksista lyijymikrobiotan ohjaamien täydentävien ravintoprototyyppien optimoimiseksi niiden kyvyn osalta korjata mikrobiston epäkypsyyttä ja positiivisia vaikutuksia kasvuun) Ulostenäytteenotto Viikoittainen ulostenäytteet (1-2g) kerätään 30 minuutin kuluessa erittyminen (kotona ja kuljetetaan takaisin icddr,b:hen) käyttämällä nestemäistä typpeä sisältävää kuivalähetintä. Näytteitä säilytetään -80 °C:ssa ennen kuin ne lähetetään Gordon Labiin mikrobiotan kypsyysanalyysiin (mitattu ennen MDCF- ja RUSF-hoidon lopettamista, sen aikana ja sen jälkeen) ja PCR- (polymeraasiketjureaktio) -pohjaiseen enteropatogeenien määrään ulosteessa. näytteet (mitattu ennen ja jälkeen MDCF-käsittelyn).

Jokaiselta lapselta otetaan 1-2 g ulostenäytteitä ilmoittautumisen yhteydessä, viikoittain ensimmäisen interventiokuukauden aikana ja 4 viikossa 2. ja 3. hoitokuukauden aikana sekä intervention jälkeisen vaiheen lopussa. Olettaen, että tutkimukseen osallistuu 62 henkilöä/käsivarsi, tässä tutkimuksessa kerätään yhteensä 992 ulostenäytettä. Äideiltä otetaan ilmoittautumisen yhteydessä 2 g ulostenäytteitä.

Virtsanäytteiden otto Jokaiselta lapselta otetaan 2 ml virtsanäytteitä ilmoittautumisen yhteydessä, viikon kuluttua ilmoittautumisesta ja kerran kuukaudessa interventio- ja jälkivaiheessa. Olettaen, että tutkimukseen osallistuu 62 henkilöä/käsivarsi, tässä tutkimuksessa kerätään yhteensä 744 virtsanäytettä. Äideiltä otetaan 5 ml virtsanäytteitä ilmoittautumisen yhteydessä.

Verinäytteiden otto Jokaiselta lapselta otetaan 2 ml verinäytteitä ennen toimenpidettä, ensimmäisen toimenpidekuukauden lopussa ja heti toimenpiteen päätyttyä. Tässä tutkimuksessa kerätään yhteensä 372 plasmanäytettä. Äideiltä otetaan 5 ml verinäytteitä ilmoittautumisen yhteydessä.

Äidin ravitsemustila liittyy lapsen ravitsemukseen, kuten kahdeksan maan MAL-ED (aliravitsemus ja enteric Diseases) -tutkimuksen tulokset osoittavat. Lisäksi vastasyntyneet ja muut äidin tekijät olivat varhaisia ​​iän lyhyemmän pituuden määrääviä tekijöitä, ja niiden osuus pysyi tärkeänä koko ensimmäisen 24 kuukauden ajan. Tutkijat uskovat, että muut äidin tekijät käsittävät äidin suoliston mikrobiston sekä äidin veren aminohappoprofiilin. Aloitteissa, joilla puututaan lapsuuden stuntingiin, tulisi myös harkita täydentävien elintarvikkeiden (eli korkeamman proteiinin) koostumuksen parantamista ja strategioita suoliston patogeenien altistumisen vähentämiseksi. Sellaisenaan he tallentavat äidin pituuden ja painon. Äidin biologisen ravitsemustilan ymmärtämiseksi äidiltä pyydetään näytteitä ulosteesta, verestä ja virtsasta. Näistä näytteistä analysoidaan suoliston mikrobiota ja proteomiikka, ja tulokset korreloivat tutkimukseen osallistuneiden lasten tuloksiin.

