Közösségi alapú klinikai vizsgálat helyileg elérhető élelmiszer-összetevőkből készült, mikrobiota által irányított kiegészítő élelmiszerekkel (MDCF-ekkel) az elsődleges, közepesen súlyos akut alultápláltságban szenvedő gyermekek kezelésére

Háttér:

A mérsékelt akut alultápláltság (MAM), amely egy jelentős globális egészségügyi probléma, a pazarlásként (azaz. súly/magasság a WHO Gyermeknövekedési Standardja szerint < -2 és -3 Z-pontszám között) és/vagy a felkar középső kerülete (MUAC) legalább 115 mm, de kevesebb, mint 125 mm. A 2017-es Globális Táplálkozási Jelentés szerint 2016-ban világszerte az öt év alatti gyermekek 8%-a, azaz 52 millió volt akut alultápláltság. A növekedési ütem 23%-át, azaz 155 millió gyermeket érintett. Dél-Ázsiában körülbelül minden hatodik 5 év alatti gyermek szenvedett MAM-ban 2013-ban (azaz. 17%). Ezek a gyerekek fokozottan ki vannak téve a súlyos akut alultápláltság (SAM) kockázatának, és háromszor nagyobb a halálozási kockázatuk a gyakori fertőző betegségekben, mint a jól táplált társaik. Bangladesben van az egyik legnagyobb gyermekkori alultápláltsági terh a világon. A 2014-es Bangladesh Demográfiai Egészségfelmérés (BDHS) szerint az öt éven aluli gyermekek körében 36%, közülük 12% szenved súlyos csökevényesedéstől (Length-for-Age-Z pontszám, LAZ <-3). A gyerekek körülbelül 15%-a veszteségbe kerül (Súly-hosszúság Z pontszám, WLZ <-2); több mint 2 millió gyermek szenved MAM-ban, míg 3%-a vagy 450 000 gyermek szenved a SAM halálos formájától. Az alultápláltság évente 1 milliárd dollárba kerül Bangladesnek. A WHO ajánlásai szerint a 6-59 hónapos MAM-ban szenvedő csecsemőknek és gyermekeknek tápanyagban gazdag ételeket kell fogyasztaniuk, hogy kielégítsék a súly- és magassággyarapodáshoz, valamint a funkcionális helyreállításhoz szükséges extra szükségleteiket. Jelenleg nincsenek bizonyítékokon alapuló ajánlások a MAM-ban szenvedő gyermekek kezelésére használt kiegészítő élelmiszerek összetételére vonatkozóan. Élelmiszerhiányos helyzetekben kiegészítő élelmiszereket alkalmaztak a közepesen súlyos alultápláltságban szenvedő gyermekek kezelésére. A táplálkozás alatti kezelésre irányuló beavatkozásoknak ezért a MAM kezelésének erős összetevőjét kell tartalmazniuk. A MAM megelőzését figyelembe kell venni az élelmezésbiztonsági és egyéb fejlesztési stratégiákban, mivel a helyzet kritikussá válik azokban a populációkban, ahol az élelmezésbizonytalanság tombol. Az élelmiszer-ellátás bizonytalansága világszerte aggodalomra ad okot, mivel egyre több ember alultáplált, 842 millió fő, ami a világ teljes népességének körülbelül 12%-a. Az általunk 2011–2012-ben végzett bangladesi nemzeti mikrotápanyag-állapot-felmérés szerint az élelmezés súlyos bizonytalanságát leggyakrabban a nyomornegyedekben találták meg (17,2%), szemben az országos szintű 12,3%-kal, a vidéki területeken 12%-kal és 12,4%-kal. az ország városi területein. Mivel az élelmezésbizonytalanságot nem lehet egykönnyen leküzdeni, ezért fontos olyan beavatkozásokat kidolgozni, amelyek a helyben elérhető élelmiszer-összetevőktől függenek, és képesek a bélmikrobióta jótékony erejét a csecsemők és gyermekek növekedésére kamatoztatni.

A táplálkozási beavatkozás hatását korlátozó egyik fő tényező az, hogy az alultáplált gyermekek nem tudják növelni bevitelüket a megnövekedett anyagcsere-szükségletek kielégítésére. Az icddr,b és a St. Louis-i Washingtoni Egyetem Gordon Laboratóriuma közötti együttműködési tanulmányok során az anyatej, mikrobiota és immunitás (BMMI) projekt Jump start fázisa során a Random Forests gépi tanuláson alapuló megközelítést alkalmaztuk. bakteriális 16S rRNS (riboszomális ribonukleinsav) adatkészletek, amelyeket a bangladesi Dakka városi nyomornegyedében élő gyermekek születési csoportjától származó havi székletmintákból állítottak elő. Ezek a gyerekek folyamatosan egészséges növekedést mutattak (WLZ -0,32+0,98). Olyan baktériumtörzseket azonosítottak, amelyek arányos reprezentációja meghatározza az egészséges bélmikrobiótát, amint az a születés utáni első 2-3 évben összeáll. Egy randomizált klinikai vizsgálatban az icddr,b két terápiás élelmiszerrel (importált, használatra kész terápiás élelmiszer [RUTF (Ready to Use Therapeutic Food), Plumpy'Nut], szemben a helyileg készített rizs/lencse alapú Khichuri és Halwa) Bangladeshiben. Súlyos akut alultápláltságban (SAM) szenvedő gyermekeknél megfigyelték, hogy a mikrobiota éretlensége nem teljesen, és csak átmenetileg javult, a gyermekek pedig jelentősen satnya és alulsúlyozottak maradtak a követési időszakban. A MAM-ban szenvedő bangladesi gyermekek szintén jelentős mikrobiota éretlenséget mutattak, bár kevésbé súlyosak, mint a SAM-ban szenvedő gyermekek. A mikrobiota éretlensége tehát potenciális biomarkerként szolgál az alultápláltság kockázatának kitett csecsemők azonosítására, valamint a kezelési és megelőzési stratégiák nyomon követésére.

A kutatók a közelmúltban felhasználásra kész terápiás élelmiszereket fejlesztettek ki helyi élelmiszer-összetevők – rizs, lencse és csicseriborsó – felhasználásával, amelyek kulturális szempontból relevánsak és elfogadhatók. Egy kettős vak RCT (Randomized Controlled Trial) segítségével azt találták, hogy a csicseriborsó alapú és a rizs-lencse alapú RUTF ugyanolyan hatékony, mint a kereskedelmi forgalomban kapható földimogyoró alapú RUTF, és a SAM-ban szenvedő gyermekek is jól elfogadták. A fent említett RCT és klinikai transzlációs vizsgálatok kombinációja révén azonosították a növekedést elősegítő, életkortól megkülönböztető hasznos mikrobiótát és olyan helyi élelmiszer-összetevőket, amelyek támogatják e jótékony mikrobióta elszaporodását. Emellett a Washingtoni Egyetem Genomtudományi Központjában gnotobiotikus állatokon végzett korábbi vizsgálatok eredményei arra engednek következtetni bennünket, hogy az élelmiszer-összetevők (csicseriborsó, szójaliszt, földimogyoró és zöld banán) kombinációját érdemes lesz tanulmányozni az étrendnek a serkenti a növekedést diszkriminatív mikrobióta elszaporodását, valamint a költségeket és a fenntarthatóságot. Annak felmérésére, hogy a gnotobiotikus egér- és malacmodellekből nyert eredmények milyen mértékben érvényesülnek az emberre, a kutatók nemrégiben elvégezték az RRC (Research Review Committee) és az ERC (Ethecial Review Committee) által jóváhagyott tanulmányt, az icddr,b protokollt (PR-16099). A koncepció előtti klinikai kísérletek az ólommikrobióta által irányított kiegészítő élelmiszer-prototípusok (MDCF) prototípusainak optimalizálására a mikrobiota éretlenségének helyreállítására és érzékszervi elfogadhatóságuk megállapítására irányuló képességük szempontjából sikeresen befejezték a vizsgálatot. Ezt a tanulmányt három helyileg előállított MDCF prototípus (MDCF-1, MDCF-2 és MDCF-3) és egy helyben előállított rizslencse alapú RUSF hatásának tesztelésére tervezték. Ennek a kísérleti tanulmánynak az volt a célja, hogy bemutassa a koncepció előzetes bizonyítását, mely szerint bizonyos kiegészítő élelmiszerek jótékony hatást fejtenek ki a mérsékelt akut alultápláltságban szenvedő kisgyermekekre azáltal, hogy serkentik a bélmikrobióta bizonyos tagjainak elszaporodását, amelyek növekedést serkentő hatásairól ismertek. hatás. Ebben a kísérleti tanulmányban a mikrobióta Z-pontszámát, valamint a bélmikrobióta jó tagjainak elszaporodásának hatását vizsgálták bizonyos testrendszerekre. A Pre-POC kísérleti kísérlet eredményei meggyőzően kimutatták, hogy a három mikrobiota által irányított kiegészítő élelmiszer egyike (MDCF-2; csicseriborsó, szójaliszt, földimogyoró, zöld banán, olaj, cukor és mikrotápanyagok kombinációjából áll) kapcsolatban áll a bizonyos aminosavak megnövekedett szintje, amelyek kulcsszerepet játszanak a hosszú csontok fejlődésében, az agy fejlődésében és az IGF-1 fokozott termelésében. Ez a legmodernebb DNS-aptamer alapú SomaLogic szkenneléssel történt. Az eredmények azt sugallják, hogy ez az MDCF-2 jelölt hatékonyan serkenti a bélmikrobióta növekedést serkentő tagjainak, például a Faecalibacterium prausnitzii növekedését. Így az MDCF-2 elősegíti a bél mikrobiotáját, amely indukálja az inzulinszerű növekedési faktor 1 (IGF-1) hormont, amely elősegíti a csontok növekedését és átépülését.

Ezen bizonyítékok alapján a kutatók most egy sokkal nagyobb klinikai vizsgálatot szeretnének végezni a legígéretesebb MDCF-vel, amely az MDCF-2, amelynek elsődleges végpontja a lineáris növekedés. Ez a próba elsődleges MAM-ban szenvedő gyermekekre vonatkozik.

Kutatási terv és módszerek A kutatók klinikai vizsgálatot végeznek 12-18 hónapos, elsődleges MAM-ban szenvedő gyermekek körében (WLZ <-2 és -3).

A vizsgálat tervezése: Randomizált, kontrollált beavatkozási vizsgálat. A vizsgálat helyszíne: Ezt a vizsgálatot Bauniabadhban, a RADDA MCH-FP (Anya- és Gyermekegészségügy – Családtervezés) klinikán végzik Mirpur körzetében és Gabtoliban, Dakka városában, és valószínűleg a Terre des Hommes által vezetett speciális táplálkozási egységben Kurigramban.

A vizsgálat résztvevői: A vizsgálatban résztvevők 12-18 hónapos gyermekek, mindkét nemhez tartozó MAM-ban szenvedő gyermekek (WLZ <-2 és -3 között).

Kezdeti szűrés és beiratkozás: A gyermekeket a Field Research Assistantok (FRA-k) háztartási felméréseken keresztül szűrik és írják be az előre meghatározott felvételi kritériumok alapján. A beiratkozási feltételek teljesítése és a tanulmányban való részvételhez a szülőktől vagy törvényes gyámoktól származó hozzájárulás megszerzése után az anyával/gondozóval rendelkező gyermekeket beíratják, és számítógéppel generált véletlenszámok alapján véletlenszerűen besorolják a két kar valamelyikébe. A hozzárendelt diétatípus kódját egyénenként zárt, átlátszatlan borítékban őrzik, és csak akkor nyitják ki, ha a gondozó aláírja a beleegyező nyilatkozatot.

Dizájnt tanulni:

1. kar – rizs-lencse alapú RUSF (indoklás: a MAM gondozásának referenciastandardja; a bél mikrobiotára vagy a mikrobiota éretlenségére gyakorolt ​​hatásának ismerete alapján) 2. kar – MDCF2 (Microbiota Directed Complementary Food 2) négy kiegészítő élelmiszer-összetevővel (indoklás) : ólom pre-POC klinikai vizsgálatokból származó bizonyítékokkal az ólommikrobiota által irányított kiegészítő élelmiszer prototípusok optimalizálása érdekében, hogy képesek legyenek helyreállítani a mikrobiota éretlenségét és pozitív hatást gyakorolni a növekedésre kiválasztás (otthon és visszaszállítás az icddr,b-be) a folyékony nitrogéntartalmú száraz szállító segítségével. A mintákat -80°C-on tárolják, mielőtt elküldik őket a Gordon Labba, a mikrobiota érettségének elemzésére (az MDCF- és RUSF-kezelés befejezése előtt, alatt és után mérve), valamint a széklet enteropatogén-terhelésének PCR (polimeráz láncreakció) alapú értékelésére. minták (MDCF kezelés előtt és után mérve).

Minden gyermektől 1-2 g székletmintát veszünk a beiratkozáskor, hetente a beavatkozás 1. hónapjában, hetente 4 alkalommal a beavatkozás 2. és 3. hónapjában, valamint a beavatkozás utáni szakasz végén. Feltételezve, hogy karonként 62 vizsgálati résztvevő vesz részt, összesen 992 székletmintát gyűjtünk ebben a vizsgálatban. Az anyáktól a beiratkozáskor 2 g székletmintát veszünk.

Vizeletminta vétel Minden gyermektől 2 ml vizeletmintát veszünk a beiratkozáskor, egy héttel a beiratkozás után és havonta egyszer a beavatkozási és a beavatkozás utáni szakaszban. Feltételezve, hogy karonként 62 résztvevő vesz részt, összesen 744 vizeletmintát gyűjtenek ebben a vizsgálatban. A beiratkozáskor 5 ml vizeletmintát veszünk az anyáktól.

Vérmintavétel Minden gyermektől 2 ml vérmintát vesznek a beavatkozás előtt, a beavatkozás első hónapjának végén és közvetlenül a beavatkozás befejezése után. Ebben a vizsgálatban összesen 372 plazmamintát gyűjtenek. Az anyáktól a beiratkozáskor 5 ml vérmintát veszünk.

Az anya tápláltsági állapota összefügg a gyermek tápláltsági állapotával, amint azt nyolc országban végzett MAL-ED (alultápláltság és bélbetegségek) vizsgálatunk eredményei mutatják. Ezenkívül az újszülöttkori és egyéb anyai tényezők korai meghatározói voltak az életkorhoz képest alacsonyabb hosszúságnak, és hozzájárulásuk az élet első 24 hónapjában is fontos maradt. A kutatók úgy vélik, hogy a többi anyai tényező közé tartozik az anyai bélmikrobióta, valamint az anyai vér aminosavprofilja. A gyermekkorban előforduló növekedési rendellenességek kezelésére irányuló kezdeményezéseknek figyelembe kell venniük a kiegészítő élelmiszerek (azaz a magasabb fehérjetartalom) összetételének javítását és a bélkórokozóknak való kitettség csökkentését célzó stratégiákat is. Ennek megfelelően rögzítik az anya magasságát és súlyát. Az anya táplálkozási biológiai állapotának megértése érdekében széklet-, vér- és vizeletmintát kérnek az anyától. Ezeket a mintákat elemezni fogják a bélmikrobióta és a proteomika szempontjából, és az eredmények korrelálnak a beiratkozott gyermekek eredményeivel.

Táplálkozás A gyerekeket és az anyákat/gondozókat lehetőleg az 1. napon 9-11 és 17-17 óra között a helyszínen kialakított táplálkozási központokba kérjük. Kérjük az anyákat, hogy a megfigyelt étkezést megelőző 2 órában ne adjanak ételt és anyatejet. A gyermek 25 gramm MDCF-et vagy RUSF-et kap, véletlenszerű elosztással a két étkezés során 9-11 és 17-17 óra között. Az anyákat arra kérik, hogy az alábbiakban leírtak szerint kanalazzanak meg gyermekeiknek az előre kimért diétát, amíg az nem hajlandó enni. Kétperces szünet után ugyanazt a diétát másodszor is felkínálják mindaddig, amíg újra vissza nem utasítja. A második kétperces szünet után a diétát harmadszor ajánlják fel, amíg újra meg nem tagadják. A harmadik visszautasítás után az etetési epizód „megszakítottnak” minősül. Az etetés időtartamát (kivéve a közbenső „pihenőidőket”) a stopper rögzíti, és az etetés teljes időtartamát. Ez az etetési epizód legfeljebb 60 percig tart. A sima víz mért térfogatait is megadják, és megmérik a 60 perces étkezési időszak alatt elfogyasztott víz mennyiségét. Az etetési epizód képzett tanulmányozó személyzet közvetlen felügyelete alatt zajlik majd. A gyermekeket úgy tekintik, mint akik megtagadják a további bevitelt, ha elmozdítják a fejüket az ételtől, sírnak, összeszorítják a szájukat vagy összeszorítják a fogukat, vagy izgulnak, kiköpik az ételt vagy nem hajlandók lenyelni. A ténylegesen lenyelt MDCF/RUSF mennyiségét úgy számítjuk ki, hogy a maradékot levonjuk a felajánlott mennyiségből. Előre lemért szalvétákat biztosítunk; a visszafolyt, hányt vagy kiömlött ételt lekenjük, lemérjük és levonjuk a felajánlott mennyiségből. Elemezzük az elfogyasztott élelmiszer mennyiségét (g), az energiát (kcal) és az elfogadhatósági kategóriát. A beiratkozott gyermekeket a helyszíni kutatási asszisztensek naponta ellenőrzik az esetleges mellékhatások/nemkívánatos események (pl. kiütés, csalánkiütés ételallergia vagy a klinikai állapot bármely jelentős változása miatt) egy hétig. Ha bármilyen mellékhatást/nemkívánatos eseményt észlelnek, azokat a standard ellátásnak megfelelően kezelik. Szabványos gyártási eljárást kell követni a RUSF és az MDCF minőségének ellenőrzésére a nemzetközi szabvány protokoll szerint. A RUSF-et és az MDCF-et az élelmiszer-feldolgozó laboratóriumban készítik el. Az élelmiszerek különböző lépésekben történő elkészítését, azaz a pörkölést, a szemcseméret-csökkentést, a homogén turmixolást és a táplálkozási központokba való bejuttatást az icddr,b kutatók ellenőrzik. Az ételeket minden nap elkészítjük, hogy az elkészítés során ne következzen be váratlan szennyeződés és tápanyagveszteség. Bár a nyers élelmiszer-összetevőket nagyon gondosan beszerzik a helyi piacról, és ésszerű mennyiségben tárolják, a nyomozók az MDCF és a RUSF elkészítésének napján elkészítik, kiadják és etetik a gyerekeket. Az első 4 hétben minden gyermeknek naponta kétszer 25 gramm diétát kínálnak az etetőközpontban. A következő hónapban a gyermeknek 25 g táplálékot kínálnak az etetőközpontban, és további 25 g-ot egy tiszta edényben, hogy otthon etethessen. A harmadik hónapban minden nap két külön 25 grammos diétát tartalmazó edényt biztosítunk minden beíratott gyermeknek a résztvevő otthonában.

Ebben a tanulmányban a tápláltsági állapotot antropometriával értékelik, összehasonlítva a WHO növekedési referenciastandardjaival. A vizsgálat elején információkat keresnek a demográfiai jellemzőkről (családok vagyoni helyzete, lakhatási színvonal, családszerkezet és szülői jellemzők stb.), és az FRA-k digitális mérleggel, 2g-os pontossággal rögzítik a gyerekek súlyát (Seca, 728-as modell, Németország), hossza (csecsemőmérővel, Seca, 416-os modell, Németország) és a felkar középső kerülete mm pontossággal (nem nyúló behelyezőszalaggal). Az antropometriát a szabványos eljárások szerint végezzük, és minden mérést háromszor végeznek el, a középsőt pedig rögzítik.

Az egyes vizsgálatokban végzett összes beavatkozást a Mirpur egészségügyi klinikán/RADDA klinikán vagy Kurigramban adják be a gyerekeknek. Az anyáknak/elsődleges gondozóknak azt tanácsolják, hogy tartsák be gyermekük jelenlegi étkezési és szoptatási gyakorlatát.

A nyomozók 12 hónapon belül befejezik a beiratkozást, további 6 hónapon belül pedig a nyomon követést és az adatelemzést. Ez az elsődleges MAM-on végzett vizsgálat azonban egyidejűleg folytatódik a másik, a Post SAM-MAM klinikai vizsgálatával, amely hosszabb ideig tart.

A toborzás, a szűrés és a beleegyező népszámlálás, a szűrés és a vizsgálatban résztvevők felvétele a dakkai és a Kurigram-i helyszínek vonzáskörzetében történik. Azon gyermekek szüleit, akik megfelelnek a MAM-kritériumoknak (az elsődleges MAM-vizsgálathoz), megkeresik a vizsgálatba való beiratkozással kapcsolatban. A helyszíni kutatási asszisztens részletesen elmagyarázza a vizsgálatot, válaszol a szülő(k) bármely kérdésére, és felkéri a szülő(k)et, hogy írják be a gyermeket a vizsgálatba.

A vizsgálat elején információkat keresnek a demográfiai jellemzőkről (családok vagyoni helyzete, lakhatási színvonal, családszerkezet és szülői jellemzők stb.), és az FRA-k digitális mérleg segítségével rögzítik a gyerekek súlyát 2 g-os pontossággal, hosszúsággal. (csecsemőmérő használatával), és a felkar középső kerülete mm pontossággal. A vizsgálat résztvevőit arra kérik, hogy közvetlenül a táplálkozási központba jöjjenek táplálkozási terápia céljából.

Az MDCF 2 és a RUSF elkészítése A fent leírt Pre-POC vizsgálatban azonosított kiegészítő élelmiszer-összetevők kompatibilis kombinációi alapján az MDCF2-t, valamint a rizs-lencse RUSF-et az icddr,b élelmiszer-feldolgozó üzemben fognak előállítani Mirpurban és Kurigramban. mindkét helyen létre kell hozni) a klinikai vizsgálathoz elegendő mennyiségben. A két diéta energiasűrűségében és mikrotápanyag-tartalmában megegyezik. Az MDCF energiasűrűsége 125 kcal/25 g (adagonként), és a kalóriaeloszlást 45-50 százalékban zsírból és 8-10 százalékban fehérjéből kívánják elérni. Az MDCF prototípusok fejlesztésére és az érzékszervi tulajdonságok értékelésére vonatkozó kísérleteket a Pre-POC klinikai vizsgálat során végezték. Az alapanyagok (rizs/lencse/csicseriborsó) átvétele után az idegen anyagokat/szemeket vagy magvakat (ha van) kiszedjük, majd nyitott serpenyőben megpörkölik az alapanyagokat. A pörkölés hőmérsékletét 120-130 °C-on kell tartani. Általában 8-10 percet vesz igénybe 100 g nyersanyag megsütése. A folyamatos keverés elengedhetetlen az egyes magvak/szemek pörkölésének biztosításához. A pörkölés befejezése után félretesszük hűtésre, majd vigyorogni kell. Végül hozzáadjuk az előre lemért előkeverékport. Az egész zöld banán feldolgozása az MDCF2-be való felvételhez eltér a többi összetevőtől. A bőrös zöld banánt egy mély serpenyőbe helyezzük forrásban lévő vízbe (100-110 °C), és körülbelül 17-20 percig főzzük, amíg megpuhul és megpuhul. A zöld banán héját lehúzzuk, az ehető fehér részt pedig kis darabokra reszeljük. Ezután egy edénybe tesszük és hagyjuk kihűlni. A kis banándarabokat kanállal/kézi aprítóval összetörjük. Az összes többi összetevő tömegét rögzítjük. A recepteket kis tételekben állítják elő úgy, hogy az összes hozzávalót összekeverik egy elektromos turmixgépben. Kis mennyiségű (1 százalék) szójalecitint kell hozzáadni a recepthez, hogy javítsa az állagot és megakadályozza az olajleválást.

Antropometria A gyermek életkorát a gyermek születési dátumáról szóló dokumentumok (születési anyakönyvi kivonat vagy oltási kártya, ha van) vagy gondozói jelentés alapján igazolják. A hosszt 0,1 cm-re érzékeny csecsemőmérővel mérjük. A testtömeg mérése 2g-ra érzékeny mérleggel történik. Az életkorhoz viszonyított hossz (LAZ), súly-hosszúság (WLZ) és súly-életkor (WAZ) Z-pontszámok a WHO (Egészségügyi Világszervezet) növekedési szabványai szerint kerülnek kiszámításra a Multicentre Growth Reference Study (MGRS) szerint. Az ödéma vizsgálata mindkét láb felső részének 3 másodpercig tartó megnyomásával történik. A középső felkar kerületét (MUAC) MUAC szalaggal (UK) mérik. A mérőberendezések rendszeres szabványosítása szabványok segítségével történik.

Plazma- és székletminták elemzése Az ebből a kísérletből gyűjtött plazmamintákat Dr. Jeffrey Gordon laboratóriumába küldik a St. Louis-i Washington Egyetem Genomtudományi és Rendszerbiológiai Központjában. Fejlett tömegspektroszkópiai és immunológiai vizsgálaton alapuló módszereket fognak használni, hogy új ismereteket szerezzenek a bél mikrobiota éretlenségének szerepéről, valamint az éretlenség ólom-mikrobiota által irányított kiegészítő táplálékkal (MDCF) történő akut helyreállításának hatásairól az egészséges növekedés biomarkereire és közvetítőire. . Összehasonlításokat végeznek a kontrollcsoporttal (azaz a referencia RUSF szabványt fogyasztókkal). A célzott ultrateljesítményű folyadékkromatográfiás tömegspektrometriát (UPLC-MS) és a gázkromatográfiás-tömegspektrometriát (GC-MS) fogják használni a plazma- és/vagy székletmintákban a specifikusan érdekelt analitok, köztük az epesavak és a rövid szénláncú zsírsavak (SCFA-k) profilálására. ); a mitokondriális működés markerei (például β-hidroxi-butirát, acilkarnitinek/acilCoA-k, TCA ciklus közbenső termékek); aminosavak a szérumban és a székletmintákban [elágazó láncú aminosavak, triptofán és triptofán metabolitok, amelyek a növekedéshez és a gyulladásos állapothoz kapcsolódnak, beleértve azokat is, amelyeket a bakteriális triptofán metabolizmus (pl. indol-ecetsav-származékok)]. A lineáris növekedés (pl. növekedési hormon és IGF-1), az energiafelhasználás (inzulin, leptin) és a csontbiológia kulcsfontosságú mediátorai/biomarkerei [IL-6 (Interleukin-6), oszteoprotegerin, az I-es típusú kollagén C-terminális peptidje (CTX, az oszteoklasztaktivitás/csontreszorpció markere), valamint az 1-es típusú prokollagén amino-terminális propeptidje (P1NP, az oszteoblaszt aktivitás/csontképződés markere)], valamint a szisztémás gyulladás (CRP, AGP) mennyiségi meghatározása a megállapított módszerekkel történik. ELISA/Luminex vizsgálatok. A vérben lévő fehérjéket a SOMAlogic szkenneléssel azonosítják, amely több mint 1300 különböző fehérje azonosítását teszi lehetővé. A SAM-ban szenvedő gyermekek plazmamintáin végzett proteomikai vizsgálat az előző, Dakában végzett Pre-POC vizsgálatunkban már számos jelentős és klinikailag releváns összefüggést igazolt bizonyos fehérjék és klinikai fenotípusok között a SOMAlogic vizsgálat segítségével.

Az összegyűjtött információkat emberi székletminták kiválasztására fogják felhasználni csíramentes állatokba való átültetéshez a St Louis-i Gordon Labban; ezeket az állatokat, amelyeket humán mikrobióta donoraik étrendjével etetnek, az MDCF prototípusait, a bélmikrobiótát és a gazdaszervezet fiziológiáját/metabolizmusát összekapcsoló mechanizmusok további jellemzésére fogják használni. Ezenkívül ezeket a plazma és széklet biomarkereket fogják használni annak meghatározására, hogy az MDCF elősegíti a mikrobiota éretlenségének helyreállítását és javítja a gyermekek biológiai állapotát.

A minta méretének kiszámítása A különböző MDCF-ekkel végzett POC előtti vizsgálatban az MDCF2-t kapó gyermekek kiindulási súly-hosszúságú Z pontszáma -2,2, egy hónapos kiegészítés után pedig -1,7 volt. Ha ez a WLZ -2 az alapvonalon és a -1,7 a végvonalon, összevont SD (standard eltérés) 0,53, akkor a minta mérete 49 mindkét karban 80%-os teljesítmény és 5%-os szignifikanciaszint mellett.

20%-os lemorzsolódás mellett 62 gyermeket kell beíratni mindkét karba. Ezért az elsődleges MAM-próbában 62 gyermek MDCF2-t, 62 gyermek pedig rizslencse RUSF-et kap.

Adatelemzés A MAM-ban szenvedő gyermekek két csoportját összehasonlítják az alapvonalon és különböző időpontokban. A Plazma- és székletminták elemzése című részben említett összes analit összehasonlításra kerül az MDCF2 és RUSF csoportok között.

Adatbiztonsági felügyeleti terv (DSMP) A tanulmány adatgyűjtési eszközei közé tartoznak az esetleírások, a laboratóriumi munkalapok és a forrásdokumentáció. A teljes forrásdokumentációt (tanulmányi látogatások, laboratóriumi jelentések stb.) minden egyes vizsgálati résztvevő esetében egyedi vizsgálati táblázatokban tárolják. Minden laboratóriumi mintát, jelentést, vizsgálati adatgyűjtést és adminisztratív űrlapot kódolt számmal azonosítanak a vizsgálatban résztvevők bizalmas kezelésének és nyomon követésének lehetővé tétele érdekében a vizsgálat során.

Az űrlapokat, listákat, naplókat, időpont-naplókat és minden egyéb olyan adatlapot, amely a tanulmányi résztvevő azonosítószámát (azonosító) más azonosító információhoz köti, a rendszer külön, zárolt fájlban tárolja egy korlátozott hozzáférésű területen. A vizsgálatban részt vevőkkel kapcsolatos minden információt jelszóval védett számítógépes fájlokban vagy zárt iratszekrényekben tárolunk, amelyekhez csak az arra feljogosított vizsgálati személyzet férhet hozzá. A diagraminformációkat és a vizsgálati rekordokból származó információkat nem adjuk ki a vizsgálatban résztvevő szülőjének írásos engedélye nélkül. A feljegyzéseket azonban az icddr,b Kutatási Felülvizsgálati Bizottságának és Etikai Felülvizsgálati Bizottságának képviselői is felülvizsgálhatják.

A vizsgálatot végzők felelősek azért, hogy biztosítsák a teljes és pontos dokumentációt a vizsgálatra és minden egyes vizsgálati résztvevőre vonatkozóan, ideértve: orvosi feljegyzéseket, minden egyes vizsgálati résztvevőnek a vizsgálat során elért előrehaladását részletező feljegyzéseket, laboratóriumi jelentéseket, esetjelentési űrlapokat (CRF), aláírt, tájékoztatáson alapuló beleegyezési űrlapokat, levelezés az IRB-vel (Institutional Review Board), a nemkívánatos eseményekről szóló jelentések, valamint a résztvevők abbahagyásával és a vizsgálat befejezésével kapcsolatos információk. Az arra feljogosított vizsgálati személyzet minden szükséges adatot egyértelműen és pontosan rögzít a CRF-ekben. Csak a vizsgálati helyszín kijelölt személyzete, aki megfelelő képzésben részesült, rögzíthet vagy módosíthat adatokat a CRF-ben. A vizsgálók felelősek az adatok beszerzéséért és a CRF-ekben rögzített adatok minőségéért. Az adatbevitel és -kezelés az icddr,b címen történik.

Az emberi jogok védelmének etikai biztosítéka A tanulmányt az icddr,b Kutatási Felülvizsgálati Bizottság és az Etikai Felülvizsgálati Bizottság IRB jóváhagyása után kezdik meg. A vizsgálatba való beiratkozás előtt a vizsgálatban részt vevők törvényes képviselőjének írásos beleegyezését kell kérni. A vizsgálatban résztvevőket azonosító adatok/információk magánéletét, anonimitását és titkosságát szigorúan fenntartjuk. A beiratkozás és egyéb tanulmányi eljárások során felvett személyazonosító okmányokat zárva tartjuk. A vizsgálati személyzeten kívül senki más nem férhet hozzá a személyazonosító adatokhoz és más érzékeny információkhoz.

Ebben a protokollban a várható kockázatok/mellékhatások a vérminta vételével, a székletminta vételével és a mikrobióta által irányított kiegészítő táplálékkal kapcsolatosak. Ezek egyike sem minősül súlyos nemkívánatos eseménynek (SAE). A vérvétellel kapcsolatos várható nemkívánatos események (EAE) a következők:

• kényelmetlenség
• fájdalom
• fertőzés bevezetése
• vérzés

• ájulás vagy véraláfutás

  • Óvintézkedéseket kell tenni a fertőzés bejutásának elkerülése érdekében a vénapunkció helyének fertőtlenítésével és steril felszereléssel
  • A vérzés és a zúzódások kockázata minimálisra csökken, ha a vénapunkciót követően azonnali nyomást alkalmaznak
  • A résztvevő (gyermek) a vérvétel során ülő vagy fekvő helyzetben kell lennie, hogy elkerülje az ájulásból eredő sérüléseket

Minden lehetséges nemkívánatos eseményt megfelelően kezelnek. Ezek a következők lesznek:

• Hányás
• Hasmenés
• Bőrkiütés
• Az ételallergia okozta csalánkiütés
• Hasi feszülés
• Hasi fájdalom A nemkívánatos események értékelése Mind a súlyos, mind a nem súlyos nemkívánatos események súlyosságát értékelni kell; kapcsolat a tanulmányi részvétellel; megtett intézkedések; és az eredményeket. Minden SAE-t jelentenek az icddr,b ERC-jének 24 órán belül azután, hogy a helyszín tudomást szerzett az eseményről, amit viszont kiosztanak a szponzornak. Ez közvetlen telefonon, faxon vagy e-mailben történik.

Az AE értékelés minden kategóriája a következő osztályozási rendszerek szerint lesz kódolva:

Súlyosság:

1. Enyhe
2. Mérsékelt
3. Szigorú

Kapcsolat a tanulmányi részvétellel:

1. Határozottan összefügg: egyértelmű időbeli asszociáció, nincs más lehetséges ok
2. Lehetséges összefüggés: Kevésbé egyértelmű időbeli asszociáció, egyéb okok lehetségesek
3. Nincs összefüggés: A tanulmánytól függetlenül bizonyíték van arra, hogy az esemény határozottan összefügg egy másik etiológiával

Műveletek:

Nincs Gyógyító terápia (egy adagnál több gyógyszer szükséges) Véglegesen megszakítva a vizsgálatban való részvételtől Kórházi kezelés Az állatok egyéb felhasználása Nem alkalmazható Együttműködési megállapodások Ez a projekt a Washingtoni Egyetem Orvostudományi Karának kutatói és a Hasmenés Betegségek Kutatóközpontja közötti együttműködés eredménye. , Banglades (icddr,b). A klinikai munkát és a tereptevékenységet a bangladesi Dakkában végzik, a vezető kutató közvetlen felügyelete alatt, míg a laboratóriumi elemzéseket a St. Louis-i Washington Egyetem Gordon Labjában végzik majd. Minden kutatóegység és az együttműködő kutatók hosszú nemzetközi együttműködési múlttal rendelkeznek. Minden vizsgáló kommunikált a projekt fejlesztése során, és elkötelezett a sikeres megvalósítás mellett.

Rendelkezésre álló létesítmények Az icddr,b jól felszerelt élelmiszer-feldolgozó laborral rendelkezik, amely megkönnyíti a diétás receptek elkészítését. Számos projektiroda található Mirpurban. Ennél is fontosabb, hogy kiváló kapcsolat alakult ki a közösséggel. A közösségi elitet és az időseket minden évben meghívják egy tájékoztató találkozóra, hogy tájékozódjanak az éppen folyó kutatásról.

Genome Sciences Center, Washington Egyetem St. Louisban: