Sperimentazione clinica basata sulla comunità con alimenti complementari diretti dal microbiota (MDCF) realizzati con ingredienti alimentari disponibili localmente per la gestione dei bambini con malnutrizione acuta moderata primaria

Sfondo:

La malnutrizione acuta moderata (MAM), uno dei principali problemi di salute globale, è definita come deperimento (cioè peso per altezza compreso tra < -2 e -3 punteggi Z degli standard di crescita infantile dell'OMS) e/o circonferenza medio-superiore del braccio (MUAC) maggiore o uguale a 115 mm e inferiore a 125 mm. Secondo il Global Nutrition Report 2017, l'8% o 52 milioni di bambini sotto i cinque anni erano gravemente malnutriti a livello globale nel 2016. L'arresto della crescita ha colpito il 23% o 155 milioni di bambini. Circa un bambino su 6 sotto i 5 anni in Asia meridionale soffriva di MAM nel 2013 (cioè 17%). Questi bambini sono a maggior rischio di malnutrizione acuta grave (SAM) e hanno un rischio tre volte superiore di mortalità per malattie trasmissibili comuni rispetto ai coetanei ben nutriti. Il Bangladesh ha uno dei più alti livelli di malnutrizione infantile al mondo. Secondo il Bangladesh Demographic Health Survey (BDHS) 2014, la prevalenza di arresto della crescita tra i bambini sotto i cinque anni è del 36%, tra questi il ​​12% soffre di arresto della crescita grave (punteggio Lunghezza per età Z, LAZ <-3). Circa il 15% dei bambini è magro (punteggio Z peso per lunghezza, WLZ <-2); più di 2 milioni di bambini soffrono di MAM, mentre il 3% o 450.000 bambini soffrono della forma mortale di SAM. La malnutrizione costa al Bangladesh circa 1 miliardo di dollari all'anno. Secondo le raccomandazioni dell'OMS, i neonati e i bambini di età compresa tra 6 e 59 mesi con MAM devono consumare alimenti ricchi di nutrienti per soddisfare i loro bisogni extra di aumento di peso e altezza e recupero funzionale. Attualmente non ci sono raccomandazioni basate su prove sulla composizione degli alimenti supplementari usati per trattare i bambini con MAM. In situazioni di carenza alimentare, sono stati utilizzati alimenti supplementari per curare i bambini con malnutrizione acuta moderata. Gli interventi per affrontare la sottonutrizione dovrebbero quindi includere una forte componente della gestione del MAM. La prevenzione del MAM dovrebbe essere presa in considerazione nella sicurezza alimentare e in altre strategie di sviluppo poiché la situazione diventa critica nelle popolazioni in cui l'insicurezza alimentare è dilagante. L'insicurezza alimentare è diventata una preoccupazione mondiale a causa del crescente numero di persone che rimangono denutrite, pari a 842 milioni, circa il 12% della popolazione mondiale totale. Dall'indagine nazionale sullo stato dei micronutrienti in Bangladesh, che abbiamo condotto nel 2011-12, la grave insicurezza alimentare è stata riscontrata più comunemente negli insediamenti delle baraccopoli (17,2%), rispetto al 12,3% a livello nazionale, al 12% nelle aree rurali e al 12,4% nelle aree urbane del paese. Poiché l'insicurezza alimentare non può essere superata abbastanza facilmente, è quindi importante sviluppare interventi che dipendano da ingredienti alimentari disponibili localmente e che siano in grado di sfruttare il potere benefico del microbiota intestinale sulla crescita di neonati e bambini.