Ruokintakerrat Lapsia ja äitejä/hoitajia pyydetään saapumaan paikoille perustetuille ravitsemuskeskuksille mieluiten klo 9-11 ja 1. päivänä klo 15-17. Äitiä pyydetään olemaan antamatta ruokaa ja rintamaitoa havaittua ateriaa edeltävän 2 tunnin aikana. Lapselle tarjotaan 25 grammaa MDCF:tä tai RUSF:ää satunnaisen jaon perusteella kummallakin aterialla klo 9-11 ja 17-17 välillä. Äitejä pyydetään syöttämään lusikalla esipunnittua ruokavaliota lapsilleen, kunnes hän kieltäytyy syömästä alla kuvatulla tavalla. Kahden minuutin tauon jälkeen samaa ruokavaliota tarjotaan toisen kerran, kunnes hän kieltäytyy uudelleen. Toisen kahden minuutin tauon jälkeen ruokavaliota tarjotaan kolmannen kerran, kunnes se evätään uudelleen. Tämän kolmannen kieltäytymisen jälkeen ruokintajakso katsotaan "lopetuksi". Ruokinnan kesto (ilman välissä olevia "lepojaksoja") tallennetaan sekuntikellolla, ja ruokinnan kokonaiskesto merkitään muistiin. Tämä ruokintajakso kestää enintään 60 minuuttia. Myös tavanomaisen veden mitatut määrät ilmoitetaan ja mitataan tämän 60 minuutin ateriajakson aikana otetun veden määrä. Ruokintajakso tapahtuu koulutetun tutkimushenkilöstön välittömässä valvonnassa. Lasten katsotaan kieltäytyvän lisäannoksesta, jos he siirtävät päänsä pois ruoasta, itkevät, puristavat suunsa tai puristavat hampaitaan tai ovat kiihtyneet, sylkevät ruoan ulos tai kieltäytyvät nielemästä. Tosiasiallisesti nautitun MDCF/RUSF:n määrä lasketaan vähentämällä ylijäämä tarjotusta määrästä. Valmiiksi punnitut lautasliinat toimitetaan; kaikki ruuansulatus, oksennut tai roiskunut ruoka pyyhkäistään, punnitaan ja vähennetään tarjotusta määrästä. Kulutetun ruoan määrä (g), energia (kcal) ja hyväksyttävyysluokka analysoidaan. Field Research Assistantit tarkkailevat ilmoittautuneita lapsia päivittäin mahdollisten sivuvaikutusten/haittatapahtumien varalta (esim. ihottuma, urtikaria, joka johtuu ruoka-aineallergiasta tai muista merkittävistä kliinisen tilan muutoksista) viikon ajan. Jos havaitaan sivuvaikutuksia/haittavaikutuksia, ne hoidetaan tavanomaisen hoidon mukaisesti. RUSF:n ja MDCF:n laadun valvomiseksi noudatetaan standardoitua tuotantomenettelyä kansainvälisen standardiprotokollan mukaisesti. RUSF ja MDCF valmistetaan elintarvikelaboratoriossa. Ruoan valmistusta eri vaiheissa, eli paahtamista, partikkelikoon pienentämistä, homogeenista sekoitusta ja toimittamista ravitsemuskeskuksiin, valvovat icddr,b-tutkijat. Ruoka valmistetaan päivittäin, jotta varmistetaan, ettei valmistuksen aikana tapahdu odottamattomia kontaminaatioita tai ravintoainehäviöitä. Vaikka raakaruoan ainesosat hankitaan erittäin huolellisesti paikallisilta markkinoilta ja niitä varastoidaan kohtuullisina määrinä, tutkijat valmistavat, antavat ja ruokkivat lapset samana päivänä, kun MDCF ja RUSF valmistetaan. Jokaiselle lapselle tarjotaan 25 grammaa ruokavaliota kahdesti päivässä ruokintakeskuksessa ensimmäisten 4 viikon ajan. Seuraavan kuukauden aikana lapselle tarjotaan 25g ruokintaa ruokintakeskuksessa ja lisäksi 25gm puhtaassa astiassa kotona ruokittavaksi. Kolmannella kuukaudella jokaiselle ilmoittautuneelle lapselle annetaan joka päivä kaksi erillistä 25 g:n ruokavaliota sisältävää astiaa osallistujan kotona.

Tässä tutkimuksessa ravitsemustilaa arvioidaan antropometrian avulla WHO:n kasvuvertailustandardeihin verrattuna. Tutkimuksen alussa haetaan tietoa demografisista ominaisuuksista (perheiden varallisuus, asumisen taso, perherakenne ja vanhempien ominaisuudet jne.) ja FRA:t kirjaavat lasten painon digitaalisella vaa'alla 2g tarkkuudella (Seca, malli 728, Saksa), pituus (käyttäen infantometriä, Seca, malli 416, Saksa) ja olkavarren keskimmäinen ympärysmitta lähimpään millimetriin (joustamatonta teippiä käyttäen). Antropometria tehdään standardimenettelyjen mukaisesti ja kaikki mittaukset tehdään kolmesti ja keskimmäinen kirjataan.

