Społecznościowe badanie kliniczne z żywnością uzupełniającą ukierunkowaną na mikroflorę (MDCF) wykonaną z lokalnie dostępnych składników żywności w leczeniu dzieci z pierwotnym umiarkowanym ostrym niedożywieniem

Tło:

Umiarkowane ostre niedożywienie (MAM), główny globalny problem zdrowotny, definiuje się jako wyniszczenie (tj. stosunek wagi do wzrostu pomiędzy < -2 a -3 wartości Z-score Standardów Wzrostu Dziecka WHO) i/lub obwód w połowie ramienia (MUAC) większy lub równy 115 mm i mniejszy niż 125 mm. Według Global Nutrition Report 2017, w 2016 roku na całym świecie 8%, czyli 52 miliony dzieci poniżej piątego roku życia, było poważnie niedożywionych. Karłowatość dotknęła 23% lub 155 milionów dzieci. Około jedno na 6 dzieci w wieku poniżej 5 lat w Azji Południowej cierpiało na MAM w 2013 r. (tj. 17%). Te dzieci są narażone na zwiększone ryzyko ciężkiego ostrego niedożywienia (SAM) i trzykrotnie wyższe ryzyko śmiertelności z powodu powszechnych chorób zakaźnych niż dobrze odżywieni rówieśnicy. Bangladesz ma jedno z najwyższych obciążeń związanych z niedożywieniem wśród dzieci na świecie. Według Bangladesh Demographic Health Survey (BDHS) 2014, częstość występowania zahamowania wzrostu wśród dzieci poniżej piątego roku życia wynosi 36%, a wśród nich 12% cierpi na poważne zahamowanie wzrostu (wynik długości dla wieku Z, LAZ <-3). Około 15% dzieci jest wyniszczonych (wynik Z wagi do długości, WLZ <-2); ponad 2 miliony dzieci cierpi na MAM, a 3% lub 450 000 dzieci cierpi na śmiertelną postać SAM. Niedożywienie kosztuje Bangladesz około miliarda dolarów rocznie. Zgodnie z zaleceniami WHO, niemowlęta i dzieci w wieku 6-59 miesięcy z MAM muszą spożywać pokarmy bogate w składniki odżywcze, aby zaspokoić dodatkowe potrzeby związane z przyrostem masy ciała i wzrostem oraz odbudową funkcji. Obecnie nie ma opartych na dowodach zaleceń dotyczących składu żywności uzupełniającej stosowanej w leczeniu dzieci z MAM. W sytuacjach niedoboru żywności w leczeniu dzieci z umiarkowanym ostrym niedożywieniem stosowano żywność uzupełniającą. Interwencje, które należy uwzględnić w zakresie odżywiania, powinny zatem obejmować silny element zarządzania MAM. Zapobieganie MAM powinno być brane pod uwagę w bezpieczeństwie żywnościowym i innych strategiach rozwojowych, ponieważ sytuacja staje się krytyczna w populacjach, w których szerzy się brak bezpieczeństwa żywnościowego. Brak bezpieczeństwa żywnościowego stał się problemem na całym świecie ze względu na rosnącą liczbę niedożywionych ludzi, która wynosi 842 miliony, czyli około 12% całej światowej populacji. Z krajowego badania stanu mikroskładników odżywczych w Bangladeszu, które przeprowadziliśmy w latach 2011-12, poważny brak bezpieczeństwa żywnościowego stwierdzono najczęściej w osadach slumsów (17,2%), w porównaniu z 12,3% na poziomie krajowym, 12% na obszarach wiejskich i 12,4% w obszarach miejskich kraju. Ponieważ braku bezpieczeństwa żywnościowego nie można dość łatwo przezwyciężyć, ważne jest opracowanie interwencji, które zależą od lokalnie dostępnych składników żywności i są w stanie wykorzystać korzystną moc mikroflory jelitowej na wzrost niemowląt i dzieci.

Jednym z głównych czynników ograniczających wpływ interwencji żywieniowej jest niezdolność niedożywionych dzieci do zwiększenia spożycia w celu zaspokojenia zwiększonego zapotrzebowania metabolicznego. We wspólnych badaniach między icddr,b a Gordon Lab na Washington University w St. Louis podczas fazy szybkiego startu projektu dotyczącego mleka matki, mikroflory i odporności (BMMI), zastosowaliśmy Random Forests, podejście oparte na uczeniu maszynowym, aby bakteryjne zestawy danych 16S rRNA (rybosomalny kwas rybonukleinowy) wygenerowane z comiesięcznych próbek kału uzyskanych od kohorty urodzeniowej dzieci mieszkających w miejskich slumsach Dhaki w Bangladeszu. Dzieci te wykazywały niezmiennie zdrowy wzrost (WLZ -0,32+0,98). Zidentyfikowano szczepy bakteryjne, których proporcjonalna reprezentacja definiuje zdrową mikroflorę jelitową gromadzącą się w ciągu pierwszych 2-3 lat po urodzeniu. W randomizowanym badaniu klinicznym w icddr,b dwóch produktów leczniczych (importowana gotowa do użycia żywność terapeutyczna [RUTF (gotowa do użycia żywność terapeutyczna), Plumpy'Nut] w porównaniu z lokalnie przygotowanym ryżem / soczewicą Khichuri i Halwa) w Bangladeszu dzieci z ciężkim ostrym niedożywieniem (SAM) zaobserwowano niecałkowitą i tylko przejściową poprawę niedojrzałości mikrobiomu, przy czym dzieci pozostawały wyraźnie skarłowaciałe i miały niedowagę przez cały okres obserwacji. Dzieci z Bangladeszu z MAM również wykazywały znaczną niedojrzałość mikroflory, chociaż mniej dotkliwe niż dzieci z SAM. Niedojrzałość mikrobiomu służy zatem jako potencjalny biomarker do identyfikacji niemowląt zagrożonych niedożywieniem oraz do monitorowania strategii leczenia i profilaktyki.

Badacze opracowali niedawno gotową do spożycia żywność terapeutyczną, używając lokalnie dostępnych składników żywności - ryżu, soczewicy i ciecierzycy, które są odpowiednie kulturowo i akceptowalne. Odkryli poprzez podwójnie ślepą próbę RCT (Randomized Controlled Trial), że RUTF na bazie ciecierzycy i soczewicy na bazie ryżu były tak samo skuteczne jak komercyjne RUTF na bazie orzeszków ziemnych i dobrze akceptowane przez dzieci z SAM. Poprzez połączenie wyżej wymienionych RCT i klinicznych badań translacyjnych, zidentyfikowali sprzyjającą wzrostowi korzystną mikroflorę dyskryminującą wiek oraz lokalnie dostępne składniki żywności, które wspierają proliferację tej korzystnej mikroflory. Poza tym wyniki wcześniejszych badań przeprowadzonych na zwierzętach gnotobiotycznych w Washington University Center for Genome Science skłoniły nas do zasugerowania, że ​​połączenie składników żywności (ciecierzyca, mąka sojowa, orzeszki ziemne i zielony banan) będzie warte zbadania pod kątem wpływu diety na stymulowanie proliferacji mikroflory dyskryminującej wzrost, a także kosztów i zrównoważonego rozwoju. Aby ocenić stopień, w jakim wyniki uzyskane z gnotobiotycznych modeli myszy i prosiąt przekładają się na ludzi, badacze przeprowadzili niedawno zatwierdzone przez RRC (Research Review Committee) i ERC (Ethecial Review Committee) badanie, protokół icddr,b (PR-16099) „ Badania kliniczne poprzedzające weryfikację koncepcji mające na celu optymalizację prototypów żywności uzupełniającej ukierunkowanej na mikrobiom ołowiu (MDCF) pod kątem ich zdolności do naprawy niedojrzałości mikrobiomu i ustalenia ich akceptowalności organoleptycznej „i pomyślnie zakończyły badanie. Badanie to zostało zaprojektowane w celu przetestowania wpływu trzech lokalnie produkowanych prototypów MDCF (MDCF-1, MDCF-2 i MDCF-3) oraz lokalnie produkowanego RUSF na bazie ryżu i soczewicy. Celem tego badania pilotażowego było zademonstrowanie wstępnej weryfikacji koncepcji, że niektóre pokarmy uzupełniające będą miały korzystny wpływ na małe dzieci cierpiące na umiarkowane ostre niedożywienie poprzez stymulowanie proliferacji poszczególnych członków mikroflory jelitowej, które są znane ze swojego pobudzania wzrostu efekt. W tym badaniu pilotażowym zbadali punktację Z dla mikrobiomu dla wieku, a także wpływ proliferacji dobrych członków mikroflory jelitowej na niektóre układy organizmu. Wyniki badania pilotażowego Pre-POC jednoznacznie wykazały, że jeden z trzech pokarmów uzupełniających ukierunkowanych na mikroflorę, a mianowicie (MDCF-2; składający się z kombinacji ciecierzycy, mąki sojowej, orzeszków ziemnych, zielonego banana, oleju, cukru i mikroelementów) był związany z zwiększone poziomy niektórych aminokwasów, które odgrywają kluczową rolę w rozwoju kości długich, rozwoju mózgu i zwiększonej produkcji IGF-1. Dokonano tego za pomocą najnowocześniejszego skanu SomaLogic opartego na aptamerach DNA. Wyniki sugerują, że ten kandydat na MDCF-2 jest skuteczny w stymulowaniu wzrostu promujących wzrost członków mikroflory jelitowej, na przykład Faecalibacterium prausnitzii. Zatem MDCF-2 promuje mikroflorę jelitową, która indukuje hormon insulinopodobny czynnik wzrostu 1 (IGF-1), który promuje wzrost i przebudowę kości.

Na podstawie tych dowodów badacze chcieliby teraz przeprowadzić znacznie większe badanie kliniczne z wykorzystaniem najbardziej obiecującego MDCF, jakim jest MDCF-2, z głównym punktem końcowym, jakim jest wzrost liniowy. Ta próba dotyczyłaby dzieci z pierwotną MAM.

Projekt badania i metody Badacze przeprowadzą badanie kliniczne wśród dzieci w wieku 12-18 miesięcy z pierwotną MAM (WLZ <-2 do -3).

Projekt badania: Randomizowana, kontrolowana próba interwencyjna. Miejsce badania: Badanie zostanie przeprowadzone w Bauniabadh, klinice RADDA MCH-FP (Zdrowie Matki i Dziecka – Planowanie Rodziny) w rejonie Mirpur i Gabtoli w mieście Dhaka oraz prawdopodobnie w Oddziale Specjalnego Żywienia prowadzonym przez Terre des Hommes w Kurigram.

Uczestnicy badania: Uczestnikami badania będą dzieci obojga płci w wieku 12-18 miesięcy z MAM (WLZ <-2 do -3).

Wstępne badanie przesiewowe i rejestracja: Dzieci będą badane i rejestrowane za pomocą ankiet gospodarstw domowych przeprowadzanych przez asystentów ds. badań terenowych (FRA) zgodnie z wcześniej określonymi kryteriami włączenia. Po spełnieniu kryteriów rekrutacyjnych i uzyskaniu zgody rodziców lub opiekunów prawnych na udział w badaniu, dzieci z odpowiednią matką/opiekunem zostaną wpisane i losowo przydzielone do jednego z dwóch ramion według liczb losowych wygenerowanych komputerowo. Kod przydzielonego rodzaju diety będzie przechowywany w zamkniętej, nieprzezroczystej kopercie dla każdej osoby i zostanie otwarty dopiero po podpisaniu przez opiekuna formularza zgody.

Projekt badania:

Ramię 1 – RUSF na bazie ryżu i soczewicy (uzasadnienie: referencyjny standard opieki dla MAM; w oparciu o wiedzę o jej wpływie na mikroflorę jelitową lub niedojrzałość mikroflory) Ramię 2 – MDCF2 (Micbiota Directed Complementary Food 2) z czterema uzupełniającymi składnikami żywności (racjonalne : ołów z dowodami z badań klinicznych Pre-POC w celu optymalizacji prototypów żywności uzupełniającej ukierunkowanej na mikroflorę ołowiu pod kątem ich zdolności do naprawy niedojrzałości mikroflory i pozytywnego wpływu na wzrost) Pobieranie próbek kału Cotygodniowe próbki kału (1-2 g) będą pobierane w ciągu 30 minut od wydalanie (w domu i transport z powrotem do icddr,b) przy użyciu ciekłego azotu zawierającego suchy spedytor. Próbki będą przechowywane w temperaturze -80°C przed wysłaniem do Gordon Lab Analiza dojrzałości mikrobiomu (mierzona przed, w trakcie i po zaprzestaniu leczenia MDCF i RUSF) oraz oparta na PCR (reakcja łańcuchowa polimerazy) ocena obciążenia enteropatiami w kale próbki (mierzone przed i po traktowaniu MDCF).

1-2 g próbek kału zostanie pobranych od każdego dziecka w momencie rejestracji, co tydzień podczas pierwszego miesiąca interwencji i 4 razy w tygodniu podczas drugiego i trzeciego miesiąca interwencji oraz pod koniec fazy pointerwencji. Zakładając 62 uczestników badania/ramię, w tym badaniu zostaną pobrane łącznie 992 próbki kału. 2 gramy próbek kału zostaną pobrane od matek w momencie rejestracji.

Pobieranie próbek moczu 2 ml próbek moczu zostanie pobranych od każdego dziecka podczas rejestracji, tydzień po rejestracji i raz w miesiącu w fazie interwencji i po interwencji. Zakładając 62 uczestników badania/ramię, w tym badaniu zostaną zebrane łącznie 744 próbki moczu. 5 ml próbek moczu zostanie pobranych od matek w momencie rejestracji.

Pobieranie krwi Po 2 ml próbki krwi zostaną pobrane od każdego dziecka przed interwencją, końcem pierwszego miesiąca interwencji i zaraz po jej zakończeniu. W tym badaniu zostaną pobrane łącznie 372 próbki osocza. 5 ml próbek krwi zostanie pobranych od matek w momencie rejestracji.

Stan odżywienia matki jest powiązany ze stanem odżywienia dziecka, co pokazują wyniki naszego ośmiokrajowego badania MAL-ED (niedożywienie i choroby jelit). Ponadto czynniki noworodkowe i inne matczyne były wczesnymi determinantami niższej długości w stosunku do wieku, a ich udział pozostawał ważny przez pierwsze 24 miesiące życia.9 Badacze uważają, że inne czynniki matczyne obejmowałyby mikroflorę jelitową matki, a także profil aminokwasowy krwi matki. Inicjatywy mające na celu zajęcie się karłowatością u dzieci powinny również uwzględniać ulepszenia składu żywności uzupełniającej (tj. Wyższa zawartość białka) oraz strategie zmniejszania narażenia na patogeny jelitowe. W związku z tym będą rejestrować wzrost i wagę matki. W celu zrozumienia biologicznego stanu odżywienia matki zostaną pobrane od matki próbki kału, krwi i moczu. Próbki te zostaną przeanalizowane pod kątem mikroflory jelitowej i proteomiki, a wyniki zostaną skorelowane z wynikami włączonych dzieci.

Sesje karmienia Dzieci i matki/opiekunowie zostaną poproszeni o przybycie do ośrodków żywieniowych utworzonych w miejscach, najlepiej w godzinach 9-11 i 15-17 pierwszego dnia. Matki zostaną poproszone o powstrzymanie się od podawania pokarmu i mleka w ciągu 2 godzin poprzedzających obserwowany czas posiłku. Dziecko otrzyma 25 gramów MDCF lub RUSF zgodnie z decyzją losowego przydziału w każdym z dwóch posiłków w godzinach 9-11 i 15-17. Matki zostaną poproszone o karmienie swoich dzieci odważoną wcześniej dietą łyżką, dopóki nie odmówią jedzenia, jak opisano poniżej. Po dwuminutowej przerwie ta sama dieta zostanie zaoferowana po raz drugi, aż ponownie odmówi. Po drugiej dwuminutowej przerwie dieta zostanie zaoferowana po raz trzeci, aż do ponownego odrzucenia. Po tej trzeciej odmowie epizod karmienia zostanie uznany za „zakończony”. Stoper rejestruje czas trwania karmienia (z wyłączeniem „okresów odpoczynku”), a całkowity czas karmienia jest odnotowywany. Ten epizod karmienia będzie trwał maksymalnie 60 minut. Zostaną również podane odmierzone objętości zwykłej wody i zmierzona zostanie ilość wody pobranej podczas tego okresu posiłku trwającego 60 minut. Epizod karmienia będzie odbywał się pod bezpośrednim nadzorem przeszkolonego personelu badawczego. Uznaje się, że dzieci odmawiają dalszego przyjmowania, jeśli odsuwają głowę od jedzenia, płaczą, zaciskają usta lub zaciskają zęby, są pobudzone, wypluwają jedzenie lub odmawiają połknięcia. Ilość faktycznie spożytego MDCF/RUSF zostanie obliczona poprzez odjęcie pozostałej części od oferowanej ilości. Zostaną dostarczone zważone serwetki; wszelkie jedzenie, które zostanie zwrócone, zwymiotowane lub rozlane, zostanie pobrane, zważone i odjęte od oferowanej kwoty. Analizowana będzie ilość spożywanego pokarmu (g), wartość energetyczna (kcal) oraz kategoria dopuszczalności. Zapisane dzieci będą codziennie monitorowane przez asystentów ds. badań terenowych pod kątem ewentualnych skutków ubocznych/zdarzeń niepożądanych (np. wysypka, pokrzywka spowodowana alergią pokarmową lub jakiekolwiek istotne zmiany stanu klinicznego) przez tydzień. W przypadku zaobserwowania jakichkolwiek skutków ubocznych/zdarzeń niepożądanych, będą one leczone zgodnie ze standardami postępowania. W celu kontroli jakości RUSF i MDCF stosowana będzie znormalizowana procedura produkcji zgodnie z międzynarodowym standardowym protokołem. RUSF i MDCF zostaną przygotowane w laboratorium przetwórstwa spożywczego. Przygotowanie żywności na różnych etapach, tj. pieczenie, zmniejszanie wielkości cząstek, jednorodne mieszanie i dostarczanie do ośrodków żywienia, będzie monitorowane przez badaczy icddr,b. Jedzenie będzie przygotowywane codziennie, aby podczas przygotowywania nie doszło do nieoczekiwanego zanieczyszczenia i utraty składników odżywczych. Chociaż surowe składniki żywności będą bardzo ostrożnie pozyskiwane z lokalnego rynku i przechowywane w rozsądnych ilościach, śledczy będą przygotowywać, wydawać i karmić dzieci tego samego dnia, w którym przygotowywane są MDCF i RUSF. Każde dziecko otrzyma 25 g karmy dwa razy dziennie w ośrodku dożywiania przez pierwsze 4 tygodnie. W następnym miesiącu dziecko otrzyma 25 g karmy w ośrodku dokarmiania oraz dodatkowe 25 g w czystym pojemniku do karmienia w domu. W trzecim miesiącu każdego zapisanego dziecka w domu uczestnika dostarczane będą codziennie dwa oddzielne pojemniki zawierające 25 g diety.

W tym badaniu stan odżywienia zostanie oceniony za pomocą antropometrii, porównując z referencyjnymi standardami wzrostu WHO. Na początku badania zostaną zebrane informacje dotyczące charakterystyki demograficznej (zamożność rodzin, standard mieszkaniowy, struktura rodziny i cechy rodzicielskie itp.), a FRA odnotują wagę dzieci za pomocą wagi cyfrowej o dokładności 2g (Seca, model 728, Niemcy), długość (za pomocą infantometru, Seca, model 416, Niemcy) i obwód w połowie ramienia z dokładnością do mm (za pomocą nierozciągliwej taśmy wprowadzającej). Antropometria zostanie wykonana zgodnie ze standardowymi procedurami, a wszystkie pomiary zostaną wykonane trzykrotnie, a środkowy zostanie zapisany.

Wszystkie interwencje w każdym badaniu zostaną przeprowadzone u dzieci w przychodni Mirpur/przychodni RADDA lub w Kurigram. Matki/główni opiekunowie zostaną poinformowani o przestrzeganiu obecnych praktyk żywieniowych i karmienia piersią swoich dzieci.

Badacze zakończą rejestrację w ciągu 12 miesięcy, a obserwację i analizę danych w ciągu dodatkowych 6 miesięcy. Jednak to badanie dotyczące pierwotnego MAM będzie kontynuowane jednocześnie z innym badaniem klinicznym dotyczącym Post SAM-MAM, które będzie trwało dłużej.

Rekrutacja, badanie przesiewowe i zgoda Spis ludności, badanie przesiewowe, rejestracja uczestników badania zostaną przeprowadzone w obszarach zlewni ośrodków w mieście Dhaka iw Kurigram. Rodzice dzieci spełniających kryteria MAM (do badania Primary MAM) zostaną poproszeni o włączenie do badania. Asystent ds. badań terenowych szczegółowo wyjaśni badanie, odpowie na wszelkie pytania rodziców i zaprosi rodziców do zapisania dziecka do badania.

Na początku badania poszukiwane będą informacje dotyczące charakterystyki demograficznej (zamożność rodzin, standard mieszkaniowy, struktura rodziny i cechy rodzicielskie itp.), a FRA rejestrować będą wagę dzieci za pomocą wagi cyfrowej o dokładności 2 g, długości (za pomocą infantometru) oraz obwód w połowie ramienia z dokładnością do milimetra. Uczestnicy badania zostaną poproszeni o przybycie bezpośrednio do centrum żywieniowego na terapię żywieniową.

Przygotowanie MDCF 2 i RUSF W oparciu o zgodne kombinacje uzupełniających się składników żywności zidentyfikowanych w opisanym powyżej badaniu Pre-POC, MDCF2 oraz ryż i soczewica RUSF będą produkowane w zakładzie icddr,b Food Processing w Mirpur i Kurigram (do być ustalone w obu miejscach) w ilościach wystarczających do badań klinicznych. Obie diety będą dopasowane pod względem gęstości energetycznej i zawartości mikroelementów. Gęstość energetyczna MDCF wynosi 125 kcal/25 g (na porcję), a docelowy rozkład kalorii to 45-50 procent z tłuszczu i 8-10 procent z białka. Eksperymenty nad rozwojem prototypów MDCF i oceną właściwości organoleptycznych przeprowadzono podczas badania klinicznego Pre-POC. Po otrzymaniu surowców (ryż/soczewica/ciecierzyca) obce materiały/ziarna lub nasiona (jeśli występują) zostaną wyjęte, a następnie na otwartej patelni surowce zostaną upieczone. Temperatura pieczenia będzie utrzymywana na poziomie 120-130°C. Zwykle pieczenie 100 g każdego surowca zajmuje 8-10 minut. Ciągłe mieszanie jest niezbędne, aby zapewnić prażenie pojedynczych nasion/ziarn. Po zakończeniu pieczenia zostanie odstawiony do ostygnięcia, a następnie zmielony. Na koniec zostanie dodany wstępnie zważony proszek przedmieszki. Przetwarzanie całych zielonych bananów w celu włączenia do MDCF2 różni się od innych składników. Zielonego banana ze skórką włożyć do głębokiego garnka, zalać wrzątkiem (100°C-110°C) i gotować przez około 17-20 minut, aż będzie ugotowany i miękki. Skórka zielonego banana zostanie obrana, a jadalna biała część zostanie wyjęta i zetarta na małe kawałki. Następnie zostaną przeniesione do garnka i pozostawione do ostygnięcia. Małe kawałki banana zostaną rozbite łyżką/rozdrabniaczem ręcznym. Wagi wszystkich pozostałych składników zostaną zapisane. Przepisy będą produkowane w małych partiach poprzez mieszanie wszystkich składników w blenderze elektrycznym. Do receptury należy dodać niewielką ilość (1 procent) lecytyny sojowej w celu poprawienia konsystencji i zapobieżenia wydzielaniu się oleju.

Antropometria Wiek dziecka będzie weryfikowany na podstawie dokumentacji (akt urodzenia lub karta szczepień, jeśli jest dostępna) lub zaświadczenia opiekuna o dacie urodzenia dziecka. Długość będzie mierzona infantometrem z dokładnością do 0,1 cm. Masa ciała zostanie zmierzona na wadze czułej do 2g. Wskaźniki Z długości w stosunku do wieku (LAZ), wagi w stosunku do długości (WLZ) i wagi w stosunku do wieku (WAZ) zostaną obliczone zgodnie ze standardami wzrostu WHO (Światowa Organizacja Zdrowia) opracowanymi w ramach wieloośrodkowego badania referencyjnego wzrostu (MGRS). Obrzęk zostanie zbadany przez naciśnięcie górnej części obu stóp przez 3 sekundy. Obwód środkowego ramienia (MUAC) zostanie zmierzony za pomocą taśmy MUAC (Wielka Brytania). Regularna standaryzacja urządzeń pomiarowych będzie dokonywana przy użyciu norm.

Analizy próbek osocza i kału Próbki osocza zebrane podczas tego badania zostaną przesłane do laboratorium dr Jeffreya Gordona w Centrum Nauk o Genomie i Biologii Systemów na Uniwersytecie Waszyngtońskim w St. Louis. Zaawansowane metody oparte na spektroskopii mas i testach immunologicznych zostaną wykorzystane do uzyskania nowej wiedzy na temat roli niedojrzałości mikroflory jelitowej oraz skutków próby naprawy tej niedojrzałości za pomocą uzupełniającej żywności ukierunkowanej na mikrobiom ołowiu (MDCF) na biomarkery i mediatory zdrowego wzrostu . Zostaną wykonane porównania z grupą kontrolną (tj. spożywającą referencyjny standard RUSF). Ukierunkowana ultrasprawna chromatografia cieczowa-spektrometria masowa (UPLC-MS) i chromatografia gazowa-spektrometria masowa (GC-MS) zostaną wykorzystane do profilowania analitów o szczególnym znaczeniu w próbkach osocza i/lub kału, w tym kwasów żółciowych i krótkołańcuchowych kwasów tłuszczowych (SCFA) ); markery funkcji mitochondriów (np. β-hydroksymaślan, acylokarnityny/acyloCoA, związki pośrednie cyklu TCA); aminokwasy w surowicy plus próbki kału [aminokwasy rozgałęzione, tryptofan i metabolity tryptofanu związane ze wzrostem i stanem zapalnym, w tym wytwarzane przez bakteryjny metabolizm tryptofanu (np. pochodne kwasu indolooctowego)]. Kluczowe mediatory/biomarkery liniowego wzrostu (np. hormon wzrostu i IGF-1), wykorzystania energii (insulina, leptyna) i biologii kości [IL-6 (interleukina-6), osteoprotegeryna, C-końcowy peptyd kolagenu typu I (CTX, marker aktywności osteoklastów/resorpcji kości) i amino-końcowy propeptyd prokolagenu typu 1 (P1NP, marker aktywności osteoblastów/tworzenia kości)], a ogólnoustrojowe zapalenie (CRP, AGP) zostaną określone ilościowo przy użyciu ustalonych Testy ELISA/Luminex. Białka we krwi zostaną zidentyfikowane za pomocą skanera SOMAlogic, który umożliwia identyfikację ponad 1300 różnych białek. Badanie proteomiczne przeprowadzone na próbkach osocza od dzieci z SAM w naszym poprzednim badaniu Pre-POC przeprowadzonym w Dhace wykazało już szereg znaczących i klinicznie istotnych powiązań między niektórymi białkami a fenotypami klinicznymi przy użyciu skanu SOMAlogic.

Zebrane informacje zostaną wykorzystane do wybrania próbek ludzkiego kału do przeszczepienia zwierzętom wolnym od zarazków w Gordon Lab w St Louis; zwierzęta te, które będą karmione dietą dawców ludzkiej mikroflory, zostaną wykorzystane do dalszego scharakteryzowania mechanizmów łączących prototypy MDCF, mikroflorę jelitową i fizjologię/metabolizm gospodarza. Ponadto te biomarkery osocza i kału zostaną wykorzystane do określenia, czy MDCF sprzyja naprawie niedojrzałości mikroflory i poprawia stan biologiczny u dzieci.

Obliczanie wielkości próby W badaniu pre-POC różnych MDCF wyjściowy wynik Z w stosunku do masy ciała u dzieci, które otrzymały MDCF2, wynosił -2,2, a po miesiącu suplementacji -1,7. Jeśli weźmie się pod uwagę WLZ -2 na linii podstawowej i -1,7 na linii końcowej, połączone SD (odchylenie standardowe) jako 0,53, to wielkość próby wynosi 49 w każdym ramieniu przy 80% mocy i 5% poziomie istotności.

Przy 20% wyniszczeniu 62 dzieci będzie musiało zostać zapisanych do każdej grupy. Dlatego w badaniu Primary MAM 62 dzieci otrzyma MDCF2, a 62 dzieci otrzyma RUSF z ryżu i soczewicy.

Analiza danych Dwie grupy dzieci z MAM zostaną porównane na początku badania iw różnych punktach czasowych. Wszystkie anality wymienione w sekcji „Analizy próbek osocza i kału” zostaną porównane między grupami MDCF2 i RUSF.

Plan monitorowania bezpieczeństwa danych (DSMP) Narzędzia zbierania danych dla tego badania będą obejmować formularze opisów przypadków, arkusze laboratoryjne i dokumentację źródłową. Pełna dokumentacja źródłowa (wizyty studyjne, raporty laboratoryjne itp.) będzie przechowywana dla każdego uczestnika badania w indywidualnych kartach badań. Wszystkie próbki laboratoryjne, raporty, gromadzenie danych z badań i formularze administracyjne będą identyfikowane za pomocą zakodowanego numeru, aby zachować poufność uczestnika badania i umożliwić śledzenie w trakcie badania.

Formularze, listy, dzienniki, terminarze i wszelkie inne wykazy, które łączą numery identyfikacyjne uczestników badania z innymi informacjami identyfikującymi, będą przechowywane w oddzielnym, zamkniętym pliku w obszarze o ograniczonym dostępie. Wszystkie informacje dotyczące uczestników badania będą przechowywane w plikach komputerowych chronionych hasłem lub w zamykanych szafkach na akta, do których dostęp mają wyłącznie upoważnieni pracownicy badania. Informacje z wykresów i informacje z zapisów badań nie zostaną ujawnione bez pisemnej zgody rodziców uczestnika badania. Jednak zapisy mogą być przeglądane przez przedstawicieli Komitetu ds. Przeglądu Badań i Komitetu ds. Przeglądu Etycznego icddr,b.

Badacze są odpowiedzialni za zapewnienie kompletnej i dokładnej dokumentacji badania i każdego uczestnika badania, w tym: dokumentacji medycznej, dokumentacji szczegółowo opisującej postępy każdego uczestnika w badaniu, raportów laboratoryjnych, formularzy opisów przypadków (CRF), podpisanych formularzy świadomej zgody, korespondencja z IRB (Institutional Review Board), zgłoszenia zdarzeń niepożądanych oraz informacje dotyczące przerwania i zakończenia badania przez uczestników. Wszystkie wymagane dane zostaną wyraźnie i dokładnie zapisane w CRF przez upoważniony personel badawczy. Tylko wyznaczony personel ośrodka badawczego, który przeszedł odpowiednie szkolenie, będzie rejestrował lub zmieniał dane w CRF. Badacze są odpowiedzialni za pozyskiwanie danych i jakość danych zapisanych w CRF. Wprowadzanie danych i zarządzanie nimi odbywać się będzie pod adresem icddr,b.

Gwarancja etyczna dla ochrony praw człowieka Badanie zostanie rozpoczęte po uzyskaniu zgody IRB od icddr,b Komitetu ds. Przeglądu Badań i Komitetu ds. Przeglądu Etycznego. Przed włączeniem do badania pobierana będzie świadoma pisemna zgoda opiekuna prawnego uczestników badania. Prywatność, anonimowość i poufność danych/informacji identyfikujących uczestników badania będą ściśle przestrzegane. Osobiste dane identyfikacyjne pobrane podczas rejestracji i innych procedur badawczych będą przechowywane pod kluczem. Nikt poza personelem badawczym nie będzie miał dostępu do danych osobowych i innych poufnych informacji.

Oczekiwane ryzyko/zdarzenia niepożądane związane z tym protokołem są związane z pobieraniem próbek krwi, pobieraniem próbek kału i podawaniem żywności uzupełniającej ukierunkowanej na mikroflorę. Żadne z nich nie kwalifikuje się jako poważne zdarzenie niepożądane (SAE). Oczekiwane zdarzenia niepożądane (EAE) związane z pobieraniem krwi są następujące:

• dyskomfort
• ból
• wprowadzenie infekcji
• krwawienie

• omdlenia lub siniaki

  • Zostaną podjęte środki ostrożności w celu uniknięcia wprowadzenia infekcji poprzez dezynfekcję miejsca nakłucia żyły i użycie sterylnego sprzętu
  • Ryzyko krwawienia i siniaków zostanie zminimalizowane poprzez natychmiastowe zastosowanie ucisku po nakłuciu żyły
  • Podczas pobierania krwi uczestnik (dziecko) będzie w pozycji siedzącej lub leżącej, aby uniknąć obrażeń spowodowanych omdleniem

Wszystkie możliwe zdarzenia niepożądane będą odpowiednio leczone. Obejmą one:

• Wymioty
• Biegunka
• Wysypka na skórze
• Pokrzywka z alergii pokarmowej
• Rozdęcie brzucha
• Ból brzucha Ocena zdarzeń niepożądanych Zarówno poważne, jak i mniej poważne zdarzenia niepożądane zostaną ocenione pod kątem ciężkości; związek z udziałem w badaniu; podjęte działania; i wyniki. Wszystkie SAE zostaną zgłoszone do ERC icddr,b w ciągu 24 godzin od poinformowania zakładu o zdarzeniu, które z kolei zostaną przekazane sponsorowi. Odbędzie się to za pośrednictwem bezpośredniej komunikacji telefonicznej, faksu lub poczty elektronicznej.

Każda kategoria do oceny AE zostanie zakodowana zgodnie z następującymi systemami ocen:

Powaga:

1. Łagodny
2. Umiarkowany
3. Ciężki : silny

Związek z uczestnictwem w badaniu:

1. Zdecydowanie powiązane: wyraźne skojarzenie czasowe, brak innej możliwej przyczyny
2. Prawdopodobnie powiązane: Mniej wyraźne powiązanie czasowe, możliwe inne przyczyny
3. Niepowiązane: niezależnie od badań istnieją dowody na to, że zdarzenie jest zdecydowanie związane z inną etiologią

Działania:

Brak Terapia lecznicza (wymagana więcej niż jedna dawka leku) Trwałe wycofanie z udziału w badaniu Hospitalizacja Inne wykorzystanie zwierząt Nie dotyczy Porozumienia o współpracy Ten projekt jest wspólnym wysiłkiem badaczy ze Szkoły Medycznej Uniwersytetu Waszyngtońskiego i Międzynarodowego Centrum Badań nad Chorobami Biegunkowymi , Bangladesz (icddr,b). Prace kliniczne i terenowe będą prowadzone w Dhace w Bangladeszu pod bezpośrednim nadzorem głównego badacza, natomiast analizy laboratoryjne będą prowadzone w Gordon Lab na Washington University w St. Louis. Wszystkie jednostki badawcze i współpracujący badacze mają długą historię współpracy międzynarodowej. Wszyscy badacze komunikowali się podczas opracowywania tego projektu i są zaangażowani w jego pomyślną realizację.

Dostępne zaplecze icddr,b posiada dobrze wyposażone Laboratorium Przetwórstwa Spożywczego, które ułatwi przygotowanie receptur dietetycznych. W Mirpur znajduje się wiele biur projektowych. Co ważniejsze, nawiązano doskonałe relacje ze społecznością. Elita społeczności i starsi są co roku zapraszani na spotkanie upowszechniające, aby byli świadomi prowadzonych badań.

Centrum Nauk o Genomie, Washington University w St. Louis: