Células T reguladoras expandidas ex vivo autólogas na colite ulcerosa

Embora a causa primária do desenvolvimento da doença inflamatória intestinal (DII) permaneça desconhecida, é amplamente aceito que os eventos iniciais culminam em respostas imunes persistentes com infiltração de células imunes e destruição tecidual no intestino. As populações de células imunes presentes na parede intestinal inflamada de pacientes com DII foram extensivamente caracterizadas e estudadas (1;6). Estudos com foco em células T demonstraram que a mucosa de pacientes com doença de Crohn (DC) é dominada por células Th1, enquanto em pacientes com colite ulcerativa (CU) células T auxiliares com um perfil Th2 atípico, que produzem excessivamente IL-5 e IL- 13, mas não IL-4, são abundantes (7). Além disso, as células Th17 podem ser identificadas na lâmina própria inflamada e acredita-se que essas células desempenhem um papel importante na fisiopatologia da DII, embora os mecanismos patogênicos dessas células ainda não sejam totalmente compreendidos (8;9). Tregs também estão presentes na lâmina própria e essas células controlam as populações de células T efetoras mencionadas acima. Eles podem ser gerados através da interação de células T locais com células dendríticas que expressam CD103 e células epiteliais intestinais, respectivamente (10;11). Além disso, a expressão de integrinas na superfície Treg (por exemplo, α4β7) facilita a migração da mucosa por meio de sua interação com ligantes específicos (por exemplo, MAdCAM1). Como tal, o homing e a expansão local das células Treg criam um pool local de Treg que é essencial para a autotolerância e o suporte da homeostase intestinal (12). Além disso, as células Treg demonstraram suprimir as respostas imunes intestinais pró-inflamatórias na colite e no câncer associado à colite (13-16) e acredita-se que aumentem as respostas intestinais Th17 (17). Como estudos anteriores demonstraram expansão insuficiente de células Treg da mucosa em pacientes com DII em comparação com a expansão local maciça de células T efetoras, é provável que o número relativamente baixo de células Treg em pacientes com DII explique por que essas células falham em controlar respostas imunes excessivas (18).

Estudos experimentais de colite em camundongos demonstraram que as respostas imunes colitogênicas podem ser controladas pelo aumento do número de células Treg da mucosa e destacam o potencial da terapia celular baseada em Treg na DII (19). Especificamente, a co-transferência de células T CD4+ virgens com Treg previne a colite crônica e melhora a colite estabelecida em camundongos com imunodeficiência combinada grave (SCID) (20). Além disso, as células T CD4+ expandidas ex vivo na presença de rapamicina previnem o desenvolvimento de colite em um modelo de célula T CD4+ naïve em camundongos SCID. É importante ressaltar que a administração sistêmica de rapamicina sozinha preveniu apenas parcialmente o desenvolvimento de inflamação colônica (20). Além disso, a transferência adotiva de células nTreg, bem como a transferência adotiva de Treg induzida por fator de crescimento transformador ex vivo (TGF)-β (iTreg) suprimiu a atividade de colite in vivo em modelos de camundongos (13;15;21). Coletivamente, esses dados sugerem que as células Treg podem ser usadas para terapia da inflamação intestinal na DII (22).

Para permitir a transferência adotiva de grande número de Treg, células Treg CD25+ são isoladas de um produto de leucaferese autóloga e expandidas in vitro durante 21 dias na presença dos aditivos Interleucina-2 (IL-2), rapamicina e anti-CD3/anti -Contas expansoras CD28. Após 21 dias de expansão, os grânulos expansores anti-CD3/anti-CD28 são removidos do medicamento Treg. Em seguida, as Treg são congeladas em alíquotas de 10 milhões de Treg/mL até uso posterior (5).

Doze pacientes, incluindo 10% de perda de pacientes, resultando em pelo menos dez pacientes tratados e totalmente avaliáveis, serão inscritos neste estudo de escalonamento de dose de centro único, aberto e rápido. Células Treg CD4+CD25+CD127-/lo expandidas ex vivo autólogas serão transferidas adotivamente em pacientes com colite ulcerativa com doença ativa ou doença estável sob a terapia concomitante permitida no momento da inscrição. A dose máxima tolerada (MTD) é definida como a dose que não produz mais do que uma toxicidade limitante da dose (DLT) entre um total de quatro pacientes tratados no nível de dose específico.

O primeiro paciente inscrito receberá a dose inicial inicial de 0,5 x10e6 Treg/kg de peso corporal. A transferência adotiva é escalonada para o próximo nível de dose (1 x 10e6 Treg/kg, 2 x 10e6 Treg/kg, 5 x 10e6/Treg/kg e 10 x 10e6 Treg/kg de peso corporal), em um próximo paciente, se não ocorrer DLT . Pacientes consecutivos serão tratados com pelo menos quatro semanas de intervalo para monitorar adventos adversos graves agudos. Se for observado um DLT, três pacientes adicionais receberão o mesmo nível de dose. O escalonamento da dose continua até que pelo menos dois pacientes entre uma coorte de quatro pacientes experimentem um DLT. Se dois pacientes em uma coorte de quatro pacientes experimentarem um DLT, seguir-se-á o descalonamento da dose para o nível de dose mais alto previamente tolerado. Três pacientes adicionais receberão a dose mais alta previamente tolerada. Se um DLT for observado em pelo menos dois pacientes no nível de dose testado, o descalonamento da dose continuará até que menos de dois pacientes tenham experimentado um DLT. Após a inscrição bem-sucedida no nível de dose mais alto, cinco pacientes adicionais serão inscritos no nível de dose mais alto para estender a avaliação de segurança. Se nenhum DLT ou menos de dois DLT forem experimentados em todos os níveis de dosagem testados, o MTD não foi atingido. Neste caso, é definida uma dose máxima administrada (MAD).