Kaikki interventiot kussakin tutkimuksessa annetaan lapsille Mirpurin terveysklinikalla/RADDA-klinikalla tai Kurigramissa. Äitejä/ensisijaisia ​​hoitajia neuvotaan säilyttämään lapsensa nykyiset ruokavalio- ja imetyskäytännöt.

Tutkijat suorittavat rekisteröinnin 12 kuukauden kuluessa ja seurannan sekä data-analyysin vielä 6 kuukauden kuluessa. Tämä primaari-MAM-tutkimus jatkuu kuitenkin samanaikaisesti toisen kliinisen Post SAM-MAM -tutkimuksen kanssa, joka kestää pidempään.

Rekrytointi, seulonta ja suostumuslaskenta, seulonta ja tutkimukseen osallistuneiden ilmoittautuminen tehdään Dhakan kaupungin ja Kurigramin kohteiden valuma-alueilla. Niiden lasten vanhempia, jotka täyttävät MAM-kriteerit (primary MAM -tutkimukseen), otetaan yhteyttä tutkimukseen ilmoittautumisen yhteydessä. Kenttätutkimusassistentti selittää tutkimuksen yksityiskohtaisesti, vastaa vanhempien kysymyksiin ja pyytää vanhempia ilmoittamaan lapsensa tutkimukseen.

Tutkimuksen alussa haetaan tietoa demografisista ominaisuuksista (perheiden varallisuus, asumisen taso, perherakenne ja vanhempien ominaisuudet jne.), ja FRA:t kirjaavat lasten painon digitaalisella vaa'alla 2 g:n tarkkuudella, pituudella. (käyttäen infantometriä), ja olkavarren keskimmäinen ympärysmitta lähimpään millimetriin. Tutkimukseen osallistujia pyydetään tulemaan suoraan ravitsemuskeskukseen ravitsemusterapiaan.

MDCF 2:n ja RUSF:n valmistus Edellä kuvatussa Pre-POC-tutkimuksessa tunnistettujen täydentävien elintarvikkeiden ainesosien yhteensopivien yhdistelmien perusteella MDCF2:ta sekä riisilinssi-RUSF:ää valmistetaan icddr,b:n elintarviketeollisuudessa Mirpurissa ja Kurigramissa (to molemmissa paikoissa) riittävä määrä kliinistä tutkimusta varten. Nämä kaksi ruokavaliota vastaavat energiatiheyden ja hivenravinnepitoisuuden suhteen. MDCF:n energiatiheys on 125 kcal/25 g (annosta kohti), ja kalorijakauman tavoitteena on olla 45-50 prosenttia rasvasta ja 8-10 prosenttia proteiinista. MDCF-prototyyppien kehittämiskokeita ja organoleptisten ominaisuuksien arviointia on tehty kliinisen Pre-POC-tutkimuksen aikana. Raaka-aineiden (riisi/linssi/kikherne) vastaanottamisen jälkeen vieraat aineet/jyvät tai siemenet (jos niitä on) otetaan pois ja sitten raaka-aineet paahdetaan avoimessa pannussa. Lämpötila pidetään 120-130°C paistamista varten. Yleensä 100 g:n raaka-aineen paahtaminen kestää 8-10 minuuttia. Jatkuva sekoittaminen on välttämätöntä yksittäisten siementen/jyvien paahtamisen varmistamiseksi. Paahtamisen päätyttyä se säilytetään sivussa jäähtymistä varten ja sen jälkeen virnistetään. Lopuksi lisätään esipunnittu esiseosjauhe. Koko vihreän banaanin käsittely MDCF2:een sisällytettäväksi eroaa muista ainesosista. Vihreä banaani kuorineen laitetaan syvään kattilaan kiehuvaan veteen (100°C-110°C) ja keitetään noin 17-20 minuuttia, kunnes ne ovat kypsiä ja pehmeitä. Vihreän banaanin kuori kuoritaan pois ja syötävä valkoinen osa otetaan ja raastetaan pieniksi paloiksi. Sitten ne otetaan kattilaan ja annetaan jäähtyä. Pienet banaanipalat murskataan lusikalla/käsimurskaimella. Kaikkien muiden ainesosien painot kirjataan. Reseptit valmistetaan pienissä erissä sekoittamalla kaikki ainekset sähköblenderissä. Reseptiin tulee lisätä pieni määrä (1 prosentti) soijalesitiiniä sakeuden parantamiseksi ja öljyn irtoamisen estämiseksi.

