Werkzaamheid van toegangsflapchirurgie op subgingivale peridontopatgogenen bij personen met parodontitis

De deelnemers aan het huidige onderzoek waren personen met de diagnose fase III graad B-parodontitis, zoals bepaald door de criteria vastgelegd in de World Workshop for the Classification of Periodontal Diseases and Condities van 2017.

Niet-chirurgische parodontale behandeling werd toegediend aan alle kwadranten van patiënten die deelnamen aan het onderzoek, met behulp van parodontale handinstrumenten (Gracey curettes, Hu-Friedy®; Chicago, IL) in combinatie met een ultrasoon apparaat (Cavitron Plus, Dentsply®, Duisburg , Duitsland). Elke patiënt onderging de eerste stap van een niet-chirurgische parodontale behandeling, die bestond uit het mechanisch verwijderen van supragingivale afzettingen, motivatie en gepersonaliseerde instructies voor mondhygiëne, inclusief controle van interdentale tandplak en tandenpoetsen met behulp van de aangepaste Bass-techniek. In de eerste week na de eerste sessie werd de tweede stap van de niet-chirurgische parodontale behandeling, die subgingivale instrumentatie (SI) omvatte, uitgevoerd op alle vier de kwadranten in één enkele afspraak, toegediend door dezelfde geblindeerde operator. Patiënten kregen geen voorgeschreven medicijnen of mondwater. Tijdens het vervolgbezoek na één maand na SI (14 dagen vóór de operatie) werden de patiënten klinisch opnieuw onderzocht en werd hun naleving van de inclusie-/uitsluitingscriteria opnieuw beoordeeld. Patiënten die een toegangsflapoperatie nodig hadden, aangegeven door de aanwezigheid van diepe restpockets (PD ≥ 6 mm), werden geïdentificeerd en ondergingen de randomisatieprocedure. Verschillende locaties van deelnemende patiënten die voor parodontale chirurgie waren ingepland, werden via een randomisatieprocedure toegewezen als locaties voor toegang tot de flapoperatie (testgroep) of als onbehandelde locaties (controlegroep). Andere patiënten die vastbesloten waren geen toegangsflapoperatie nodig te hebben, werden niet in het onderzoek opgenomen en werden in plaats daarvan opgenomen in herhaalde subgingivale instrumentatie of een ondersteunend parodontaal zorgprogramma.

Patiënten kregen tijdens het inschrijvingsbezoek opeenvolgende oplopende nummers toegewezen. Voorafgaand aan de start van het onderzoek werd de volgorde van de behandelingskwadranten gerandomiseerd door een onderzoeker die niet direct betrokken was bij het onderzoeks- of behandelproces, met behulp van willekeurige reeksen gegenereerd door een computergenerator voor willekeurige getallen. Het verbergen van de toewijzing werd bereikt met behulp van ondoorzichtige, verzegelde enveloppen, opeenvolgend genummerd. Op basis van dit proces werden de tanden aan de rechter- of linkerkant aangewezen als de testgroep, terwijl die aan de andere kant werden toegewezen aan de controlegroep. De toewijzing bleef tijdens het parodontale onderzoek en de opnames voor de onderzoeker verborgen en de envelop werd pas bij het eerste behandelbezoek door de telefoniste geopend.

Elke patiënt die aan de onderzoekscriteria voldeed, onderging een van de volgende handelingen: één kant van de mond werd behandeld met AFS, terwijl de contralaterale kwadranten als controle dienden. Alle toegangsoperaties werden uitgevoerd door dezelfde geblindeerde parodontoloog. Na lokale anesthesie werd de mucoperiosteale flap omhoog gebracht en behandeld met microchirurgische instrumenten (messen, scalpel, naaldhouder, schaar en pincet, Carl Martin GmbH, Solingen, Duitsland) in overeenstemming met de vereenvoudigde procedure. papilla conserveringsflap (SPFF) techniek. Granulatieweefsel dat aan het alveolaire bot was gehecht, werd weggesneden om volledige toegang en optimale zichtbaarheid van de worteloppervlakken te garanderen. Bovendien werd de instrumentatie uitgevoerd met behulp van een combinatie van ultrasone en handinstrumenten, en werd er tijdens de flapprocedure geen alveolaire botmodificatie uitgevoerd. Vervolgens werd de mucoperiostale flap opnieuw gepositioneerd en primair gesloten met proximale eenvoudige hechtingen waarbij gebruik werd gemaakt van monofilament hechtmateriaal (5/0 Propilen, Dogsan, Türkiye). Patiënten kregen postoperatieve aanbevelingen; er werd echter geen medicatie voorgeschreven.

Parodontale metingen, waaronder sondeerdiepte (PD) (mm), klinisch hechtingsniveau (CAL) (mm), bloeding bij sondeer (BOP) (±), gingivale index (GI) en plaque-index (PI) werden op twee verschillende tijdstippen beoordeeld. intervallen door een gekalibreerde parodontoloog die blind was voor de experimentele locaties.20 Deze metingen werden uitgevoerd op zes verschillende aspecten van elke tand (disto-buccaal/labiaal, mid-buccaal/labiaal, mesio-buccaal/labiaal, disto-linguaal/palatinaal, midden-linguaal/palatinaal en mesio-linguaal/palatinaal) met behulp van een handmatige parodontale sonde (Williams-sonde, Hu-Friedy®; Chicago, IL), en de gemiddelde waarde werd berekend. Om de genezing van parodontale weefsels te evalueren, werden gedetailleerde parodontale scores geregistreerd vóór en vier weken na een toegangsflapoperatie.

Van de parodontale scores die voor elke patiënt werden geregistreerd, werden vier tanden (twee voor de behandelingsgroep en twee voor de controlegroep) die de hoogste scores vertoonden (PD ≥6 mm, CAL ≥5 mm) aangewezen als donorplaatsen voor subgingivale plaquemonstering. De monstername werd vóór en één maand na de operatie uitgevoerd door de onderzoeker die verantwoordelijk was voor het uitvoeren van klinische metingen. De monsterplaatsen werden geïsoleerd met behulp van steriele wattenrollen, gevolgd door verwijdering van supragingivale plaque van het tandoppervlak. Vervolgens werden gesteriliseerde papieren punten (Paperpoint #50, EndoPoint®, Paraiba do Sul, RJ, Brazilië) voorzichtig in de daarvoor bestemde parodontale zakken ingebracht, waarbij lichte druk werd uitgeoefend totdat er lichte weerstand werd ondervonden. De papierpunten werden gedurende 20 seconden in de parodontale pocket vastgehouden voordat ze zorgvuldig werden overgebracht naar steriele microcentrifugebuisjes, veilig afgesloten voor opslag. De monsters werden opgeslagen in een vriezer van -80°C in het Trakya University Technology Research and Development Application Center.

De moleculair genetische identificatie en kwantificering van subgingivale parodontopathogenen werden uitgevoerd door een operator die blind was voor de groepsdistributie. De PureLink® Genomic DNA Mini Kit (INVITROGEN, Massachusetts, VS) werd gebruikt voor DNA-isolatie. Monsters in centrifugebuizen van 1,5 ml werden bij kamertemperatuur ontdooid om op te lossen nadat ze uit de vriezer bij -80°C waren gehaald. DNA-isolatie verliep volgens de instructies van de fabrikant, waarbij opeenvolgende stappen van cellyse, DNA-binding aan filtermembranen, wassen en elutie betrokken waren. Vervolgens werden de buizen met de monsters gedurende 1 minuut bij 21.300 x g gecentrifugeerd om zuiver genomisch DNA van micro-organismen te verkrijgen. Deze geïsoleerde DNA-monsters werden tot het PCR-stadium bij -20°C bewaard.

Binnen de Real-time kwantitatieve PCR-methodologie werden TaqMan® Probes (Applied Biosystems™, CA, VS) gelabeld met fluorochromen (fluorescerende stoffen) aan de 5'- en 3'-uiteinden gebruikt. De TaqMan Multiplex Master-kit is een handig voormengsel van alle componenten die nodig zijn, afgezien van primers en probes, om qPCR uit te voeren. Het bevat DNA-polymerase, dNTP's (adenosinetrifosfaat, guanosinetrifosfaat, thymidinetrifosfaat, cytidinetrifosfaat), KCL of MgCL2 en polymerasebuffer. Het doel van deze technologie is om bekende genomische, plasmide- of complementaire DNA (cDNA)-sequenties zowel kwalitatief als kwantitatief te detecteren.

Voor PCR-analyses werd 20 μl mastermix (Applied Biosystems ™, CA, VS) in microplaten met 96 putjes geplaatst. Vervolgens werd 5 μl van het uit elk geval genomen DNA-monster aan sommige van deze putjes toegevoegd om als test te dienen, terwijl 5 μl van het monster van 3 gezonde patiënten, die niet in het onderzoek waren opgenomen, werd toegevoegd aan de resterende putten om als interne controle te dienen. Deze mengsels, elk met een totaal volume van 25 μl, werden op de PCR-machine gedraaid (ABI 7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems™, CA, VS). Het qPCR-studieprotocol omvatte de volgende stappen: een polymerase-activeringsstap ( 1 cyclus bij 95 °C gedurende 3 minuten), een denaturatiestap (40 cycli bij 95 °C gedurende 15 seconden) en een uitgloei-/verlengingsstap (40 cycli bij 5 °C gedurende 30 seconden).

In de context van de qPCR-methode komt een toename van het aantal cycli overeen met een gelijktijdige toename van de hoeveelheid DNA die door de fluorescerende kleurstof wordt gedetecteerd. De drempelcycluswaarde (Ct) verwijst naar het cyclusnummer waarbij de fluorescentiestraling tijdens versterking een vooraf bepaalde drempel overschrijdt. In de huidige studie werden de Ct-waarden verkregen uit de analyseresultaten van subgingivale plaquemonsters geïntegreerd in de 2-ΔCt-formule om het verschil te berekenen in de vouwverandering die optreedt in de hoeveelheden micro-organismen. De ongelijkheid tussen de doelbacteriën die werden gedetecteerd bij aanvang en op de eerste maand werd berekend met behulp van de volgende formule:

ΔCt: [Ct_doelbacteriën in 1e maand] - [Ct_doelbacteriën in baseline] De maalverandering in hoeveelheden van de doelbacteriën in de 1e maand vergeleken met baseline: 2-Δ∆Ct Alle analyses zijn uitgevoerd met behulp van het softwarepakket SPSS versie 23 (IBM Corp., Armonk, NY). Er werden twee groepen, test en controle, gedefinieerd met een substantieel effectgrootteverschil (0,4) in microbiële hoeveelheden en een significantieniveau van 0,05. Om correlaties bij herhaalde metingen met een correlatiecoëfficiënt van 0,5 te beoordelen, werd een steekproefomvang van 40 gevallen (20 test - 20 controle) bepaald met behulp van G*Power 3.1.9.2-software. Het significantieniveau werd vastgesteld op p < 0,05.

Continue variabelen werden beoordeeld op normaliteit met behulp van de Shapiro-Wilk-test. Vervolgens werden, op basis van de aanname van de normale verdeling, vergelijkingen tussen onafhankelijke groepen uitgevoerd met behulp van de Student's t-test of de Mann-Whitney U-test. Voor vergelijkingen tussen afhankelijke groepen werd bij de analyses gebruik gemaakt van de Paired t-test of de Wilcoxon-test.

De correlatie tussen continue variabelen werd onderzocht door middel van Spearman-correlatieanalyse. Continue variabelen werden beschreven in termen van gemiddelde ± standaardafwijking (SD), mediaan (interkwartielbereik (IQR)) en bereik (minimaal-maximum), terwijl categorische variabelen werden weergegeven door frequentie en percentage.