Uno dei principali fattori che limitano l'impatto dell'intervento nutrizionale è l'incapacità dei bambini malnutriti di aumentare la loro assunzione per soddisfare le crescenti richieste metaboliche. Negli studi collaborativi tra icddr,b e il Gordon Lab della Washington University di St. Louis durante la fase Jump start del progetto Breast Milk, Microbiota and Immunity (BMMI), abbiamo applicato Random Forests, un approccio basato sull'apprendimento automatico, per set di dati batterici 16S rRNA (acido ribonucleico ribosomiale) generati da campioni fecali mensili ottenuti da una coorte di nascita di bambini che vivono in una baraccopoli urbana di Dhaka, in Bangladesh. Questi bambini hanno mostrato una crescita costantemente sana (WLZ -0,32+0,98). Sono stati identificati ceppi batterici la cui rappresentazione proporzionale definisce un microbiota intestinale sano mentre si assembla durante i primi 2-3 anni postnatali. In uno studio clinico randomizzato presso l'icddr,b di due alimenti terapeutici (alimenti terapeutici pronti all'uso importati [RUTF (Ready to Use Therapeutic Food), Plumpy'Nut] rispetto a Khichuri e Halwa a base di riso/lenticchie preparati localmente) in Bangladesh bambini con malnutrizione acuta grave (SAM), è stato osservato che l'immaturità del microbiota è migliorata in modo incompleto e solo transitorio, con bambini che rimangono marcatamente rachitici e sottopeso per tutto il periodo di follow-up. Anche i bambini del Bangladesh con MAM hanno mostrato una significativa immaturità del microbiota, sebbene meno grave dei bambini con SAM. L'immaturità del microbiota funge quindi da potenziale biomarcatore per identificare i bambini a rischio di denutrizione e per monitorare le strategie di trattamento e prevenzione.

I ricercatori hanno recentemente sviluppato alimenti terapeutici pronti all'uso utilizzando ingredienti alimentari disponibili localmente: riso, lenticchie e ceci che sono culturalmente rilevanti e accettabili. Hanno scoperto attraverso un RCT (Randomized Controlled Trial) in doppio cieco che i RUTF a base di ceci e riso-lenticchie erano efficaci quanto i RUTF commerciali a base di arachidi e ben accettati dai bambini con SAM. Attraverso una combinazione dei suddetti RCT e studi clinici traslazionali, hanno identificato la crescita che promuove il microbiota benefico discriminante per età e gli ingredienti alimentari disponibili localmente che supportano la proliferazione di questi microbioti benefici. Inoltre, i risultati di precedenti studi condotti su animali gnotobiotici presso il Washington University Center for Genome Science ci hanno portato a suggerire che vale la pena studiare una combinazione di ingredienti alimentari (ceci, farina di soia, arachidi e banana verde) rispetto all'impatto della dieta su stimolare la proliferazione del microbiota discriminatorio della crescita, nonché i costi e la sostenibilità. Per valutare il grado in cui i risultati ottenuti dai modelli gnotobiotici di topo e maialino si traducono nell'uomo, i ricercatori hanno recentemente eseguito uno studio approvato da RRC (Research Review Committee) e ERC (Ethecial Review Committee), protocollo icddr,b (PR-16099) ' Studi clinici pre-prova di concetto per ottimizzare i prototipi di alimenti complementari diretti dal microbiota al piombo (MDCF) per la loro capacità di riparare l'immaturità del microbiota e stabilire la loro accettabilità organolettica 'e ha completato con successo lo studio. Questo studio è stato progettato per testare gli effetti di tre prototipi di MDCF prodotti localmente (MDCF-1, MDCF-2 e MDCF-3) e di un RUSF a base di riso-lenticchie prodotto localmente. L'obiettivo di questo studio pilota era dimostrare una pre-prova di concetto secondo cui alcuni alimenti complementari avrebbero un effetto benefico sui bambini piccoli che soffrono di malnutrizione acuta moderata, stimolando la proliferazione di particolari membri del microbiota intestinale che sono noti per la loro capacità di promuovere la crescita effetto. In quello studio pilota hanno studiato il punteggio Z del microbiota per età e l'impatto della proliferazione di membri buoni del microbiota intestinale su determinati sistemi corporei. I risultati della sperimentazione pilota Pre-POC hanno mostrato in modo conclusivo che uno dei tre alimenti complementari diretti al microbiota, vale a dire (MDCF-2; composto da una combinazione di ceci, farina di soia, arachidi, banana verde, olio, zucchero e micronutrienti) era associato a aumento dei livelli di alcuni amminoacidi, che hanno un ruolo chiave nello sviluppo delle ossa lunghe, sviluppo del cervello e aumento della produzione di IGF-1. Ciò è stato fatto utilizzando la scansione SomaLogic all'avanguardia basata sull'aptamero del DNA. E i risultati suggeriscono che questo candidato MDCF-2 è efficace nello stimolare la crescita dei membri che promuovono la crescita del microbiota intestinale, ad esempio Faecalibacterium prausnitzii. Pertanto, MDCF-2 promuove il microbiota intestinale che induce l'ormone fattore di crescita insulino-simile 1 (IGF-1), che promuove la crescita e il rimodellamento osseo.