Antropometria Lapsen ikä varmistetaan asiakirjoista (syntymätodistus tai rokotuskortti, jos sellainen on) tai hoitajan kertomus lapsen syntymäajasta. Pituus mitataan infantometrillä, joka on herkkä 0,1 cm. Paino mitataan 2g:lle herkällä vaakalla. Pituus-iän (LAZ), paino-pituuden (WLZ) ja Weight-for-age (WAZ) Z-pisteet lasketaan noudattaen Multicentre Growth Reference Study (MGRS) WHO:n (World Health Organization) kasvustandardeja. Turvotus tutkitaan painamalla molempien jalkojen yläosaa 3 sekunnin ajan. Keskiolkavarren ympärysmitta (MUAC) mitataan MUAC-teipillä (UK). Säännöllinen mittauslaitteiden standardointi tehdään standardeilla.

Plasma- ja ulostenäytteiden analyysit Tästä kokeesta kerätyt plasmanäytteet lähetetään tohtori Jeffrey Gordonin laboratorioon Washingtonin yliopiston genomitieteiden ja systeemibiologian keskuksessa St. Louisissa. Kehittyneillä massaspektroskooppisiin ja immuunimäärityksiin perustuvilla menetelmillä saadaan uutta tietoa suoliston mikrobiotan kypsymättömyyden roolista ja tämän epäkypsyyden akuutin korjaamisen vaikutuksista lyijymikrobiota ohjaavalla täydentävällä ruoalla (MDCF) biomarkkereihin ja terveen kasvun välittäjiin. . Vertailut tehdään kontrolliryhmään (eli niihin, jotka kuluttavat RUSF-viitestandardia). Kohdennettua Ultra Performance -nestekromatografia-massaspektrometriaa (UPLC-MS) ja kaasukromatografia-massaspektrometriaa (GC-MS) käytetään erityisesti kiinnostavien analyyttien profiloimiseen plasma- ja/tai ulostenäytteissä, mukaan lukien sappihapot ja lyhytketjuiset rasvahapot (SCFA:t). ); mitokondrioiden toiminnan markkerit (esim. p-hydroksibutyraatti, asyylikarnitiinit/asyyliCoA:t, TCA-syklin välituotteet); aminohapot seerumissa sekä ulostenäytteet [haaraketjuiset aminohapot, tryptofaani ja tryptofaanimetaboliitit, jotka liittyvät kasvuun ja tulehdustilaan, mukaan lukien bakteerien tryptofaaniaineenvaihdunnan tuottamat (esim. indolietikkahappojohdannaiset)]. Lineaarisen kasvun (esim. kasvuhormoni ja IGF-1), energiankäytön (insuliini, leptiini) ja luubiologian keskeiset välittäjät/biomarkkerit [IL-6 (interleukiini-6), osteoprotegeriini, tyypin I kollageenin C-terminaalinen peptidi (CTX, osteoklastien aktiivisuuden/luun resorption markkeri) ja tyypin 1 prokollageenin aminoterminaalinen propeptidi (P1NP, osteoblastiaktiivisuuden/luunmuodostuksen markkeri)] ja systeeminen tulehdus (CRP, AGP) kvantifioidaan käyttämällä vakiintuneita ELISA/Luminex-määritykset. Veren proteiinit tunnistetaan SOMAlogic-skannauksella, jonka avulla voidaan tunnistaa yli 1300 erilaista proteiinia. Edellisessä Dhakassa tehdyssä Pre-POC-tutkimuksessamme SAM-sairaiden lasten plasmanäytteillä tehty proteominen tutkimus on jo osoittanut useita merkittäviä ja kliinisesti merkittäviä yhteyksiä tiettyjen proteiinien ja kliinisten fenotyyppien välillä käyttämällä SOMAlogic-skannausta.

Kerättyjä tietoja käytetään ihmisten ulostenäytteiden valitsemiseen siirrettäviksi mikrobittomiin eläimiin Gordon Labissa St Louisissa; näitä eläimiä, joille ruokitaan ihmisten mikrobiotan luovuttajien ruokavaliota, käytetään edelleen karakterisoimaan mekanismeja, jotka yhdistävät MDCF-prototyyppejä, suoliston mikrobiota ja isännän fysiologiaa/aineenvaihduntaa. Lisäksi näitä plasman ja ulosteen biomarkkereita käytetään määrittämään, että MDCF edistää mikrobiotan kypsymättömyyden korjaamista ja parantaa lasten biologista tilaa.

Näytteen koon laskeminen Eri MDCF:itä edeltävässä POC-tutkimuksessa MDCF2:ta saaneiden lasten painon ja pituuden Z peruspistemäärä oli -2,2 ja kuukauden lisäyksen jälkeen -1,7. Jos sen katsotaan olevan WLZ -2 lähtötasolla ja -1,7 loppuviivalla, yhdistetty SD (standardipoikkeama) 0,53:ksi, otoskoko on 49 kummassakin haarassa 80 % teholla ja 5 % merkitsevyystasolla.

20 %:n poistuminen edellyttää 62 lapsen ilmoittautumista kumpaankin haaraan. Siksi primaarisessa MAM-tutkimuksessa 62 lasta saa MDCF2:ta ja 62 lasta riisilinssi RUSF:ää.

Tietojen analyysi Kahta MAM-lasten ryhmää verrataan lähtötilanteessa ja eri ajankohtina. Kaikkia kohdassa Plasma- ja ulostenäytteiden analyysit mainittuja analyyttejä verrataan MDCF2- ja RUSF-ryhmien välillä.

Data Safety Monitoring Plan (DSMP) Tämän tutkimuksen tiedonkeruutyökalut sisältävät tapausraporttilomakkeita, laboratoriolaskentataulukoita ja lähdedokumentaatiota. Täydelliset lähdedokumentaatiot (tutkimuskäynnit, laboratorioraportit jne.) säilytetään jokaisesta tutkimukseen osallistujasta yksittäisissä tutkimuskaavioissa. Kaikki laboratorionäytteet, raportit, tutkimustiedonkeruu ja hallinnolliset lomakkeet merkitään koodatulla numerolla tutkimukseen osallistujien luottamuksellisuuden säilyttämiseksi ja seurannan mahdollistamiseksi koko tutkimuksen ajan.

Lomakkeet, luettelot, lokikirjat, ajanvarauskirjat ja kaikki muut tiedot, jotka linkittävät tutkimukseen osallistujan ID-numerot muihin tunnistetietoihin, tallennetaan erilliseen lukittuun tiedostoon alueelle, jolla on rajoitettu pääsy. Kaikki tutkimukseen osallistujia koskevat tiedot säilytetään salasanalla suojatuissa tietokonetiedostoissa tai lukituissa arkistokaapeissa, joihin vain valtuutettu tutkimushenkilöstö pääsee käsiksi. Kaaviotietoja ja tutkimustietueiden tietoja ei julkaista ilman tutkimukseen osallistujan vanhemmilta saatua kirjallista lupaa. icddr,b:n tutkimuksen arviointikomitean ja eettisen arviointikomitean edustajat voivat kuitenkin tarkistaa asiakirjat.

Tutkimuksen tutkijat ovat vastuussa täydellisen ja tarkan dokumentaation varmistamisesta tutkimukselle ja jokaiselle tutkimukseen osallistujalle, mukaan lukien: potilastiedot, kunkin tutkimukseen osallistujan tutkimuksen läpi edistymistä koskevat tiedot, laboratorioraportit, tapausraporttilomakkeet (CRF), allekirjoitetut tietoisen suostumuksen lomakkeet, kirjeenvaihto IRB:n (Institutional Review Board) kanssa, haittatapahtumaraportit ja tiedot osallistujan keskeyttämisestä ja tutkimuksen loppuun saattamisesta. Valtuutettu tutkimushenkilöstö tallentaa kaikki vaaditut tiedot selvästi ja tarkasti CRF:iin. Vain nimetty tutkimuspaikan henkilökunta, joka on saanut asianmukaisen koulutuksen, tallentaa tai muuttaa tietoja CRF:ään. Tutkijat ovat vastuussa tietojen hankinnasta ja CRF:iin tallennettujen tietojen laadusta. Tietojen syöttö ja hallinta suoritetaan osoitteessa icddr,b.

Eettinen vakuutus ihmisoikeuksien suojelemiseksi Tutkimus aloitetaan saatuaan IRB:n hyväksynnän icddr,b:n tutkimuksen arviointikomitealta ja eettiseltä arviointikomitealta. Ennen tutkimukseen ilmoittautumista otetaan tutkimukseen osallistuneiden laillisen huoltajan tietoinen kirjallinen suostumus. Tutkimukseen osallistujat yksilöivien tietojen yksityisyys, nimettömyys ja luottamuksellisuus säilyvät tiukasti. Ilmoittautumisen ja muiden opintojen yhteydessä otetut henkilötodistukset säilytetään lukossa. Kukaan muu kuin tutkimushenkilöstö ei pääse käsiksi henkilötietoihin ja muihin arkaluonteisiin tietoihin.

Tämän protokollan odotettavissa olevat riskit/haittatapahtumat liittyvät verinäytteiden keräämiseen, ulostenäytteiden keräämiseen ja mikrobiotaan suunnatun lisäravinnon syöttämiseen. Mikään näistä ei ole vakava haittatapahtuma (SAE). Verenottoon liittyvät odotetut haittatapahtumat (EAE) ovat seuraavat:

• epämukavuutta
• kipu
• infektion tuominen
• verenvuotoa

• pyörtymistä tai mustelmia

  • Varotoimia ryhdytään infektion välttämiseksi desinfioimalla laskimopistokohta ja käyttämällä steriilejä välineitä
  • Verenvuodon ja mustelmien riski minimoidaan käyttämällä välitöntä painetta laskimopunktion jälkeen
  • Osallistuja (lapsi) on istuma- tai makuuasennossa verenoton aikana pyörtymisen aiheuttamien vammojen välttämiseksi

Kaikki mahdolliset haittatapahtumat hoidetaan asianmukaisesti. Näitä ovat:

• Oksentelu
• Ripuli
• Ihottuma
• Ruoka-allergian aiheuttama urtikaria
• Vatsan turvotus
• Vatsakipu Haittatapahtumien arviointi Sekä vakavien että ei-vakavien haittatapahtumien vakavuus arvioidaan; suhde tutkimukseen osallistumiseen; toteutetut toimet; ja tulokset. Kaikista SAE-tapauksista ilmoitetaan icddr,b:n ERC:lle 24 tunnin kuluessa siitä, kun sivusto on tietoinen tapahtumasta, ja se puolestaan ​​jaetaan sponsorille. Tämä tapahtuu suoraan puhelimitse, faksilla tai sähköpostitse.

Jokainen AE-arvioinnin luokka koodataan seuraavien luokitusjärjestelmien mukaisesti:

Vakavuus:

1. Lievä
2. Kohtalainen
3. Vakava

Suhde opintoihin osallistumiseen:

1. Ehdottomasti liittyvä: Selkeä ajallinen assosiaatio, ei muuta mahdollista syytä
2. Mahdollisesti liittyvät: vähemmän selkeä ajallinen yhteys, muut syyt mahdollisia
3. Ei liity: Tutkimuksesta riippumatta on olemassa näyttöä siitä, että tapahtuma liittyy ehdottomasti toiseen etiologiaan

Toiminnot:

Ei mitään Korjaava hoito (vaatii useampi kuin yksi annos lääkettä) Poistettu pysyvästi tutkimukseen osallistumisesta Sairaalahoito Muu eläinten käyttö Ei sovellettavissa Yhteistyöjärjestelyt Tämä projekti on Washingtonin yliopiston lääketieteellisen korkeakoulun tutkijoiden ja Kansainvälisen ripulitautien tutkimuskeskuksen välinen yhteistyö , Bangladesh (icddr,b). Kliininen työ, kenttätoiminta suoritetaan Dhakassa, Bangladeshissa, päätutkijan suorassa valvonnassa, kun taas laboratorioanalyysit tehdään Gordon Labissa Washingtonin yliopistossa St. Louisissa. Kaikilla tutkimusyksiköillä ja yhteistyössä toimivilla tutkijoilla on pitkä historia kansainvälisestä yhteistyöstä. Kaikki tutkijat ovat kommunikoineet tämän projektin kehittämisen aikana ja ovat sitoutuneet sen onnistuneeseen toteuttamiseen.

Käytettävissä olevat tilat icddr,b:ssä on hyvin varustettu elintarvikelaboratorio, joka helpottaa ruokavalioreseptien valmistelua. Useita projektitoimistoja sijaitsee Mirpurissa. Vielä tärkeämpää on, että yhteisön kanssa on luotu erinomainen suhde. Yhteisön eliitti ja vanhimmat kutsutaan joka vuosi levityskokoukseen, jotta he ovat tietoisia tehdystä tutkimuksesta.

Genomitieteiden keskus, Washingtonin yliopisto St. Louisissa: