Autologní ex vivo rozšířené regulační T buňky u ulcerózní kolitidy

Zatímco primární příčina rozvoje zánětlivého onemocnění střev (IBD) zůstává neznámá, je široce přijímáno, že počáteční události kulminují v přetrvávající imunitní odpovědi s infiltrací imunitních buněk a destrukcí tkáně ve střevě. Populace imunitních buněk přítomné v zanícené střevní stěně pacientů s IBD byly rozsáhle charakterizovány a studovány (1;6). Studie zaměřené na T buňky prokázaly, že na sliznici pacientů s Crohnovou chorobou (CD) dominují Th1 buňky, zatímco u pacientů s ulcerózní kolitidou (UC) T pomocné buňky s atypickým Th2 profilem, které nadměrně produkují IL-5 a IL- 13, ale ne IL-4, jsou hojné (7). Kromě toho mohou být buňky Th17 identifikovány v zanícené lamina propria a předpokládá se, že tyto buňky hrají důležitou roli v patofyziologii IBD, ačkoli patogenní mechanismy těchto buněk nejsou dosud plně pochopeny (8;9). Treg jsou také přítomny v lamina propria a tyto buňky kontrolují populace efektorových T buněk uvedené výše. Mohou být generovány interakcí lokálních T buněk s CD103 exprimujícími dendritickými buňkami, respektive střevními epiteliálními buňkami (10;11). Navíc exprese integrinů na povrchu Treg (např. a4p7) usnadňuje migraci sliznice prostřednictvím jejich interakce se specifickými ligandy (např. MAdCAM1). Navádění a lokální expanze Treg buněk jako takové vytváří lokální Treg pool, který je nezbytný pro autotoleranci a podporu střevní homeostázy (12). Navíc se ukázalo, že Treg buňky potlačují prozánětlivé střevní imunitní reakce u kolitidy a rakoviny spojené s kolitidou (13-16) a předpokládá se, že zesilují střevní Th17 reakce (17). Protože předchozí studie prokázaly nedostatečnou expanzi slizničních buněk Treg u pacientů s IBD ve srovnání s masivní lokální expanzí efektorových T buněk, je pravděpodobné, že relativně nízký počet buněk Treg u pacientů s IBD vysvětluje, proč tyto buňky nedokážou kontrolovat nadměrné imunitní reakce. (18).

Experimentální studie kolitidy u myší prokázaly, že kolitogenní imunitní reakce lze kontrolovat zvýšením počtu slizničních buněk Treg a zdůrazňují potenciál buněčné terapie založené na Treg u IBD (19). Konkrétně společný přenos naivních CD4+ T-buněk s Treg jak předchází chronické kolitidě, tak zlepšuje zavedenou kolitidu u myší s těžkou kombinovanou imunodeficiencí (SCID) (20). Navíc CD4+ T buňky expandované ex vivo v přítomnosti rapamycinu zabraňují rozvoji kolitidy v naivním modelu CD4+ T buněk u SCID myší. Důležité je, že systémové podávání samotného rapamycinu pouze částečně zabránilo rozvoji zánětu tlustého střeva (20). Kromě toho adoptivní přenos nTreg buněk, stejně jako adoptivní přenos ex vivo transformačního růstového faktoru (TGF)-β-indukovaného Treg (iTreg) potlačil aktivitu kolitidy in vivo na myších modelech (13;15;21). Souhrnně tato data naznačují, že Treg buňky by mohly být použity k léčbě střevního zánětu u IBD (22).

Aby se umožnil adoptivní přenos velkého množství Treg, jsou CD25+ Treg buňky izolovány z produktu autologní leukaferézy a in vitro expandovány během 21 dnů v přítomnosti aditiv Interleukin-2 (IL-2), rapamycin a anti-CD3/anti -CD28 expandérové ​​korálky. Po 21 dnech expanze se kuličky anti-CD3/anti-CD28 expandéru odstraní z lékového produktu Treg. Dále se Treg zmrazí v alikvotech 10 milionů Treg/ml až do dalšího použití (5).

Dvanáct pacientů, včetně 10% ztráty pacientů, což má za následek alespoň deset léčených a plně hodnotitelných pacientů, bude zařazeno do této otevřené, jednocentrové, rychlé studie s rychlým zvyšováním dávky. Autologní ex vivo expandované CD4+CD25+CD127-/lo Treg buňky budou adoptivně přeneseny u pacientů s ulcerózní kolitidou s aktivním onemocněním nebo stabilním onemocněním v rámci povolené souběžné terapie v době zařazení. Maximální tolerovaná dávka (MTD) je definována jako dávka, která nevyvolává více než jednu dávku omezující toxicitu (DLT) mezi celkem čtyřmi léčenými pacienty při určité hladině dávky.

První zařazený pacient dostane počáteční počáteční dávku 0,5 x 10e6 Treg/kg tělesné hmotnosti. Adoptivní přenos je eskalován na další úroveň dávky (1 x 10e6 Treg/kg, 2 x 10e6 Treg/kg, 5 x 10e6/Treg/kg a 10 x 10e6 Treg/kg tělesné hmotnosti) u dalšího pacienta, pokud nedojde k DLT . Po sobě jdoucí pacienti budou léčeni s odstupem alespoň čtyř týdnů, aby bylo možné sledovat akutní závažné nežádoucí účinky. Pokud je zaznamenána DLT, tři další pacienti dostanou stejnou úroveň dávky. Eskalace dávky pokračuje, dokud alespoň u dvou pacientů z kohorty čtyř pacientů dojde k DLT. Pokud u dvou pacientů ze skupiny čtyř pacientů dojde k DLT, bude následovat deeskalace dávky na nejvyšší dříve tolerovanou úroveň dávky. Tři další pacienti dostanou nejvyšší dříve tolerovanou dávku. Pokud je DLT zaznamenána u alespoň dvou pacientů na testované hladině dávky, bude deeskalace dávky pokračovat, dokud méně než dva pacienti nezaznamenají DLT. Po úspěšném zařazení na nejvyšší dávkovou úroveň bude pět dalších pacientů zařazeno na nejvyšší dávkovou úroveň, aby se rozšířilo hodnocení bezpečnosti. Pokud nejsou zaznamenány žádné DLT nebo méně než dvě DLT na všech testovaných úrovních dávky, MTD není dosaženo. V tomto případě je definována maximální podaná dávka (MAD).