Sulla base di queste prove, gli investigatori vorrebbero ora condurre uno studio clinico molto più ampio utilizzando l'MDCF più promettente che è l'MDCF-2 con l'end point primario rappresentato dalla crescita lineare. Questo processo sarebbe su bambini con MAM primario.

Disegno e metodi della ricerca Gli investigatori condurranno una sperimentazione clinica tra bambini di 12-18 mesi con MAM primaria (WLZ <-2 a -3).

Disegno dello studio: studio di intervento controllato randomizzato. Luogo dello studio: Questo studio sarà condotto a Bauniabadh, clinica RADDA MCH-FP (Salute materna e infantile - Pianificazione familiare) nell'area di Mirpur e Gabtoli della città di Dhaka, e possibilmente presso l'Unità nutrizionale speciale gestita da Terre des Hommes a Kurigram.

Partecipanti allo studio: I partecipanti allo studio saranno bambini di 12-18 mesi di entrambi i sessi con MAM (WLZ <-2 a -3).

Screening iniziale e iscrizione: i bambini saranno sottoposti a screening e arruolati attraverso sondaggi domestici da parte degli assistenti di ricerca sul campo (FRA) seguendo criteri di inclusione prestabiliti. Soddisfacendo i criteri di iscrizione e dopo aver ricevuto il consenso alla partecipazione allo studio da parte dei genitori o dei tutori legali, i bambini con la rispettiva madre/badante saranno iscritti e assegnati in modo casuale a uno dei due bracci secondo numeri casuali generati dal computer. Il codice del tipo di dieta assegnato sarà conservato in buste opache chiuse per ogni individuo, e sarà aperto solo quando l'assistente firmerà il modulo di consenso.

Disegno dello studio:

Braccio 1 - RUSF a base di riso-lenticchie (motivazione: standard di cura di riferimento per MAM; basato sulla conoscenza dei suoi effetti sul microbiota intestinale o sull'immaturità del microbiota) Braccio 2 - MDCF2 (Microbiota Directed Complementary Food 2) con quattro ingredienti alimentari complementari (motivazione : piombo con evidenza da studi clinici pre-POC per ottimizzare i prototipi di alimenti complementari diretti dal microbiota del piombo per la loro capacità di riparare l'immaturità del microbiota e gli effetti positivi sulla crescita) Raccolta di campioni fecali Campioni fecali settimanali (1-2 g) saranno raccolti entro 30 minuti dalla escrezione (a casa e trasportata all'icddr,b) utilizzando il dry shipper contenente azoto liquido. I campioni saranno conservati a -80°C prima di essere inviati al Gordon Lab per l'analisi della maturità del microbiota (misurata prima, durante e dopo la cessazione del trattamento con MDCF e RUSF) e la valutazione basata sulla PCR (Polymerase Chain Reaction) del carico di enteropatogeni nelle feci campioni (misurati prima e dopo il trattamento con MDCF).

Saranno raccolti 1-2 g di campioni fecali da ogni bambino all'arruolamento, settimanalmente durante il 1° mese di intervento, e 4 settimanali durante il 2° e 3° mese di intervento e alla fine della fase post-intervento. Supponendo 62 partecipanti allo studio per braccio, in questo studio verranno raccolti un totale di 992 campioni fecali. 2 g di campioni fecali saranno raccolti dalle madri al momento dell'arruolamento.

Raccolta di campioni di urina Saranno raccolti 2 ml di campioni di urina da ciascun bambino al momento dell'arruolamento, una settimana dopo l'arruolamento e mensilmente una volta nelle fasi di intervento e post-intervento. Supponendo 62 partecipanti allo studio per braccio, in questo studio verranno raccolti un totale di 744 campioni di urina. 5 ml di campioni di urina saranno raccolti dalle madri al momento dell'arruolamento.

Raccolta di campioni di sangue Saranno raccolti 2 ml di campioni di sangue ciascuno da ciascun bambino prima dell'intervento, alla fine del primo mese di intervento e subito dopo il completamento dell'intervento. In questo studio verranno raccolti un totale di 372 campioni di plasma. 5 ml di campioni di sangue saranno raccolti dalle madri al momento dell'arruolamento.

