Autologiset Ex Vivo -laajentuneet säätelevät T-solut haavaisessa paksusuolentulehduksessa

Vaikka tulehduksellisen suolistosairauden (IBD) kehittymisen ensisijainen syy on edelleen tuntematon, on laajalti hyväksytty, että alkuperäiset tapahtumat huipentuvat pysyviin immuunivasteisiin, joihin liittyy immuunisolujen tunkeutuminen ja kudosten tuhoutuminen suolistossa. IBD-potilaiden tulehtuneessa suolen seinämässä olevia immuunisolupopulaatioita on karakterisoitu ja tutkittu laajasti (1; 6). T-soluihin keskittyvät tutkimukset ovat osoittaneet, että Crohnin tautia (CD) sairastavien potilaiden limakalvoa hallitsevat Th1-solut, kun taas haavaisen paksusuolitulehduksen (UC) potilailla T-auttajasoluja, joilla on epätyypillinen Th2-profiili ja jotka tuottavat liikaa IL-5:tä ja IL- 13, mutta ei IL-4:ää, on runsaasti (7). Lisäksi Th17-soluja voidaan tunnistaa tulehtuneesta lamina propriasta ja näillä soluilla uskotaan olevan tärkeä rooli IBD:n patofysiologiassa, vaikka näiden solujen patogeenisiä mekanismeja ei vielä täysin ymmärretä (8;9). Tregejä on myös lamina propriassa, ja nämä solut säätelevät edellä mainittuja efektori-T-solupopulaatioita. Ne voidaan tuottaa paikallisten T-solujen vuorovaikutuksella CD103:a ilmentävien dendriittisolujen ja suoliston epiteelisolujen kanssa, vastaavasti (10; 11). Lisäksi integriinien ilmentyminen Tregin pinnalla (esim. α4β7) helpottaa limakalvojen kulkeutumista vuorovaikutuksellaan spesifisten ligandien (esim. MAdCAM1). Sellaisenaan Treg-solujen kotiutuminen ja paikallinen laajeneminen luovat paikallisen Treg-poolin, joka on välttämätön itsetoleranssille ja suoliston homeostaasin tukemiselle (12). Lisäksi Treg-solujen on osoitettu tukahduttavan proinflammatorisia suoliston immuunivasteita paksusuolentulehduksessa ja koliittiin liittyvässä syövässä (13-16), ja niiden uskotaan lisäävän suoliston Th17-vasteita (17). Koska aiemmat tutkimukset ovat osoittaneet limakalvon Treg-solujen riittämättömän laajentumisen IBD-potilailla verrattuna efektori-T-solujen massiiviseen paikalliseen laajenemiseen, on todennäköistä, että Treg-solujen suhteellisen alhainen määrä IBD-potilailla selittää, miksi nämä solut eivät pysty hallitsemaan liiallisia immuunivasteita. (18).

Kokeelliset koliittitutkimukset hiirillä ovat osoittaneet, että kolitogeenisiä immuunivasteita voidaan hallita lisäämällä limakalvon Treg-solujen määrää ja tuovat esiin Treg-pohjaisen soluterapian potentiaalin IBD:ssä (19). Tarkemmin sanottuna naiivien CD4+ T-solujen yhteissiirto Tregin kanssa sekä ehkäisee kroonista paksusuolentulehdusta että parantaa vakiintunutta paksusuolentulehdusta vaikean yhdistetyn immuunivajavuuden (SCID) hiirillä (20). Lisäksi rapamysiinin läsnä ollessa ex vivo lisääntyneet CD4+-T-solut estävät paksusuolentulehduksen kehittymisen naiiveissa CD4+-T-solumallissa SCID-hiirissä. Tärkeää on, että rapamysiinin systeeminen anto yksin esti vain osittain paksusuolen tulehduksen kehittymisen (20). Lisäksi nTreg-solujen adoptiivinen siirto sekä ex vivo transformoivan kasvutekijän (TGF)-β:n indusoiman Treg (iTreg) siirto suppressoivat koliittiaktiivisuutta in vivo hiirimalleissa (13;15;21). Yhdessä nämä tiedot viittaavat siihen, että Treg-soluja voitaisiin käyttää suoliston tulehduksen hoitoon IBD:ssä (22).

Suurien Treg-määrien adoptiivisen siirron mahdollistamiseksi CD25+ Treg -solut eristetään autologisesta leukafereesituotteesta ja niitä kasvatetaan in vitro 21 päivän ajan interleukiini-2:n (IL-2), rapamysiinin ja anti-CD3/anti-lisäaineiden läsnä ollessa. -CD28 laajennushelmet. 21 päivän laajentamisen jälkeen anti-CD3/anti-CD28-laajentajahelmet poistetaan Treg-lääketuotteesta. Seuraavaksi Tregit pakastetaan 10 miljoonan Treg/ml:n erissä jatkokäyttöön asti (5).

Kaksitoista potilasta, mukaan lukien 10 %:n potilasmenetys, mikä johtaa vähintään kymmeneen hoidettuun ja täysin arvioitavissa olevaan potilaaseen, otetaan mukaan tähän yhden keskuksen avoimeen, nopeutettuun annoskorotustutkimukseen. Autologiset ex vivo -laajennetut CD4+CD25+CD127-/lo Treg-solut siirretään adoptiivisesti potilaille, joilla on haavainen paksusuolitulehdus, jolla on aktiivinen sairaus tai stabiili sairaus sallitun samanaikaisen hoidon mukaisesti ilmoittautumisajankohtana. Maksimaalinen siedetty annos (MTD) määritellään annokseksi, joka ei aiheuta enempää kuin yhtä annosta rajoittavaa toksisuutta (DLT) yhteensä neljällä hoidetulla potilaalla tietyllä annostasolla.

Ensimmäinen tutkimuspotilas saa aloitusannoksen 0,5 x 10e6 Treg/kg. Adoptiivinen siirto eskaloidaan seuraavalle annostasolle (1 x 10e6 Treg/kg, 2 x 10e6 Treg/kg, 5 x 10e6/Treg/kg ja 10 x 10e6 Treg/painokilo) seuraavassa potilaassa, jos DLT:tä ei tapahdu. . Peräkkäisiä potilaita hoidetaan vähintään neljän viikon välein akuuttien vakavien haittavaikutusten seuraamiseksi. Jos DLT havaitaan, kolme muuta potilasta saavat saman annostason. Annoksen nostaminen jatkuu, kunnes vähintään kaksi potilasta neljän potilaan kohortissa kokee DLT:n. Jos kaksi potilasta neljän potilaan kohortissa kokee DLT:n, annosta pienennetään korkeimmalle aiemmin siedetylle annostasolle. Kolme muuta potilasta saa suurimman aiemmin siedetyn annoksen. Jos DLT havaitaan vähintään kahdella potilaalla testatulla annostasolla, annoksen pienentämistä jatketaan, kunnes alle kaksi potilasta on kokenut DLT:n. Kun rekisteröinti on onnistunut korkeimmalla annostasolla, viisi muuta potilasta otetaan mukaan korkeimmalla annostasolla turvallisuusarvioinnin laajentamiseksi. Jos DLT:tä ei havaita tai alle kaksi DLT:tä ei havaita kaikilla testatuilla annostasoilla, MTD:tä ei saavuteta. Tässä tapauksessa määritetään suurin annos (MAD).