Аутологичные Ex Vivo расширенные регуляторные Т-клетки при язвенном колите

Хотя основная причина развития воспалительного заболевания кишечника (ВЗК) остается неизвестной, общепризнано, что начальные явления завершаются стойкими иммунными реакциями с инфильтрацией иммунных клеток и разрушением тканей в кишечнике. Популяции иммунных клеток, присутствующие в воспаленной стенке кишечника у пациентов с ВЗК, были тщательно охарактеризованы и изучены (1; 6). Исследования, посвященные Т-клеткам, показали, что в слизистой оболочке больных болезнью Крона (БК) преобладают Th1-клетки, в то время как у больных язвенным колитом (ЯК) Т-хелперные клетки с атипичным Th2-профилем, которые избыточно продуцируют ИЛ-5 и ИЛ-5. 13, но не ИЛ-4, в изобилии (7). Кроме того, клетки Th17 могут быть идентифицированы в воспаленной собственной пластинке, и считается, что эти клетки играют важную роль в патофизиологии ВЗК, хотя патогенетические механизмы этих клеток еще полностью не изучены (8; 9). Treg также присутствуют в собственной пластинке, и эти клетки контролируют популяции эффекторных Т-клеток, упомянутые выше. Они могут образовываться в результате взаимодействия местных Т-клеток с экспрессирующими CD103 дендритными клетками и эпителиальными клетками кишечника соответственно (10; 11). Более того, экспрессия интегринов на поверхности Treg (например, α4β7) облегчает миграцию слизистой за счет их взаимодействия со специфическими лигандами (например, МАдКАМ1). Таким образом, самонаведение и локальное распространение клеток Treg создают локальный пул Treg, который необходим для самопереносимости и поддержки гомеостаза кишечника (12). Кроме того, показано, что Treg-клетки подавляют провоспалительные кишечные иммунные реакции при колите и раке, ассоциированном с колитом (13–16), и, как полагают, они усиливают кишечные Th17-ответы (17). Поскольку предыдущие исследования продемонстрировали недостаточную экспансию Treg-клеток слизистой оболочки у пациентов с ВЗК по сравнению с массивной локальной экспансией эффекторных Т-клеток, вполне вероятно, что относительно небольшое количество Treg-клеток у пациентов с ВЗК объясняет, почему эти клетки не могут контролировать чрезмерные иммунные реакции. (18).

Экспериментальные исследования колита на мышах продемонстрировали, что колитогенные иммунные реакции можно контролировать путем увеличения количества клеток Treg в слизистой оболочке, и подчеркнули потенциал клеточной терапии на основе Treg при ВЗК (19). В частности, совместный перенос наивных CD4+ Т-клеток с Treg как предотвращает хронический колит, так и облегчает уже развившийся колит у мышей с тяжелым комбинированным иммунодефицитом (SCID) (20). Более того, CD4+ Т-клетки, размножающиеся ex vivo в присутствии рапамицина, предотвращают развитие колита в модели нативных CD4+ Т-клеток у мышей SCID. Важно отметить, что системное введение только рапамицина лишь частично предотвращало развитие воспаления толстой кишки (20). Кроме того, адоптивный перенос клеток nTreg, а также адоптивный перенос ex vivo трансформирующего фактора роста (TGF)-β-индуцированного Treg (iTreg) подавлял активность колита in vivo на моделях мышей (13; 15; 21). В совокупности эти данные свидетельствуют о том, что Treg-клетки можно использовать для лечения воспаления кишечника при ВЗК (22).

Чтобы обеспечить адоптивный перенос большого количества Treg, клетки CD25+ Treg выделяют из продукта аутологичного лейкафереза ​​и размножают in vitro в течение 21 дня в присутствии добавок интерлейкина-2 (ИЛ-2), рапамицина и анти-CD3/анти- -Эспандер CD28. Через 21 день расширения анти-CD3/анти-CD28 расширительные гранулы удаляют из лекарственного продукта Treg. Затем Treg замораживают аликвотами по 10 миллионов Treg/мл до дальнейшего использования (5).

В это одноцентровое открытое исследование ускоренного повышения дозы будут включены 12 пациентов, в том числе 10% потерь пациентов, в результате чего будет по меньшей мере десять пролеченных и полностью поддающихся оценке пациентов. Аутологичные ex vivo размноженные CD4+CD25+CD127-/lo Treg-клетки будут адоптивно перенесены пациентам с язвенным колитом с активным заболеванием или стабильным заболеванием при разрешенной сопутствующей терапии на момент включения. Максимально переносимая доза (MTD) определяется как доза, которая не вызывает более одного дозолимитирующего токсического эффекта (DLT) среди четырех пациентов, получавших лечение при определенном уровне дозы.

Первый зарегистрированный пациент получит начальную начальную дозу 0,5 x 10e6 Treg/кг массы тела. Адаптивный перенос повышается до следующего уровня дозы (1 x 10e6 Treg/кг, 2 x 10e6 Treg/кг, 5 x 10e6/Treg/кг и 10 x 10e6 Treg/кг массы тела) у следующего пациента, если не происходит DLT. . Последовательных пациентов будут лечить с интервалом не менее четырех недель для мониторинга острых тяжелых побочных эффектов. Если отмечен DLT, три дополнительных пациента получат тот же уровень дозы. Повышение дозы продолжается до тех пор, пока по крайней мере у двух пациентов из группы из четырех пациентов не возникнет DLT. Если у двух пациентов из когорты из четырех пациентов возникает ДЛТ, последует деэскалация дозы до самого высокого ранее переносимого уровня дозы. Три дополнительных пациента получат самую высокую ранее переносимую дозу. Если DLT отмечается по крайней мере у двух пациентов при тестируемом уровне дозы, снижение дозы будет продолжаться до тех пор, пока менее чем у двух пациентов не возникнет DLT. После успешного включения в исследование с наивысшим уровнем дозы пять дополнительных пациентов будут включены в исследование с наивысшим уровнем дозы для расширения оценки безопасности. Если ни одного DLT или менее двух DLT не наблюдается при всех протестированных уровнях дозы, MTD не достигается. В этом случае определяется максимальная вводимая доза (MAD).