Lo stato nutrizionale materno è associato allo stato nutrizionale del bambino, come mostrato dai risultati del nostro studio MAL-ED (malnutrizione e malattie enteriche) in otto paesi. Inoltre, i fattori neonatali e altri fattori materni sono stati determinanti precoci di minore lunghezza per età e il loro contributo è rimasto importante per tutti i primi 24 mesi di vita.9 Gli altri fattori materni, ritengono i ricercatori, includerebbero il microbiota intestinale materno e il profilo aminoacidico del sangue materno. Le iniziative per affrontare l'arresto della crescita infantile dovrebbero anche prendere in considerazione il miglioramento della composizione di alimenti complementari (ad es. proteine ​​più elevate) e strategie per ridurre l'esposizione ai patogeni intestinali. In quanto tali, registreranno l'altezza e il peso materno. Al fine di comprendere lo stato biologico di nutrizione della madre, alla madre verranno richiesti campioni di feci, sangue e urine. Questi campioni saranno analizzati per il microbiota intestinale e la proteomica e i risultati saranno correlati con quelli dei bambini arruolati.

Sessioni di alimentazione I bambini e le madri/tutori saranno invitati a recarsi presso i centri nutrizionali istituiti presso i siti preferibilmente tra le 9-11 e le 15-17 del giorno 1. Alle mamme sarà richiesto di non somministrare cibo e latte materno nelle 2 ore che precedono l'orario del pasto osservato. Al bambino verranno offerti 25 grammi di MDCF o RUSF come deciso dall'assegnazione casuale in ciascuno dei due pasti tra le 9-11 e le 15-17. Alle madri verrà chiesto di nutrire con il cucchiaio le diete pre-pesate ai loro figli fino a quando non si rifiuta di mangiare, come descritto di seguito. Dopo una pausa di due minuti, la stessa dieta verrà proposta una seconda volta fino a quando non si rifiuterà nuovamente. Dopo una seconda pausa di due minuti, la dieta verrà proposta una terza volta fino a quando non verrà nuovamente rifiutata. Dopo questo terzo rifiuto, l'episodio alimentare sarà considerato come 'terminato'. La durata dell'alimentazione (esclusi i 'periodi di riposo' intermedi) verrà registrata dal cronometro e verrà annotata la durata totale dell'alimentazione. Questo episodio di alimentazione durerà per un massimo di 60 minuti. Verranno forniti anche i volumi misurati di acqua naturale e verrà misurata la quantità di acqua assunta durante questo periodo di pasto di 60 minuti. L'episodio di alimentazione avverrà sotto la diretta supervisione di personale dello studio addestrato. Si considererà che i bambini rifiutano un'ulteriore assunzione se allontanano la testa dal cibo, piangono, chiudono la bocca o stringono i denti, o si agitano, sputano il cibo o si rifiutano di deglutire. La quantità di MDCF/RUSF effettivamente ingerita sarà calcolata sottraendo l'avanzo dalla quantità offerta. Verranno forniti tovaglioli prepesati; qualsiasi alimento rigurgitato, vomitato o versato verrà tamponato, pesato e sottratto dalla quantità offerta. Verranno analizzate la quantità di cibo consumato (g), l'energia (kcal) e la categoria di accettabilità. I bambini arruolati saranno monitorati quotidianamente dagli assistenti di ricerca sul campo per eventuali effetti collaterali/eventi avversi (ad es. eruzione cutanea, orticaria dovuta ad allergia alimentare o qualsiasi cambiamento significativo dello stato clinico) per una settimana. Se si osservano effetti collaterali/eventi avversi, saranno trattati secondo lo standard di cura. Verrà seguita una procedura di produzione standardizzata per controllare la qualità di RUSF e MDCF seguendo il protocollo standard internazionale. RUSF e MDCF saranno preparati presso il laboratorio di trasformazione alimentare. La preparazione del cibo in diverse fasi, ovvero tostatura, riduzione delle dimensioni delle particelle, miscelazione omogenea e fornitura ai centri nutrizionali sarà monitorata dai ricercatori dell'icddr,b. Il cibo verrà preparato ogni giorno per garantire che non si verifichino contaminazioni impreviste e perdite di nutrienti durante la preparazione. Sebbene gli ingredienti crudi saranno acquistati con molta cura dal mercato locale e conservati in quantità ragionevoli, gli investigatori prepareranno, distribuiranno e daranno da mangiare ai bambini lo stesso giorno in cui vengono preparati MDCF e RUSF. Ad ogni bambino verranno offerti 25 g della dieta due volte al giorno presso il centro nutrizionale per le prime 4 settimane. Nel mese successivo, al bambino verranno offerti 25 g della dieta presso il centro di alimentazione e verranno forniti altri 25 g in un contenitore pulito per l'alimentazione a casa. Nel terzo mese, due contenitori separati contenenti 25 g di dieta saranno forniti ogni giorno a ciascun bambino iscritto a casa del partecipante.

In questo studio lo stato nutrizionale sarà valutato attraverso l'antropometria, confrontandolo con gli standard di riferimento della crescita dell'OMS. All'inizio dello studio si cercheranno informazioni sulle caratteristiche demografiche (ricchezza delle famiglie, standard abitativo, struttura familiare e caratteristiche dei genitori ecc.) e le FRA registreranno il peso dei bambini utilizzando una bilancia digitale con precisione 2g (Seca, modello 728, Germania), lunghezza (utilizzando l'infantometro, Seca, modello 416, Germania) e circonferenza mediana della parte superiore del braccio al mm più vicino (utilizzando un nastro di inserimento non estensibile). L'antropometria verrà eseguita secondo le procedure standard e tutte le misurazioni verranno effettuate tre volte e quella centrale verrà registrata.

Tutti gli interventi in ciascuno studio saranno somministrati ai bambini presso la clinica sanitaria Mirpur/clinica RADDA o a Kurigram. Alle madri/tutori primari verrà consigliato di mantenere le attuali pratiche dietetiche e di allattamento del loro bambino.

Gli investigatori completeranno l'arruolamento entro 12 mesi e il follow-up e l'analisi dei dati entro altri 6 mesi. Tuttavia, questo studio su MAM primario continuerà contemporaneamente all'altro studio clinico su Post SAM-MAM che avrà una durata più lunga.

Il reclutamento, lo screening e il censimento del consenso, lo screening e l'arruolamento dei partecipanti allo studio saranno effettuati nei bacini di utenza dei siti nella città di Dhaka ea Kurigram. I genitori di bambini che soddisfano i criteri MAM (per lo studio Primary MAM) saranno contattati per l'arruolamento nello studio. Un assistente per la ricerca sul campo spiegherà lo studio in dettaglio, risponderà a qualsiasi domanda dei genitori e inviterà i genitori a iscrivere il bambino allo studio.

All'inizio dello studio si cercheranno informazioni sulle caratteristiche demografiche (ricchezza delle famiglie, standard abitativo, struttura familiare e caratteristiche dei genitori, ecc.) e le FRA registreranno il peso dei bambini utilizzando una bilancia digitale con precisione di 2 g, lunghezza (utilizzando l'infantometro) e la circonferenza medio-superiore del braccio al mm più vicino. Ai partecipanti allo studio verrà chiesto di venire direttamente al centro nutrizionale per la terapia nutrizionale.

