Eficacia de la cirugía con colgajo de acceso sobre perodontopatgógenos subgingivales en personas con periodontitis

Los participantes en el presente estudio fueron personas diagnosticadas con periodontitis en estadio III grado B, según lo determinado por los criterios establecidos en el Taller Mundial para la Clasificación de Enfermedades y Condiciones Periodontales de 2017.

Se administró tratamiento periodontal no quirúrgico a todos los cuadrantes en pacientes programados para participar en el estudio, utilizando instrumentos manuales periodontales (curetas Gracey, Hu-Friedy®; Chicago, IL) junto con un dispositivo ultrasónico (Cavitron Plus, Dentsply®, Duisburg). , Alemania). Cada paciente se sometió al primer paso del tratamiento periodontal no quirúrgico, que implicó la eliminación mecánica de los depósitos supragingivales, motivación e instrucciones personalizadas de higiene bucal, incluido el control de la placa interdental y el cepillado de dientes mediante la técnica de Bass modificada. En la primera semana después de la sesión inicial, el segundo paso del tratamiento periodontal no quirúrgico, que incluía instrumentación subgingival (SI), se realizó en los cuatro cuadrantes en una sola cita administrada por el mismo operador ciego. Los pacientes no recibieron ningún medicamento recetado ni enjuague bucal. En la visita de seguimiento al mes después de la IS (14 días antes de la cirugía), los pacientes fueron reexaminados clínicamente y se reevaluó su cumplimiento de los criterios de inclusión/exclusión. Los pacientes que requirieron cirugía de colgajo de acceso, indicado por la presencia de bolsas residuales profundas (PD ≥ 6 mm), fueron identificados y sometidos al procedimiento de aleatorización. Se asignaron diferentes sitios de pacientes participantes programados para cirugía periodontal como sitios de cirugía de colgajo de acceso (grupo de prueba) o sitios no tratados (grupo de control) mediante un procedimiento de aleatorización. Otros pacientes que se determinó que no necesitaban cirugía de colgajo de acceso no se incluyeron en el estudio y, en cambio, se inscribieron en instrumentación subgingival repetida o en un programa de cuidado periodontal de apoyo.

A los pacientes se les asignaron números ascendentes consecutivos durante la visita de inscripción. Antes del comienzo del estudio, el orden de los cuadrantes de tratamiento fue aleatorizado por un investigador que no estaba directamente involucrado en el examen o el proceso de tratamiento, utilizando secuencias aleatorias generadas por un generador de números aleatorios por computadora. La ocultación de la asignación se logró mediante sobres cerrados opacos, numerados secuencialmente. Con base en este proceso, los dientes del sitio derecho o izquierdo se designaron como grupo de prueba, mientras que los del sitio opuesto se asignaron al grupo de control. La asignación permaneció oculta al examinador durante todo el examen periodontal y los registros, y el operador no abrió el sobre hasta la primera visita de tratamiento.

Cada paciente que cumplió con los criterios del estudio se sometió a una de las siguientes opciones: un lado de la boca fue tratado con AFS, mientras que los cuadrantes contralaterales sirvieron como control. Todas las cirugías de acceso fueron realizadas por el mismo periodoncista ciego. Después de anestesia local, se elevó el colgajo mucoperióstico y se manipuló con instrumentos microquirúrgicos (cuchillas, bisturí, portaagujas, tijeras y pinzas, Carl Martin GmbH, Solingen, Alemania) de acuerdo con el método simplificado. Técnica de colgajo de preservación de papila (SPFF). Se extirpó el tejido de granulación adherido al hueso alveolar para garantizar un acceso completo y una visibilidad óptima de las superficies radiculares. Además, la instrumentación se realizó utilizando una combinación de instrumentos manuales y ultrasónicos, y no se realizó ninguna modificación del hueso alveolar durante el procedimiento del colgajo. Posteriormente, se reposicionó el colgajo mucoperióstico y se cerró principalmente con suturas simples proximales empleando material de sutura monofilamento (5/0 Propilen, Dogsan, Türkiye). Los pacientes recibieron recomendaciones postoperatorias; sin embargo, no se le recetó ningún medicamento.

Las mediciones periodontales, incluida la profundidad de sondaje (PD) (mm), el nivel de inserción clínica (CAL) (mm), el sangrado al sondaje (BOP) (±), el índice gingival (GI) y el índice de placa (PI), se evaluaron en dos momentos distintos. intervalos por un periodoncista calibrado que desconocía los sitios experimentales.20 Estas mediciones se realizaron en seis aspectos diferentes de cada diente (distovestibular/labial, mediovestibular/labial, mesiovestibular/labial, distolingual/palatino, mediolingual/palatino y mesiolingual/palatino) utilizando Se utilizó una sonda periodontal manual (sonda Williams, Hu-Friedy®; Chicago, IL) y se calculó el valor promedio. Para evaluar la curación de los tejidos periodontales, se registraron puntuaciones periodontales detalladas antes y cuatro semanas después de la cirugía del colgajo de acceso.

Entre las puntuaciones periodontales registradas para cada paciente, cuatro dientes (dos para el grupo de tratamiento y dos para el grupo de control) que demostraron las puntuaciones más altas (PD ≥6 mm, CAL ≥5 mm) fueron designados como sitios donantes para el muestreo de placa subgingival. La recolección de muestras fue realizada antes y un mes después de la cirugía por el investigador responsable de realizar las mediciones clínicas. Los sitios de muestreo se aislaron utilizando rollos de algodón estériles, seguido de la eliminación de la placa supragingival de la superficie del diente. Posteriormente, se insertaron delicadamente puntas de papel esterilizadas (Paperpoint #50, EndoPoint®, Paraiba do Sul, RJ, Brasil) en las bolsas periodontales designadas, ejerciendo una suave presión hasta encontrar una leve resistencia. Las puntas de papel se retuvieron dentro de la bolsa periodontal durante 20 segundos antes de transferirlas cuidadosamente a tubos de microcentrífuga estériles, bien tapados para su almacenamiento. Las muestras se almacenaron en un congelador a -80 °C en el Centro de Aplicaciones de Investigación y Desarrollo Tecnológico de la Universidad de Trakya.

La identificación genética molecular y la cuantificación de los periodontopatógenos subgingivales fueron realizadas por un operador que estaba cegado a la distribución del grupo. Se empleó el mini kit PureLink® Genomic DNA (INVITROGEN, Massachusetts, EE. UU.) para el aislamiento del ADN. Las muestras dentro de tubos de centrífuga de 1,5 ml se descongelaron a temperatura ambiente para su disolución después de sacarlas del congelador a -80 °C. El aislamiento del ADN se realizó de acuerdo con las instrucciones del fabricante, involucrando pasos secuenciales de lisis celular, unión del ADN a las membranas filtrantes, lavado y elución. Posteriormente, los tubos que contenían las muestras se sometieron a centrifugación a 21.300 x g durante 1 minuto para obtener ADN genómico puro de los microorganismos. Estas muestras de ADN aisladas se conservaron a -20˚C hasta la etapa de PCR.

Dentro de la metodología de PCR cuantitativa en tiempo real, se utilizaron sondas TaqMan® (Applied Biosystems™, CA, EE. UU.) marcadas con fluorocromos (sustancias fluorescentes) en los extremos 5' y 3'. El kit TaqMan Multiplex Master es una premezcla conveniente de todos los componentes necesarios, además de cebadores y sondas, para realizar qPCR. Contiene ADN polimerasa, dNTP (trifosfato de adenosina, trifosfato de guanosina, trifosfato de timidina, trifosfato de citidina), KCL o MgCL2 y tampón de polimerasa. El objetivo de esta tecnología es detectar secuencias conocidas de ADN genómico, plásmido o complementario (ADNc) tanto cualitativa como cuantitativamente.

Para los análisis de PCR, se colocaron 20 µl de mezcla maestra (Applied Biosystems™, CA, EE. UU.) en microplacas de 96 pocillos. Luego, en algunos de estos pocillos se añadieron 5 μl de la muestra de ADN extraída de cada caso para que sirviera de prueba, mientras que en el resto se añadieron 5 μl de la muestra extraída de 3 pacientes sanos, que no fueron incluidos en el estudio. pozos para que sirvan como control interno. Estas mezclas, cada una con un volumen total de 25 μL, se procesaron en la máquina de PCR (ABI 7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems™, CA, EE. UU.). El protocolo del estudio de qPCR incluyó los siguientes pasos: un paso de activación de la polimerasa ( 1 ciclo a 95 °C durante 3 min), un paso de desnaturalización (40 ciclos a 95 °C durante 15 s) y un paso de recocido/extensión (40 ciclos a 5 °C durante 30 s).

En el contexto del método qPCR, un aumento en el número de ciclos corresponde a un aumento concomitante en la cantidad de ADN detectado por el tinte fluorescente. El valor umbral del ciclo (Ct) se refiere al número de ciclo en el que la radiación fluorescente supera un umbral predeterminado durante la amplificación. En el presente estudio, los valores de Ct obtenidos de los resultados del análisis de muestras de placa subgingival se integraron en la fórmula 2-ΔCt para calcular la diferencia en el cambio que ocurre en las cantidades de microorganismos. La disparidad entre las bacterias objetivo detectadas al inicio y al final El primer mes se calculó utilizando la siguiente fórmula:

ΔCt: [Ct_bacterias objetivo en el primer mes] - [Ct_bacterias objetivo en el inicio] El cambio en las cantidades de bacterias objetivo en el primer mes en comparación con el inicio: 2-Δ∆Ct Todos los análisis se realizaron utilizando el paquete de software SPSS versión 23 (IBM Corp, Armonk, Nueva York). Se definieron dos grupos, prueba y control, con una diferencia sustancial del tamaño del efecto (0,4) en las cantidades microbianas y un nivel de significancia de 0,05. Para evaluar las correlaciones en mediciones repetidas con un coeficiente de correlación de 0,5, se determinó un tamaño de muestra de 40 casos (20 de prueba - 20 de control) utilizando el software G*Power 3.1.9.2. El nivel de significancia se fijó en p < 0,05.

Se evaluó la normalidad de las variables continuas mediante la prueba de Shapiro-Wilk. Posteriormente, basándose en el supuesto de distribución normal, las comparaciones entre grupos independientes se realizaron utilizando la prueba t de Student o la prueba U de Mann-Whitney. Para las comparaciones entre grupos dependientes, los análisis emplearon la prueba t pareada o la prueba de Wilcoxon.

La correlación entre variables continuas se investigó mediante análisis de correlación de Spearman. Las variables continuas se describieron en términos de media ± desviación estándar (DE), mediana (rango intercuartil (RIC)) y rango (mínimo-máximo), mientras que las variables categóricas se representaron mediante frecuencia y porcentaje.