Pääsyläppäleikkauksen teho gingivaalisiin peridontopatgogeeneihin henkilöillä, joilla on parodontiitti

Tämän tutkimuksen osallistujat olivat henkilöitä, joilla on diagnosoitu vaiheen III aste B parodontiitti vuoden 2017 parodontaalien sairauksien ja tilojen luokittelun World Workshopin kriteerien mukaisesti.

Ei-kirurgista parodontaalihoitoa annettiin kaikkiin kvadrantteihin potilailla, joiden oli määrä osallistua tutkimukseen, käyttäen parodontaalisia käsiinstrumentteja (Gracey curettes, Hu-Friedy®; Chicago, IL) ultraäänilaitteen (Cavitron Plus, Dentsply®, Duisburg) kanssa. , Saksa). Jokaiselle potilaalle tehtiin ei-kirurgisen parodontaalihoidon ensimmäinen vaihe, johon sisältyi supragingivaalisten kerrostumien mekaaninen poisto, motivaatio ja henkilökohtaiset suun hygieniaohjeet, mukaan lukien plakkien hallinta ja hampaiden harjaus modifioidulla Bass-tekniikalla. Ensimmäisellä ensimmäisellä viikolla ensimmäisen istunnon jälkeisellä ei-kirurgisen parodontaalihoidon toinen vaihe, joka sisälsi gingivaalisen instrumentoinnin (SI), suoritettiin kaikille neljälle kvadrantille yhdellä tapaamisella, jonka antoi sama sokeutunut lääkäri. Potilaat eivät saaneet määrättyä lääkettä tai suuvettä. Yhden kuukauden seurantakäynnillä SI:n jälkeen (14 päivää ennen leikkausta) potilaat tutkittiin kliinisesti uudelleen ja heidän yhteensopivuus sisällyttämis-/poissulkemiskriteerien kanssa arvioitiin uudelleen. Potilaat, jotka tarvitsivat pääsyläppäleikkausta, mikä osoitti syvien jäännöstaskujen läsnäoloa (PD ≥ 6 mm), tunnistettiin ja heille tehtiin satunnaistaminen. Parodontaalileikkaukseen suunniteltujen osallistuvien potilaiden eri paikat määritettiin joko pääsyläppäleikkauspaikoiksi (testiryhmä) tai hoitamattomiksi kohteiksi (kontrolliryhmä) satunnaistusmenettelyn avulla. Muita potilaita, joiden ei todettu tarvitsevan pääsyläppäleikkausta, ei otettu mukaan tutkimukseen, vaan heidät otettiin sen sijaan toistuvaan iennaljaiseen instrumentointiin tai tukevaan parodontaalihoito-ohjelmaan.

Potilaille annettiin peräkkäiset nousevat numerot ilmoittautumiskäynnin aikana. Ennen tutkimuksen aloittamista tutkija, joka ei ollut suoraan mukana tutkimuksessa tai hoitoprosessissa, satunnaistti hoitoneljänneksen järjestyksen käyttämällä tietokoneella toimivan satunnaislukugeneraattorin tuottamia satunnaissarjoja. Kohdistuksen piilottaminen saavutettiin käyttämällä läpinäkymättömiä suljettuja kirjekuoria, jotka oli numeroitu peräkkäin. Tämän prosessin perusteella oikean tai vasemman kohdan hampaat nimettiin testiryhmäksi, kun taas vastakkaisen kohdan hampaat määritettiin kontrolliryhmään. Kohde pysyi tutkijalta piilossa koko parodontaalitutkimuksen ja tallenteiden ajan, ja operaattori avasi kirjekuoren vasta ensimmäisellä hoitokäynnillä.

Jokainen potilas, joka täytti tutkimuksen kriteerit, koki yhden seuraavista: suun toinen puoli hoidettiin AFS:llä, kun taas kontralateraaliset neljännekset toimivat kontrollina. Kaikki pääsyleikkaukset suoritti sama sokeutunut parodontologi Paikallisen anestesian jälkeen mukoperiosteaaliläppä nostettiin ja käsiteltiin mikrokirurgisilla instrumenteilla (terät, leikkausveitset, neulanpidike, sakset ja pinsetit, Carl Martin GmbH, Solingen, Saksa) yksinkertaistetun ohjeen mukaisesti. papilla preservation flap (SPFF) -tekniikka. Alveolaariseen luuhun kiinnitetty rakeinen kudos leikattiin, jotta varmistettiin täydellinen pääsy juuren pinnoille ja optimaalinen näkyvyys. Lisäksi instrumentointi suoritettiin ultraääni- ja käsiinstrumenttien yhdistelmällä, eikä läppätoimenpiteen aikana tehty alveolaarisen luun modifikaatioita. Myöhemmin limakalvon läppä asetettiin uudelleen ja suljettiin ensisijaisesti proksimaalisilla yksinkertaisilla ompeleilla käyttämällä monofilamenttiommelmateriaalia (5/0 Propilen, Dogsan, Türkiye). Potilaille annettiin postoperatiivisia suosituksia; lääkkeitä ei kuitenkaan määrätty.

Parodontaaliset mittaukset, mukaan lukien mittaussyvyys (PD) (mm), kliininen kiinnitystaso (CAL) (mm), verenvuoto koetuksella (BOP) (±), ienindeksi (GI) ja plakkiindeksi (PI) arvioitiin kahdella eri hetkellä välein kalibroitu parodontologi, joka oli sokeutunut koekohdille.20 Nämä mittaukset suoritettiin kunkin hampaan kuudesta eri näkökulmasta (disto-bukkaalinen/labiaalinen, mid-buccal/labial, mesio-buccal/labial, disto-lingual/palatinal, mid-lingual/palatinal ja mesio-lingual/palatinal) käyttäen. manuaalinen parodontaalikoetin (Williams-koetin, Hu-Friedy®; Chicago, IL), ja keskiarvo laskettiin. Parodontaalikudosten paranemisen arvioimiseksi tallennettiin yksityiskohtaiset periodontaaliset pisteet ennen pääsyläppäleikkausta ja neljä viikkoa sen jälkeen.

Jokaiselle potilaalle kirjatuista periodontaalisista pisteistä neljä hammasta (kaksi hoitoryhmässä ja kaksi kontrolliryhmässä), jotka osoittivat korkeimman pistemäärän (PD ≥6 mm, CAL ≥5 mm), nimettiin luovutuskohteiksi ienalaiseen plakkinäytteenottoon. Kliinisistä mittauksista vastaava tutkija otti näytteet ennen leikkausta ja kuukausi sen jälkeen. Näytteenottopaikat eristettiin käyttämällä steriilejä puuvillarullia, minkä jälkeen suoritettiin supragingivaalisen plakin poisto hampaan pinnalta. Tämän jälkeen steriloidut paperipisteet (Paperpoint #50, EndoPoint®, Paraiba do Sul, RJ, Brasilia) työnnettiin varovasti määrättyihin parodontaalitaskuihin kohdistaen hellävaraista painetta, kunnes kohtasivat lievän vastuksen. Paperipisteet pidettiin parodontaalitaskussa 20 sekunnin ajan ennen kuin ne siirrettiin varovasti steriileihin mikrosentrifugiputkiin, jotka suljettiin tiukasti säilytystä varten. Näytteet säilytettiin -80°C pakastimessa Trakyan yliopiston teknologian tutkimus- ja kehityssovelluskeskuksessa.

Subgingivaalisten periodontopatogeenien molekyyligeneettisen tunnistamisen ja kvantifioinnin suoritti käyttäjä, joka oli sokeutunut ryhmäjakaumaan. DNA:n eristämiseen käytettiin PureLink® Genomic DNA Mini Kit -sarjaa (INVITROGEN, Massachusetts, USA). Näytteet 1,5 ml:n sentrifugiputkissa sulatettiin huoneenlämpötilassa liukenemista varten sen jälkeen, kun ne oli otettu -80 °C:n pakastimesta. DNA:n eristäminen eteni valmistajan ohjeiden mukaan sisältäen peräkkäiset solulyysivaiheet, DNA:n sitoutumisen suodatinkalvoihin, pesun ja eluoinnin. Tämän jälkeen näytteet sisältävät putket sentrifugoitiin 21 300 x g:ssä 1 minuutin ajan puhtaan mikro-organismien genomisen DNA:n saamiseksi. Nämä eristetyt DNA-näytteet säilytettiin -20 °C:ssa PCR-vaiheeseen asti.

Reaaliaikaisessa kvantitatiivisessa PCR-metodologiassa käytettiin TaqMan®-koettimia (Applied Biosystems™, CA, USA), jotka oli leimattu fluorokromeilla (fluoresoivilla aineilla) 5'- ja 3'-päissä. TaqMan Multiplex Master -sarja on kätevä esiseos kaikista qPCR:n suorittamiseen tarvittavista komponenteista, lukuun ottamatta alukkeita ja koettimia. Se sisältää DNA-polymeraasia, dNTP:itä (adenosiinitrifosfaatti, guanosiinitrifosfaatti, tymidiinitrifosfaatti, sytidiinitrifosfaatti), KCL tai MgCL2 ja polymeraasipuskuria. Tämän tekniikan tarkoituksena on havaita tunnetut genomiset, plasmidi- tai komplementaariset DNA-sekvenssit (cDNA) sekä kvalitatiivisesti että kvantitatiivisesti.

PCR-analyysejä varten 20 µl perusseosta (Applied Biosystems™, CA, USA) laitettiin 96-kuoppaisille mikrolevyille. Sitten 5 μl kustakin tapauksesta otettua DNA-näytettä lisättiin joihinkin näistä kuopista kokeeksi, kun taas 5 μl näytettä, joka oli otettu kolmelta terveeltä potilaalta, jotka eivät olleet mukana tutkimuksessa, lisättiin jäljellä olevaan näytteeseen. kaivoja toimimaan sisäisenä valvontana. Nämä seokset, joiden kunkin kokonaistilavuus oli 25 µl, ajettiin PCR-koneella (ABI 7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems™, CA, USA). QPCR-tutkimusprotokolla sisälsi seuraavat vaiheet: polymeraasin aktivointivaihe ( 1 sykli 95 °C:ssa 3 minuutin ajan), denaturointivaihe (40 sykliä 95 °C:ssa 15 s) ja hehkutus/pidennysvaihe (40 sykliä 5 °C:ssa 30 s).

QPCR-menetelmän yhteydessä syklien lukumäärän kasvu vastaa samanaikaista fluoresoivan väriaineen havaitseman DNA-määrän lisääntymistä. Kynnysjakson arvo (Ct) viittaa syklin numeroon, jossa fluoresenssisäteily ylittää ennalta määrätyn kynnyksen vahvistuksen aikana. Tässä tutkimuksessa subgingivaalisten plakkinäytteiden analyysituloksista saadut Ct-arvot integroitiin 2-ΔCt-kaavaan mikro-organismien määrissä tapahtuvan kertamuutoksen eron laskemiseksi. Ero kohdebakteerien välillä, joka havaittiin lähtötilanteessa ja 1. kuukausi laskettiin käyttämällä seuraavaa kaavaa:

ΔCt: [Ct_kohdebakteeri 1. kuukaudessa] - [Ct_kohdebakteeri lähtötasolla] Kohdebakteerien määrän kertainen muutos 1. kuukaudella verrattuna lähtötilanteeseen: 2-Δ∆Ct Kaikki analyysit suoritettiin käyttämällä SPSS version 23 ohjelmistopakettia (IBM). Corp, Armonk, NY). Kaksi ryhmää, koe- ja kontrolliryhmä, määriteltiin merkittävällä vaikutuskoon (0,4) erolla mikrobimäärissä ja merkitsevyystasolla 0,05. Korrelaatioiden arvioimiseksi toistetuissa mittauksissa korrelaatiokertoimella 0,5 määritettiin 40 tapauksen otoskoko (20 testiä - 20 kontrollia) G*Power 3.1.9.2 -ohjelmistolla. Merkitsevyystasoksi asetettiin p < 0,05.

Jatkuvien muuttujien normaalisuus arvioitiin Shapiro-Wilk-testillä. Myöhemmin, perustuen normaalijakauman oletukseen, suoritettiin vertailut riippumattomien ryhmien välillä käyttäen joko Studentin t-testiä tai Mann-Whitney U -testiä. Riippuvien ryhmien välisiä vertailuja varten analyyseissä käytettiin joko Paired t-testiä tai Wilcoxonin testiä.

Jatkuvien muuttujien välistä korrelaatiota tutkittiin Spearman-korrelaatioanalyysillä. Jatkuvat muuttujat kuvattiin keskiarvona ± keskihajonta (SD), mediaani (neljännesten välinen alue (IQR)) ja vaihteluväli (minimi-maksimi), kun taas kategorialliset muuttujat esitettiin frekvenssin ja prosenttiosuuksien perusteella.