Cellule T regolatorie espanse ex vivo autologhe nella colite ulcerosa

Sebbene la causa principale dello sviluppo della malattia infiammatoria intestinale (IBD) rimanga sconosciuta, è ampiamente accettato che gli eventi iniziali culminino in risposte immunitarie persistenti con infiltrazione di cellule immunitarie e distruzione dei tessuti nell'intestino. Le popolazioni di cellule immunitarie presenti all'interno della parete intestinale infiammata dei pazienti con IBD sono state ampiamente caratterizzate e studiate (1;6). Studi incentrati sulle cellule T hanno dimostrato che la mucosa dei pazienti con malattia di Crohn (MC) è dominata dalle cellule Th1, mentre nei pazienti con colite ulcerosa (UC) cellule T helper con un profilo Th2 atipico, che producono eccessivamente IL-5 e IL- 13 ma non IL-4, sono abbondanti (7). Inoltre, le cellule Th17 possono essere identificate nella lamina propria infiammata e si ritiene che queste cellule svolgano un ruolo importante nella fisiopatologia dell'IBD, sebbene i meccanismi patogenetici di queste cellule non siano ancora completamente compresi (8;9). Le Treg sono presenti anche all'interno della lamina propria e queste cellule controllano le popolazioni di cellule T effettrici sopra menzionate. Possono essere generati attraverso l'interazione di cellule T locali con cellule dendritiche che esprimono CD103 e cellule epiteliali intestinali, rispettivamente (10;11). Inoltre, l'espressione delle integrine sulla superficie Treg (ad es. α4β7) facilita la migrazione della mucosa attraverso la loro interazione con ligandi specifici (ad es. MAdCAM1). Pertanto, l'homing e l'espansione locale delle cellule Treg creano un pool locale di Treg che è essenziale per l'autotolleranza e il supporto dell'omeostasi intestinale (12). Inoltre, è stato dimostrato che le cellule Treg sopprimono le risposte immunitarie intestinali proinfiammatorie nella colite e nel cancro associato alla colite (13-16) e si pensa che aumentino le risposte Th17 intestinali (17). Poiché studi precedenti hanno dimostrato un'espansione insufficiente delle cellule Treg della mucosa nei pazienti con IBD rispetto alla massiccia espansione locale delle cellule T effettrici, è probabile che il numero relativamente basso di cellule Treg nei pazienti con IBD spieghi perché queste cellule non riescono a controllare le risposte immunitarie eccessive (18).

Studi sperimentali sulla colite nei topi hanno dimostrato che le risposte immunitarie colitogeniche possono essere controllate aumentando il numero di cellule Treg della mucosa ed evidenziano il potenziale della terapia cellulare a base di Treg nell'IBD (19). In particolare, il co-trasferimento di cellule T CD4+ naïve con Treg previene la colite cronica e migliora la colite stabilita nei topi con immunodeficienza combinata grave (SCID) (20). Inoltre, le cellule T CD4+ espanse ex vivo in presenza di rapamicina prevengono lo sviluppo della colite in un modello di cellula T CD4+ naïve nei topi SCID. È importante sottolineare che la somministrazione sistemica della rapamicina da sola ha prevenuto solo parzialmente lo sviluppo dell'infiammazione del colon (20). Inoltre, il trasferimento adottivo di cellule nTreg e il trasferimento adottivo del fattore di crescita trasformante ex vivo (TGF) -Treg indotto da β (iTreg) hanno soppresso l'attività della colite in vivo nei modelli murini (13; 15; 21). Collettivamente, questi dati suggeriscono che le cellule Treg potrebbero essere utilizzate per la terapia dell'infiammazione intestinale nell'IBD (22).

Per consentire un trasferimento adottivo di un gran numero di Treg, le cellule Treg CD25+ vengono isolate da un prodotto di leucaferesi autologo ed espanse in vitro per 21 giorni in presenza degli additivi Interleuchina-2 (IL-2), rapamicina e anti-CD3/anti - Perline di espansione CD28. Dopo 21 giorni di espansione, le sfere di espansione anti-CD3/anti-CD28 vengono rimosse dal prodotto farmaceutico Treg. Successivamente, le Treg vengono congelate in aliquote di 10 milioni di Treg/mL fino a ulteriore utilizzo (5).

Dodici pazienti, inclusa la perdita del 10%, con conseguente almeno dieci pazienti trattati e completamente valutabili, saranno arruolati in questo studio monocentrico, in aperto, di incremento rapido della dose. Cellule CD4+CD25+CD127-/lo autologhe espanse ex vivo saranno trasferite adottivamente in pazienti con colite ulcerosa con malattia attiva o malattia stabile sotto la terapia concomitante consentita al momento dell'arruolamento. La dose massima tollerata (MTD) è definita come la dose che non produce più di una tossicità limitante la dose (DLT) su un totale di quattro pazienti trattati a quel particolare livello di dose.

Il primo paziente arruolato riceverà la dose iniziale iniziale di 0,5 x10e6 Treg/kg di peso corporeo. Il trasferimento adottivo viene aumentato al livello di dose successivo (1 x 10e6 Treg/kg, 2 x 10e6 Treg/kg, 5 x 10e6/Treg/kg e 10 x 10e6 Treg/kg di peso corporeo), in un paziente successivo, se non si verifica alcuna DLT . I pazienti consecutivi saranno trattati ad almeno quattro settimane di distanza per monitorare gli eventi avversi gravi acuti. Se viene rilevata una DLT, altri tre pazienti riceveranno lo stesso livello di dose. L'escalation della dose continua fino a quando almeno due pazienti su una coorte di quattro pazienti sperimentano una DLT. Se due pazienti su una coorte di quattro pazienti sperimentano una DLT, seguirà la riduzione della dose al livello di dose più alto precedentemente tollerato. Altri tre pazienti riceveranno la dose più alta precedentemente tollerata. Se viene rilevata una DLT in almeno due pazienti al livello di dose testato, la riduzione della dose continuerà fino a quando meno di due pazienti avranno manifestato una DLT. Dopo l'arruolamento riuscito al livello di dose più elevato, verranno arruolati altri cinque pazienti al livello di dose più elevato per estendere la valutazione della sicurezza. Se non si verificano DLT o meno di due DLT a tutti i livelli di dose testati, l'MTD non viene raggiunto. In questo caso, viene definita una dose massima somministrata (MAD).