Preparazione di MDCF 2 e RUSF Sulla base di combinazioni compatibili di ingredienti alimentari complementari identificati nello studio Pre-POC sopra descritto, MDCF2 e riso-lenticchie RUSF saranno prodotti presso l'impianto di trasformazione alimentare icddr,b a Mirpur e a Kurigram (a essere stabilito in entrambi i luoghi) in quantità sufficiente per lo studio clinico. Le due diete saranno abbinate in densità energetica e contenuto di micronutrienti. La densità energetica dell'MDCF è di 125 kcal/25 g (per porzione) e la distribuzione calorica dovrebbe essere del 45-50% dai grassi e dell'8-10% dalle proteine. Gli esperimenti di sviluppo dei prototipi di MDCF e la valutazione delle proprietà organolettiche sono stati condotti durante la sperimentazione clinica Pre-POC. Dopo aver ricevuto le materie prime (riso/lenticchie/ceci) si estrarranno le materie estranee/semi o semi (se ce ne sono), e poi in una padella aperta si arrostiranno le materie prime. La temperatura sarà mantenuta a 120-130°C per la tostatura. Di solito occorrono 8-10 minuti per tostare 100 g di ciascuna materia prima. L'agitazione continua è essenziale per garantire la tostatura dei singoli semi/chicchi. Dopo il completamento della tostatura sarà tenuto da parte per il raffreddamento e poi sarà macinato. Infine verrà aggiunta la polvere premiscelata prepesata. La lavorazione della banana verde intera per l'inclusione in MDCF2 è diversa dagli altri ingredienti. Le banane verdi con la buccia verranno poste in una pentola profonda in acqua bollente (100°C-110°C) e bollite per circa 17-20 minuti fino a quando saranno cotte e tenere. La buccia della banana verde verrà staccata e la parte bianca commestibile verrà prelevata e grattugiata a pezzetti. Quindi verranno presi in una pentola e lasciati raffreddare. I pezzetti di banana verranno schiacciati con un cucchiaio/frantoio a mano. Verranno registrati i pesi di tutti gli altri ingredienti. Le ricette saranno prodotte in piccoli lotti mescolando tutti gli ingredienti in un frullatore elettrico. Una piccola quantità (1%) di lecitina di soia deve essere aggiunta alla ricetta per migliorare la consistenza e prevenire la separazione dell'olio.

Antropometria L'età del bambino sarà verificata sulla base della documentazione (certificato di nascita o scheda di immunizzazione, se disponibile) o del rapporto del caregiver sulla data di nascita del bambino. La lunghezza sarà misurata con un infantometro sensibile a 0,1 cm. Il peso corporeo sarà misurato con una bilancia sensibile a 2g. I punteggi Z per lunghezza per età (LAZ), peso per lunghezza (WLZ) e peso per età (WAZ) saranno calcolati seguendo gli standard di crescita del Multicentre Growth Reference Study (MGRS) dell'OMS (Organizzazione mondiale della sanità). L'edema verrà esaminato premendo la parte superiore di entrambi i piedi per 3 secondi. La circonferenza medio-superiore del braccio (MUAC) sarà misurata utilizzando il nastro MUAC (Regno Unito). La standardizzazione regolare delle apparecchiature di misurazione sarà effettuata utilizzando standard.

Analisi di campioni di plasma e feci I campioni di plasma raccolti da questo studio saranno inviati al laboratorio del dottor Jeffrey Gordon nel Center for Genome Sciences and Systems Biology presso la Washington University di St. Louis. Saranno utilizzati metodi avanzati basati sulla spettroscopia di massa e sull'analisi immunologica per ottenere nuove conoscenze sul ruolo dell'immaturità del microbiota intestinale e sugli effetti del tentativo di riparazione acuta di questa immaturità con alimenti complementari diretti dal microbiota di piombo (MDCF) su biomarcatori e mediatori di una crescita sana . Verranno effettuati confronti con il gruppo di controllo (ovvero quelli che consumano lo standard RUSF di riferimento). Saranno utilizzate la cromatografia liquida ultra performante-spettrometria di massa (UPLC-MS) e la gascromatografia-spettrometria di massa (GC-MS) per profilare analiti di interesse specifico in campioni di plasma e/o fecali, inclusi gli acidi biliari e gli acidi grassi a catena corta (SCFA) ); marcatori della funzione mitocondriale (ad esempio, β-idrossibutirrato, acilcarnitine/acilCoA, intermedi del ciclo TCA); amminoacidi nel siero più campioni fecali [amminoacidi a catena ramificata, triptofano e metaboliti del triptofano correlati alla crescita e allo stato infiammatorio, compresi quelli prodotti dal metabolismo batterico del triptofano (ad es. derivati ​​dell'acido indolacetico)]. Principali mediatori/biomarcatori della crescita lineare (ad es. ormone della crescita e IGF-1), utilizzo dell'energia (insulina, leptina) e biologia ossea [IL-6 (Interleuchina-6), osteoprotegerina, il peptide C-terminale del collagene di tipo I (CTX, un marcatore di attività osteoclastica/riassorbimento osseo), e il propeptide ammino-terminale del procollagene di tipo 1 (P1NP, un marcatore di attività osteoblastica/formazione ossea)], e l'infiammazione sistemica (CRP, AGP) saranno quantificati utilizzando Saggi ELISA/Luminex. Le proteine ​​nel sangue saranno identificate utilizzando la scansione SOMAlogic che permette l'identificazione di più di 1300 diverse proteine. Lo studio proteomico condotto su campioni di plasma di bambini con SAM nel nostro precedente studio Pre-POC svolto a Dhaka ha già dimostrato una serie di associazioni significative e clinicamente rilevanti tra determinate proteine ​​e fenotipi clinici utilizzando la scansione SOMAlogic.

Le informazioni raccolte saranno utilizzate per selezionare campioni fecali umani per il trapianto in animali privi di germi nel Gordon Lab di St Louis; questi animali, che saranno nutriti con le diete dei loro donatori di microbiota umano, saranno utilizzati per caratterizzare ulteriormente i meccanismi che collegano i prototipi di MDCF, il microbiota intestinale e la fisiologia/metabolismo dell'ospite. Inoltre, questi biomarcatori plasmatici e fecali saranno utilizzati per determinare che l'MDCF promuove la riparazione dell'immaturità del microbiota e migliora lo stato biologico nei bambini.

Calcolo della dimensione del campione Nello studio pre-POC di diversi MDCF, il punteggio Z del peso per lunghezza al basale dei bambini che hanno ricevuto MDCF2 era -2,2 e dopo un mese di integrazione era -1,7. Se si considera il WLZ -2 al basale e -1,7 alla linea di fondo, SD aggregata (deviazione standard) pari a 0,53, la dimensione del campione è 49 in ciascun braccio all'80% di potenza e al 5% di significatività.

Con il 20% di attrito, 62 bambini dovranno essere iscritti in ciascun braccio. Pertanto, per lo studio Primary MAM, 62 bambini riceveranno MDCF2 e 62 bambini riceveranno Rice-lentil RUSF.

Analisi dei dati I due gruppi di bambini con MAM saranno confrontati al basale e in momenti diversi. Tutti gli analiti menzionati nella sezione "Analisi di campioni plasmatici e fecali" saranno confrontati tra i gruppi MDCF2 e RUSF.

Piano di monitoraggio della sicurezza dei dati (DSMP) Gli strumenti di raccolta dei dati per questo studio includeranno moduli di segnalazione di casi, fogli di lavoro di laboratorio e documentazione di origine. La documentazione completa della fonte (visite di studio, rapporti di laboratorio, ecc.) sarà conservata per ciascun partecipante allo studio nelle singole schede di studio. Tutti i campioni di laboratorio, i rapporti, la raccolta dei dati dello studio e i moduli amministrativi saranno identificati da un numero codificato per mantenere la riservatezza dei partecipanti allo studio e per consentire il monitoraggio durante lo studio.

Moduli, elenchi, registri, agende degli appuntamenti e qualsiasi altro elenco che colleghi i numeri ID (identificazione) dei partecipanti allo studio ad altre informazioni identificative verranno archiviati in un file separato e protetto in un'area ad accesso limitato. Tutte le informazioni relative ai partecipanti allo studio saranno conservate in file di computer protetti da password o in archivi chiusi a chiave a cui può accedere solo il personale autorizzato dello studio. Le informazioni sulla cartella clinica e le informazioni dai registri dello studio non saranno rilasciate senza il permesso scritto dei genitori del partecipante allo studio. Tuttavia, i documenti possono essere esaminati dai rappresentanti del Comitato di revisione della ricerca e del Comitato di revisione etica dell'icddr,b.

I ricercatori dello studio sono responsabili di garantire una documentazione completa e accurata per lo studio e per ciascun partecipante allo studio, tra cui: cartelle cliniche, registrazioni che dettagliano i progressi di ciascun partecipante allo studio attraverso lo studio, rapporti di laboratorio, Case Report Form (CRF), moduli di consenso informato firmati, corrispondenza con IRB (Institutional Review Board), segnalazioni di eventi avversi e informazioni riguardanti l'interruzione dei partecipanti e il completamento dello studio. Tutti i dati richiesti saranno registrati in modo chiaro e accurato nelle CRF dal personale dello studio autorizzato. Solo il personale del sito di studio designato che ha ricevuto una formazione adeguata registrerà o modificherà i dati in un CRF. Gli investigatori sono responsabili dell'approvvigionamento dei dati e della qualità dei dati registrati nelle CRF. L'inserimento e la gestione dei dati avverrà presso icddr,b.

