Autologiczne rozszerzone limfocyty T regulatorowe ex vivo we wrzodziejącym zapaleniu jelita grubego

Podczas gdy główna przyczyna rozwoju nieswoistego zapalenia jelit (IBD) pozostaje nieznana, powszechnie przyjmuje się, że początkowe zdarzenia kończą się trwałymi odpowiedziami immunologicznymi z naciekiem komórek odpornościowych i zniszczeniem tkanki w jelitach. Populacje komórek odpornościowych obecne w zapalnej ścianie jelita u pacjentów z IBD zostały szeroko scharakteryzowane i zbadane (1;6). Badania koncentrujące się na komórkach T wykazały, że błona śluzowa pacjentów z chorobą Leśniowskiego-Crohna (CD) jest zdominowana przez komórki Th1, podczas gdy u pacjentów z wrzodziejącym zapaleniem jelita grubego (UC) komórki T pomocnicze o nietypowym profilu Th2, które nadmiernie wytwarzają IL-5 i IL- 13, ale nie IL-4, są obfite (7). Ponadto komórki Th17 można zidentyfikować w zmienionej zapalnie blaszce właściwej i uważa się, że komórki te odgrywają ważną rolę w patofizjologii IBD, chociaż mechanizmy patogenetyczne tych komórek nie są jeszcze w pełni poznane (8;9). Treg są również obecne w blaszce właściwej i te komórki kontrolują wspomniane powyżej populacje efektorowych komórek T. Mogą być generowane przez interakcję lokalnych limfocytów T z odpowiednio komórkami dendrytycznymi i komórkami nabłonka jelit wykazującymi ekspresję CD103 (10;11). Ponadto ekspresja integryn na powierzchni Treg (np. α4β7) ułatwia migrację błony śluzowej poprzez ich oddziaływanie ze specyficznymi ligandami (np. MAdCAM1). Jako takie, zasiedlanie i lokalna ekspansja komórek Treg tworzą lokalną pulę Treg, która jest niezbędna do samotolerancji i wspierania homeostazy jelit (12). Ponadto wykazano, że komórki Treg hamują prozapalne jelitowe odpowiedzi immunologiczne w zapaleniu jelita grubego i raku związanym z zapaleniem jelita grubego (13-16) i uważa się, że wzmacniają odpowiedzi jelitowe Th17 (17). Ponieważ poprzednie badania wykazały niewystarczającą ekspansję komórek Treg błony śluzowej u pacjentów z IBD w porównaniu z masową lokalną ekspansją efektorowych komórek T, jest prawdopodobne, że stosunkowo niska liczba komórek Treg u pacjentów z IBD wyjaśnia, dlaczego komórki te nie kontrolują nadmiernych odpowiedzi immunologicznych (18).

Eksperymentalne badania zapalenia jelita grubego na myszach wykazały, że kolitogenne odpowiedzi immunologiczne można kontrolować poprzez zwiększenie liczby komórek Treg błony śluzowej i podkreślają potencjał terapii komórkowej opartej na Treg w nieswoistym zapaleniu jelit (19). Konkretnie, współprzeniesienie naiwnych komórek T CD4 + z Treg zarówno zapobiega przewlekłemu zapaleniu okrężnicy, jak i łagodzi ustalone zapalenie okrężnicy u myszy z ciężkim złożonym niedoborem odporności (SCID) (20). Co więcej, limfocyty T CD4+ namnażały się ex vivo w obecności rapamycyny, zapobiegając rozwojowi zapalenia okrężnicy w naiwnym modelu komórek T CD4+ u myszy SCID. Co ważne, ogólnoustrojowe podawanie samej rapamycyny tylko częściowo zapobiegało rozwojowi zapalenia okrężnicy (20). Ponadto adopcyjny transfer komórek nTreg, jak również adoptywny transfer ex vivo transformującego czynnika wzrostu (TGF)-β indukowanego przez Treg (iTreg) hamował aktywność zapalenia okrężnicy in vivo w mysich modelach (13;15;21). Łącznie dane te sugerują, że komórki Treg mogą być stosowane w leczeniu zapalenia jelit w IBD (22).

Aby umożliwić adopcyjne przeniesienie dużej liczby Treg, komórki Treg CD25+ są izolowane z autologicznego produktu leukaferezy i namnażane in vitro przez 21 dni w obecności dodatków Interleukina-2 (IL-2), rapamycyna i anty-CD3/anty -koraliki ekspandera CD28. Po 21 dniach namnażania kulki ekspandera anty-CD3/anty-CD28 usuwa się z produktu leczniczego Treg. Następnie Treg zamraża się w porcjach po 10 milionów Treg/ml do dalszego użycia (5).

Dwunastu pacjentów, w tym 10% pacjentów utraconych, co skutkuje co najmniej dziesięcioma leczonymi i w pełni kwalifikującymi się do oceny pacjentami, zostanie włączonych do tego jednoośrodkowego, otwartego, przyspieszonego badania z eskalacją dawki. Autologiczne namnażane ex vivo komórki CD4+CD25+CD127-/lo Treg zostaną przeniesione adopcyjnie u pacjentów z wrzodziejącym zapaleniem jelita grubego z chorobą aktywną lub chorobą stabilną w ramach dozwolonej terapii towarzyszącej w momencie włączenia. Maksymalną tolerowaną dawkę (MTD) definiuje się jako dawkę, która nie powoduje więcej niż jednej toksyczności ograniczającej dawkę (DLT) wśród ogółem czterech leczonych pacjentów przy określonym poziomie dawki.

Pierwszy włączony pacjent otrzyma początkową dawkę początkową 0,5 x10e6 Treg/kg masy ciała. Transfer adopcyjny jest eskalowany do następnego poziomu dawki (1 x 10e6 Treg/kg, 2 x 10e6 Treg/kg, 5 x 10e6/Treg/kg i 10 x 10e6 Treg/kg masy ciała), u kolejnego pacjenta, jeśli nie wystąpi DLT . Kolejni pacjenci będą leczeni w odstępie co najmniej czterech tygodni w celu monitorowania ostrych, ciężkich działań niepożądanych. W przypadku odnotowania DLT trzech dodatkowych pacjentów otrzyma ten sam poziom dawki. Zwiększanie dawki trwa do momentu, gdy co najmniej dwóch pacjentów spośród kohorty czterech pacjentów doświadczy DLT. Jeśli dwóch pacjentów spośród kohorty czterech pacjentów doświadczy DLT, nastąpi deeskalacja dawki do najwyższego wcześniej tolerowanego poziomu dawki. Trzech dodatkowych pacjentów otrzyma najwyższą wcześniej tolerowaną dawkę. Jeśli DLT zostanie zauważone u co najmniej dwóch pacjentów przy testowanym poziomie dawki, deeskalacja dawki będzie kontynuowana, dopóki mniej niż dwóch pacjentów nie doświadczy DLT. Po pomyślnym włączeniu do najwyższego poziomu dawki pięciu dodatkowych pacjentów zostanie włączonych do najwyższego poziomu dawki w celu rozszerzenia oceny bezpieczeństwa. Jeśli przy wszystkich testowanych poziomach dawek nie wystąpią żadne DLT lub wystąpią mniej niż dwa DLT, MTD nie zostanie osiągnięte. W tym przypadku określana jest maksymalna podawana dawka (MAD).