自体体外扩增调节性 T 细胞治疗溃疡性结肠炎

虽然炎症性肠病 (IBD) 发展的主要原因仍然未知，但人们普遍认为，最初的事件最终导致持续的免疫反应，免疫细胞浸润和肠道组织破坏。 IBD 患者发炎肠壁内存在的免疫细胞群已得到广泛表征和研究 (1;6)。 以 T 细胞为重点的研究表明，克罗恩病 (CD) 患者的粘膜以 Th1 细胞为主，而在溃疡性结肠炎 (UC) 患者中，T 辅助细胞具有非典型的 Th2 特征，过度产生 IL-5 和 IL- 13 而不是 IL-4，是丰富的 (7)。 此外，可以在发炎的固有层中鉴定出 Th17 细胞，这些细胞被认为在 IBD 的病理生理学中发挥重要作用，尽管这些细胞的致病机制尚未完全了解 (8;9)。 Treg 也存在于固有层内，这些细胞控制上述效应 T 细胞群。 它们可以通过局部 T 细胞与表达 CD103 的树突状细胞和肠上皮细胞的相互作用分别产生 (10;11)。 此外，整合素在 Treg 表面的表达（例如 α4β7）通过与特定配体（例如 MAdCAM1). 因此，Treg 细胞的归巢和局部扩张创造了一个局部 Treg 池，这对于自我耐受和支持肠道稳态至关重要 (12)。 此外，Treg 细胞被证明可以抑制结肠炎和结肠炎相关癌症中的促炎性肠道免疫反应 (13-16)，并且它们被认为可以增强肠道 Th17 反应 (17)。 由于之前的研究表明，与效应 T 细胞的大量局部扩增相比，IBD 患者粘膜 Treg 细胞的扩增不足，IBD 患者中 Treg 细胞数量相对较少可能解释了为什么这些细胞无法控制过度的免疫反应(18).

小鼠实验性结肠炎研究表明，可以通过增加粘膜 Treg 细胞的数量来控制致结肠炎的免疫反应，并突出了基于 Treg 的细胞疗法在 IBD 中的潜力 (19)。 具体而言，幼稚 CD4+ T 细胞与 Treg 的共同转移既可预防慢性结肠炎，又可改善严重联合免疫缺陷 (SCID) 小鼠的既定结肠炎 (20)。 此外，CD4+ T 细胞在雷帕霉素存在的情况下体外扩增可防止 SCID 小鼠幼稚 CD4+ T 细胞模型中结肠炎的发展。 重要的是，雷帕霉素单独全身给药只能部分阻止结肠炎症的发展 (20)。 此外，nTreg 细胞的过继转移以及离体转化生长因子 (TGF)-β 诱导的 Treg (iTreg) 的过继转移在小鼠模型中抑制了体内结肠炎活性 (13;15;21)。 总的来说，这些数据表明 Treg 细胞可用于治疗 IBD 中的肠道炎症 (22)。

为了允许大量 Treg 的过继转移，从自体白细胞去除术产品中分离出 CD25+ Treg 细胞，并在添加剂 Interleukin-2 (IL-2)、雷帕霉素和抗 CD3/抗抗体存在的情况下在体外扩增 21 天-CD28 扩展珠。 扩增 21 天后，从 Treg 药物产品中去除抗 CD3/抗 CD28 扩增珠。 接下来，将 Treg 以 1000 万 Treg/mL 的等分试样冷冻，直到进一步使用 (5)。

12 名患者，包括 10% 的患者流失，导致至少 10 名接受治疗和完全可评估的患者，将被纳入这项单中心、开放标签、快速剂量递增研究。 自体体外扩增的 CD4+CD25+CD127-/lo Treg 细胞将过继转移到患有活动性疾病或疾病稳定的溃疡性结肠炎患者中，并在入组时允许联合治疗。 最大耐受剂量 (MTD) 定义为在特定剂量水平下，在总共四名接受治疗的患者中不会产生超过一种剂量限制性毒性 (DLT) 的剂量。

第一位入组患者将接受 0.5 x10e6 Treg/kg 体重的初始起始剂量。 如果没有发生 DLT，在下一位患者中过继转移会升级到下一个剂量水平（1 x 10e6 Treg/kg、2 x 10e6 Treg/kg、5 x 10e6/Treg/kg 和 10 x 10e6 Treg/kg 体重） . 连续患者将至少间隔 4 周接受治疗，以监测急性严重不良反应。 如果发现 DLT，另外三名患者将接受相同的剂量水平。 剂量递增一直持续到一组四名患者中的至少两名患者经历 DLT。 如果一组四名患者中有两名患者经历了 DLT，则将剂量递减至先前耐受的最高剂量水平。 另外三名患者将接受先前耐受的最高剂量。 如果在测试的剂量水平下在至少两名患者中发现 DLT，则剂量递减将继续，直到少于两名患者经历 DLT。 在以最高剂量水平成功入组后，将以最高剂量水平入组另外五名患者，以扩展安全性评估。 如果在所有测试的剂量水平下都没有 DLT 或少于两个 DLT，则未达到 MTD。 在这种情况下，定义了最大给药剂量 (MAD)。