Efficacité de la chirurgie par lambeau d'accès sur les péridontopatgogènes sous-gingivaux chez les personnes atteintes de parodontite

Les participants à la présente étude étaient des personnes diagnostiquées avec une parodontite de stade III de grade B, tel que déterminé par les critères établis lors de l'atelier mondial 2017 pour la classification des maladies et affections parodontales.

Un traitement parodontal non chirurgical a été administré à tous les quadrants des patients devant participer à l'étude, à l'aide d'instruments parodontaux manuels (curettes Gracey, Hu-Friedy® ; Chicago, IL) en conjonction avec un appareil à ultrasons (Cavitron Plus, Dentsply®, Duisburg , Allemagne). Chaque patient a subi la première étape d'un traitement parodontal non chirurgical, qui impliquait l'élimination mécanique des dépôts supragingivaux, la motivation et des instructions d'hygiène bucco-dentaire personnalisées, y compris le contrôle de la plaque interdentaire et le brossage des dents selon la technique de Bass modifiée. Au cours de la première semaine suivant la séance initiale, la deuxième étape du traitement parodontal non chirurgical, qui comprenait une instrumentation sous-gingivale (SI), a été réalisée sur les quatre quadrants en un seul rendez-vous administré par le même opérateur aveugle. Les patients n’ont reçu aucun médicament ni bain de bouche prescrit. Lors de la visite de suivi d'un mois après SI (14 jours avant l'intervention chirurgicale), les patients ont été réexaminés cliniquement et leur conformité aux critères d'inclusion/exclusion a été réévaluée. Les patients nécessitant une chirurgie par lambeau d'accès, indiquée par la présence de poches résiduelles profondes (PD ≥ 6 mm), ont été identifiés et ont subi la procédure de randomisation. Différents sites de patients participants devant subir une chirurgie parodontale ont été attribués soit comme sites de chirurgie par lambeau d'accès (groupe test), soit comme sites non traités (groupe témoin) via une procédure de randomisation. Les autres patients déterminés comme n'ayant pas besoin d'une chirurgie par lambeau d'accès n'ont pas été inclus dans l'étude et ont plutôt été inscrits dans une instrumentation sous-gingivale répétée ou dans un programme de soins parodontaux de soutien.

Les patients se sont vu attribuer des numéros croissants consécutifs lors de la visite d'inscription. Avant le début de l'étude, l'ordre des quadrants de traitement a été randomisé par un enquêteur non directement impliqué dans le processus d'examen ou de traitement, à l'aide de séquences aléatoires générées par un générateur informatique de nombres aléatoires. La dissimulation des allocations a été réalisée à l'aide d'enveloppes scellées opaques, numérotées séquentiellement. Sur la base de ce processus, les dents du site droit ou gauche ont été désignées comme groupe test tandis que celles du site opposé ont été affectées au groupe témoin. L'attribution est restée cachée à l'examinateur tout au long de l'examen parodontal et des enregistrements, et l'enveloppe n'a été ouverte par l'opérateur qu'à la première visite de traitement.

Chaque patient répondant aux critères de l'étude a subi l'une des opérations suivantes : un côté de la bouche a été traité avec AFS, tandis que les quadrants controlatéraux ont servi de contrôle. Toutes les interventions chirurgicales d'accès ont été réalisées par le même parodontiste en aveugle. Après une anesthésie locale, le lambeau mucopériosté a été surélevé et manipulé avec des instruments microchirurgicaux (lames, scalpel, porte-aiguille, ciseaux et pince à épiler, Carl Martin GmbH, Solingen, Allemagne) conformément au schéma simplifié. technique du lambeau de préservation de la papille (SPFF). Le tissu de granulation attaché à l'os alvéolaire a été excisé pour assurer un accès complet et une visibilité optimale des surfaces radiculaires. De plus, l'instrumentation a été réalisée à l'aide d'une combinaison d'instruments à ultrasons et manuels, et aucune modification de l'os alvéolaire n'a été entreprise pendant la procédure du lambeau. Par la suite, le lambeau mucopériosté a été repositionné et principalement fermé avec des sutures proximales simples utilisant un matériau de suture monofilament (5/0 Propilen, Dogsan, Türkiye). Les patients ont reçu des recommandations postopératoires ; cependant, aucun médicament n’a été prescrit.

Les mesures parodontales, y compris la profondeur de sondage (PD) (mm), le niveau d'attache clinique (CAL) (mm), le saignement au sondage (BOP) (±), l'indice gingival (GI) et l'indice de plaque (PI) ont été évaluées à deux moments distincts. intervalles par un parodontiste calibré qui ne connaissait pas les sites expérimentaux.20 Ces mesures ont été effectuées sur six aspects différents de chaque dent (disto-buccal/labial, mi-buccal/labial, mésio-buccal/labial, disto-lingual/palatinal, mi-lingual/palatinal et mésio-lingual/palatinal) en utilisant une sonde parodontale manuelle (sonde Williams, Hu-Friedy® ; Chicago, IL), et la valeur moyenne a été calculée. Pour évaluer la cicatrisation des tissus parodontaux, des scores parodontaux détaillés ont été enregistrés avant et quatre semaines après la chirurgie par lambeau d'accès.

Parmi les scores parodontaux enregistrés pour chaque patient, quatre dents (deux pour le groupe de traitement et deux pour le groupe témoin) démontrant les scores les plus élevés (PD ≥6 mm, CAL ≥5 mm) ont été désignées comme sites donneurs pour le prélèvement de plaque sous-gingivale. Le prélèvement d'échantillons a été effectué avant et un mois après la chirurgie par l'investigateur chargé d'effectuer les mesures cliniques. Les sites d'échantillonnage ont été isolés à l'aide de rouleaux de coton stériles, suivis de l'élimination de la plaque supragingivale de la surface de la dent. Par la suite, des pointes de papier stérilisées (Paperpoint #50, EndoPoint®, Paraiba do Sul, RJ, Brésil) ont été délicatement insérées dans les poches parodontales désignées, en exerçant une légère pression jusqu'à rencontrer une légère résistance. Les pointes de papier ont été conservées dans la poche parodontale pendant 20 secondes avant d'être soigneusement transférées dans des tubes de microcentrifugeuse stériles, solidement bouchés pour le stockage. Les échantillons ont été stockés dans un congélateur à -80°C au centre d’applications de recherche et de développement technologique de l’université de Trakya.

L'identification génétique moléculaire et la quantification des parodontopathogènes sous-gingivaux ont été réalisées par un opérateur ignorant la répartition des groupes. Le mini kit PureLink® Genomic DNA (INVITROGEN, Massachusetts, USA) a été utilisé pour l'isolement de l'ADN. Les échantillons contenus dans des tubes à centrifuger de 1,5 ml ont été décongelés à température ambiante pour dissolution après avoir été récupérés du congélateur à -80°C. L'isolement de l'ADN s'est déroulé conformément aux instructions du fabricant, impliquant des étapes séquentielles de lyse cellulaire, de liaison de l'ADN aux membranes filtrantes, de lavage et d'élution. Par la suite, les tubes contenant les échantillons ont été centrifugés à 21 300 x g pendant 1 minute pour obtenir de l’ADN génomique pur de micro-organismes. Ces échantillons d'ADN isolés ont été conservés à -20°C jusqu'à l'étape PCR.

Dans le cadre de la méthodologie de PCR quantitative en temps réel, des sondes TaqMan® (Applied Biosystems™, CA, USA) marquées avec des fluorochromes (substances fluorescentes) aux extrémités 5' et 3' ont été utilisées. Le kit TaqMan Multiplex Master est un pré-mélange pratique de tous les composants nécessaires, à l'exception des amorces et des sondes, pour réaliser la qPCR. Il contient de l'ADN polymérase, des dNTP (adénosine triphosphate, guanosine triphosphate, thymidine triphosphate, cytidine triphosphate), du KCL ou MgCL2 et un tampon polymérase. Le but de cette technologie est de détecter des séquences génomiques, plasmidiques ou complémentaires (ADNc) connues tant qualitativement que quantitativement.

Pour les analyses PCR, 20 µl de master mix (Applied Biosystems ™, CA, USA) ont été placés dans des microplaques à 96 puits. Ensuite, 5 µl de l'échantillon d'ADN prélevé sur chaque cas ont été ajoutés à certains de ces puits pour servir de test, tandis que 5 µl de l'échantillon prélevé sur 3 patients sains, non inclus dans l'étude, ont été ajoutés au reste. puits pour servir de contrôle interne. Ces mélanges, chacun d'un volume total de 25 μL, ont été analysés sur la machine PCR (ABI 7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems™, CA, USA). Le protocole d'étude qPCR comprenait les étapes suivantes : une étape d'activation de la polymérase ( 1 cycle à 95 °C pendant 3 min), une étape de dénaturation (40 cycles à 95 °C pendant 15 s) et une étape de recuit/extension (40 cycles à 5 °C pendant 30 s).

Dans le cadre de la méthode qPCR, une augmentation du nombre de cycles correspond à une augmentation concomitante de la quantité d’ADN détectée par le colorant fluorescent. La valeur de cycle seuil (Ct) fait référence au numéro de cycle auquel le rayonnement de fluorescence dépasse un seuil prédéterminé pendant l'amplification. Dans la présente étude, les valeurs Ct obtenues à partir des résultats d'analyse d'échantillons de plaque sous-gingivale ont été intégrées dans la formule 2-ΔCt pour calculer la différence de changement de pli se produisant dans les quantités de micro-organismes. La disparité entre les bactéries cibles détectées au départ et sur le 1er mois a été calculé selon la formule suivante :

ΔCt : [Ct_bactéries cibles au 1er mois] - [Ct_bactéries cibles dans la ligne de base] Le facteur de variation des quantités de bactéries cibles au 1er mois par rapport à la ligne de base : 2-Δ∆Ct Toutes les analyses ont été effectuées à l'aide du progiciel SPSS version 23 (IBM Corp, Armonk, New York). Deux groupes, test et contrôle, ont été définis avec une différence substantielle de taille d'effet (0,4) dans les quantités microbiennes et un niveau de signification de 0,05. Pour évaluer les corrélations dans des mesures répétées avec un coefficient de corrélation de 0,5, un échantillon de 40 cas (20 tests - 20 contrôles) a été déterminé à l'aide du logiciel G*Power 3.1.9.2. Le niveau de signification a été fixé à p <0,05.

La normalité des variables continues a été évaluée à l'aide du test de Shapiro-Wilk. Par la suite, sur la base de l'hypothèse de distribution normale, des comparaisons entre groupes indépendants ont été effectuées à l'aide du test t de Student ou du test U de Mann-Whitney. Pour les comparaisons entre groupes dépendants, les analyses ont utilisé soit le test t apparié, soit le test de Wilcoxon.

La corrélation entre les variables continues a été étudiée par analyse de corrélation de Spearman. Les variables continues ont été décrites en termes de moyenne ± écart type (ET), de médiane (intervalle interquartile (IQR)) et d'intervalle (minimum-maximum), tandis que les variables catégorielles étaient représentées par fréquence et pourcentage.