Эффективность лоскутной хирургии доступа на поддесневых перидонтопатгогенах у лиц с пародонтитом

Участниками настоящего исследования были люди с диагнозом пародонтит III стадии B, как это определено критериями, установленными на Всемирном семинаре по классификации заболеваний и состояний пародонта 2017 года.

Нехирургическое пародонтологическое лечение проводилось во всех квадрантах пациентов, включенных в исследование, с использованием ручных пародонтальных инструментов (кюретки Грейси, Hu-Friedy®; Чикаго, Иллинойс) в сочетании с ультразвуковым устройством (Cavitron Plus, Dentsply®, Дуйсбург). , Германия). Каждому пациенту был проведен первый этап безоперационного пародонтологического лечения, который включал механическое удаление наддесневых отложений, мотивацию и персонализированные инструкции по гигиене полости рта, включая контроль межзубных отложений и чистку зубов по модифицированной методике Басса. В первую неделю после первого сеанса второй этап нехирургического пародонтального лечения, который включал использование поддесневых инструментов (СИ), был выполнен во всех четырех квадрантах за один прием, проводимый одним и тем же слепым оператором. Пациенты не получали никаких назначенных лекарств и средств для полоскания рта. При контрольном визите через один месяц после SI (14 дней до операции) пациенты были клинически повторно обследованы и повторно оценено их соответствие критериям включения/исключения. Были выявлены и подвергнуты процедуре рандомизации пациенты, нуждающиеся в хирургическом лоскутном доступе, о чем свидетельствует наличие глубоких остаточных карманов (PD ≥ 6 мм). Различные места участия пациентов, которым было запланировано хирургическое вмешательство на пародонте, были распределены либо в качестве мест хирургического лоскута доступа (испытуемая группа), либо в качестве необработанных мест (контрольная группа) посредством процедуры рандомизации. Другие пациенты, у которых не было необходимости в лоскутной операции, не были включены в исследование и вместо этого были включены в программу повторного поддесневого инструментария или поддерживающую программу ухода за пародонтом.

Во время регистрационного визита пациентам присваивались последовательные возрастающие номера. До начала исследования порядок квадрантов лечения был рандомизирован исследователем, не участвующим непосредственно в процессе обследования или лечения, с использованием случайных последовательностей, генерируемых компьютерным генератором случайных чисел. Скрытие распределения достигалось с помощью непрозрачных запечатанных конвертов, пронумерованных последовательно. На основании этого процесса зубы на правом или левом участке были обозначены как тестовая группа, а зубы на противоположном участке были отнесены к контрольной группе. Распределение оставалось скрытым от эксперта на протяжении всего периодонтального обследования и записей, а конверт не открывался оператором до первого лечебного визита.

Каждому пациенту, отвечавшему критериям исследования, проводилось одно из следующих исследований: одну сторону рта обрабатывали AFS, а контралатеральные квадранты служили контролем. Все операции доступа проводились одним и тем же слепым пародонтологом. Под местной анестезией слизисто-надкостничный лоскут поднимали и обрабатывали микрохирургическими инструментами (лезвия, скальпель, иглодержатель, ножницы и пинцет, Carl Martin GmbH, Золинген, Германия) в соответствии с упрощенной процедурой. Техника сохранения лоскута сосочка (SPFF). Грануляционную ткань, прикрепленную к альвеолярной кости, иссекали, чтобы обеспечить полный доступ и оптимальную видимость поверхностей корня. Кроме того, обработка выполнялась с использованием комбинации ультразвуковых и ручных инструментов, и во время процедуры лоскута не проводилось никаких модификаций альвеолярной кости. Впоследствии слизисто-надкостничный лоскут был репозиционирован и в первую очередь закрыт проксимальными простыми швами монофиламентным шовным материалом (5/0 Propilen, Dogsan, Türkiye). Пациентам были даны послеоперационные рекомендации; однако никаких лекарств не было назначено.

Измерения пародонта, включая глубину зондирования (PD) (мм), уровень клинического прикрепления (CAL) (мм), кровотечение при зондировании (BOP) (±), десневой индекс (GI) и индекс зубного налета (PI), оценивались в два разных периода времени. интервалы калиброванному пародонтологу, который не знал об экспериментальных участках.20 Эти измерения проводились на шести различных сторонах каждого зуба (дистально-щечная/губная, средне-щечная/губная, мезо-щечная/губная, дисто-лингвальная/небная, средне-лингвальная/небная и медиально-лингвальная/небная) с использованием ручной пародонтальный зонд (зонд Уильямса, Hu-Friedy®; Чикаго, Иллинойс) и вычисляли среднее значение. Чтобы оценить заживление тканей пародонта, подробные показатели пародонта записывались до и через четыре недели после лоскутной операции.

Среди показателей пародонта, зафиксированных у каждого пациента, четыре зуба (два в группе лечения и два в контрольной группе) с наивысшими показателями (PD ≥6 мм, CAL ≥5 мм) были назначены донорскими участками для отбора проб поддесневого налета. Сбор образцов проводился до и через месяц после операции исследователем, ответственным за проведение клинических измерений. Места отбора проб изолировали с помощью стерильных ватных валиков с последующим удалением наддесневого налета с поверхности зубов. Впоследствии стерилизованные бумажные штифты (Paperpoint #50, EndoPoint®, Paraiba do Sul, RJ, Бразилия) были аккуратно вставлены в соответствующие пародонтальные карманы, оказывая легкое давление до тех пор, пока не возникнет легкое сопротивление. Бумажные штифты удерживали в пародонтальном кармане в течение 20 секунд, а затем осторожно переносили в стерильные микроцентрифужные пробирки, надежно закрывая крышками для хранения. Образцы хранились в морозильной камере при температуре -80°C в Центре технологических исследований и разработок Университета Тракии.

Молекулярно-генетическая идентификация и количественная оценка поддесневых пародонтопатогенов выполнялись оператором, который не имел представления о групповом распределении. Для выделения ДНК использовали мини-набор PureLink® Genomic DNA Mini Kit (INVITROGEN, Массачусетс, США). Образцы в центрифужных пробирках емкостью 1,5 мл оттаивали при комнатной температуре для растворения после извлечения из морозильной камеры при -80°C. Выделение ДНК проводили в соответствии с инструкциями производителя и включали последовательные этапы лизиса клеток, связывания ДНК с мембранами фильтра, промывания и элюирования. Впоследствии пробирки, содержащие образцы, подвергались центрифугированию при 21300 g в течение 1 минуты для получения чистой геномной ДНК микроорганизмов. Эти изолированные образцы ДНК хранили при -20°С до стадии ПЦР.

В рамках методологии количественной ПЦР в реальном времени использовали зонды TaqMan® (Applied Biosystems™, Калифорния, США), меченные флуорохромами (флуоресцентными веществами) на 5'- и 3'-концах. Набор TaqMan Multiplex Master представляет собой удобную предварительную смесь всех компонентов, необходимых, кроме праймеров и зондов, для выполнения количественной ПЦР. Он содержит ДНК-полимеразу, dNTP (аденозинтрифосфат, гуанозинтрифосфат, тимидинтрифосфат, цитидинтрифосфат), KCL или MgCL2 и полимеразный буфер. Целью этой технологии является обнаружение известных последовательностей геномной, плазмидной или комплементарной ДНК (кДНК) как качественно, так и количественно.

Для анализа ПЦР 20 мкл мастер-микса (Applied Biosystems™, Калифорния, США) помещали в 96-луночные микропланшеты. Затем в некоторые из этих лунок добавляли по 5 мкл образца ДНК, взятого от каждого случая, в качестве теста, а в оставшиеся - по 5 мкл образца, взятого от 3 здоровых пациентов, не включенных в исследование. скважины в качестве внутреннего контроля. Эти смеси, общим объемом 25 мкл каждая, были проанализированы на ПЦР-аппарате (ABI 7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems™, Калифорния, США). Протокол исследования qPCR включал следующие этапы: этап активации полимеразы ( 1 цикл при 95 °С в течение 3 мин), этап денатурации (40 циклов при 95 °С в течение 15 с) и этап отжига/удлинения (40 циклов при 95 °С в течение 15 с). циклы при 5 °C в течение 30 с).

В контексте метода кПЦР увеличение количества циклов соответствует сопутствующему увеличению количества ДНК, обнаруживаемой флуоресцентным красителем. Пороговое значение цикла (Ct) относится к номеру цикла, при котором флуоресцентное излучение превышает заданный порог во время амплификации. В настоящем исследовании значения Ct, полученные по результатам анализа образцов поддесневого налета, были интегрированы в формулу 2-ΔCt для расчета разницы в кратности изменения количества микроорганизмов. Несоответствие между целевыми бактериями, обнаруженными на исходном уровне и на исходном уровне. Первый месяц рассчитывался по следующей формуле:

ΔCt: [Ct_мишеневые бактерии в 1-м месяце] - [Ct_мишеневые бактерии в исходном состоянии] Кратное изменение количества целевых бактерий в 1-й месяц по сравнению с исходным уровнем: 2-ΔΔCt Все анализы проводились с использованием программного пакета SPSS версии 23 (IBM) Corp, Армонк, Нью-Йорк). Две группы, испытуемая и контрольная, были определены со значительной разницей в размере эффекта (0,4) в количестве микроорганизмов и уровнем значимости 0,05. Для оценки корреляций при повторных измерениях с коэффициентом корреляции 0,5 с помощью программного обеспечения G*Power 3.1.9.2 определяли объем выборки в 40 случаев (20 тестовых - 20 контрольных). Уровень значимости был установлен на уровне p <0,05.

Непрерывные переменные оценивали на нормальность с помощью теста Шапиро-Уилка. Впоследствии, основываясь на предположении о нормальном распределении, сравнения между независимыми группами проводились с использованием либо t-критерия Стьюдента, либо U-критерия Манна-Уитни. Для сравнения зависимых групп в анализе использовался либо парный t-критерий, либо критерий Уилкоксона.

Корреляция между непрерывными переменными исследовалась с помощью корреляционного анализа Спирмена. Непрерывные переменные описывались с точки зрения среднего значения ± стандартное отклонение (SD), медианы (интерквартильный размах (IQR)) и диапазона (минимум-максимум), тогда как категориальные переменные были представлены частотой и процентом.