Garanzia etica per la protezione dei diritti umani Lo studio verrà avviato dopo aver ottenuto l'approvazione dell'IRB da parte del comitato di revisione della ricerca dell'icddr,b e del comitato di revisione etica. Prima dell'arruolamento nello studio, il consenso informato scritto sarà preso dal tutore legale dei partecipanti allo studio. La privacy, l'anonimato e la riservatezza dei dati/informazioni che identificano i partecipanti allo studio saranno rigorosamente mantenuti. Le identificazioni personali prese durante l'iscrizione e altre procedure di studio saranno tenute sotto chiave. Nessun altro oltre al personale dello studio avrà accesso alle informazioni di identificazione personale e ad altre informazioni sensibili.

I rischi/eventi avversi attesi per questo protocollo sono quelli relativi alla raccolta di campioni di sangue, alla raccolta di campioni fecali e all'alimentazione di alimenti complementari diretti al microbiota. Nessuno di questi si qualifica come evento avverso grave (SAE). Gli eventi avversi attesi (EAE) correlati al prelievo di sangue sono i seguenti:

• disagio
• dolore
• introduzione dell'infezione
• sanguinamento

• svenimento o lividi

  • Saranno prese precauzioni per evitare l'introduzione dell'infezione disinfettando il sito della venipuntura e utilizzando attrezzature sterili
  • Il rischio di sanguinamento e lividi sarà ridotto al minimo dall'immediata applicazione della pressione dopo la venipuntura
  • Il partecipante (bambino) sarà in posizione seduta o supina durante i prelievi di sangue per evitare lesioni da svenimento

Tutti i possibili eventi avversi saranno trattati in modo appropriato. Questi includeranno:

• Vomito
• Diarrea
• Eruzione cutanea
• Orticaria da allergia alimentare
• Distensione addominale
• Dolore addominale Valutazione degli eventi avversi Sia gli eventi avversi gravi che quelli non gravi saranno valutati per gravità; rapporto con la partecipazione allo studio; Azioni prese; e risultati. Tutti i SAE saranno segnalati all'ERC di icddr,b entro 24 ore dalla conoscenza del sito dell'evento che sarà a sua volta distribuito allo sponsor. Ciò avverrà tramite comunicazione telefonica diretta, fax o e-mail.

Ogni categoria per la valutazione AE sarà codificata secondo i seguenti sistemi di classificazione:

Gravità:

1. Blando
2. Moderare
3. Acuto

Rapporto con la partecipazione allo studio:

1. Sicuramente correlato: chiara associazione temporale, nessun'altra possibile causa
2. Possibilmente correlato: associazione temporale meno chiara, altre cause possibili
3. Non correlato: indipendentemente dallo studio, esistono prove che l'evento è sicuramente correlato a un'altra eziologia

Azioni:

Nessuno Terapia correttiva (richiesta più di una dose di medicinale) Interruzione definitiva dalla partecipazione allo studio Ospedalizzazione Altro uso di animali Non applicabile Accordi di collaborazione Questo progetto è uno sforzo collaborativo tra i ricercatori della Washington University School of Medicine e l'International Center for Diarrheal Disease Research , Bangladesh (icddr,b). Il lavoro clinico e le attività sul campo saranno intraprese a Dhaka, in Bangladesh, sotto la diretta supervisione del Principal Investigator, mentre le analisi di laboratorio saranno condotte presso il Gordon Lab della Washington University di St. Louis. Tutte le unità di ricerca ei ricercatori che collaborano hanno una lunga storia di collaborazioni internazionali. Tutti i ricercatori hanno comunicato durante lo sviluppo di questo progetto e si sono impegnati per la sua implementazione di successo.

Strutture disponibili icddr,b ha un laboratorio di trasformazione alimentare ben attrezzato che faciliterà la preparazione di ricette dietetiche. Un certo numero di uffici di progetto si trovano a Mirpur. Ancora più importante, è stato stabilito un ottimo rapporto con la comunità. L'élite della comunità e gli anziani sono invitati ogni anno a un incontro di divulgazione in modo che siano a conoscenza della ricerca condotta.

Centro per le scienze del genoma, Washington University di St. Louis: