Wirksamkeit der Zugangslappenchirurgie bei subgingivalen Peridontopatgogenen bei Personen mit Parodontitis

Bei den Teilnehmern der vorliegenden Studie handelte es sich um Personen, bei denen eine Parodontitis im Stadium III Grad B diagnostiziert wurde, wie anhand der Kriterien des World Workshop for the Classification of Parodontal Diseases and Conditions 2017 ermittelt wurde.

Bei Patienten, die an der Studie teilnehmen sollten, wurde in allen Quadranten eine nicht-chirurgische parodontale Behandlung durchgeführt, wobei parodontale Handinstrumente (Gracey-Küretten, Hu-Friedy®; Chicago, IL) in Verbindung mit einem Ultraschallgerät (Cavitron Plus, Dentsply®, Duisburg) zum Einsatz kamen , Deuschland). Jeder Patient durchlief den ersten Schritt einer nicht-chirurgischen parodontalen Behandlung, die die mechanische Entfernung supragingivaler Ablagerungen, Motivation und individuelle Anweisungen zur Mundhygiene, einschließlich interdentaler Plaquekontrolle und Zähneputzen mit der modifizierten Bass-Technik, umfasste. In der ersten Woche nach der ersten Sitzung wurde der zweite Schritt der nicht-chirurgischen parodontalen Behandlung, der eine subgingivale Instrumentierung (SI) umfasste, an allen vier Quadranten in einem einzigen Termin durchgeführt, der von demselben verblindeten Bediener durchgeführt wurde. Die Patienten erhielten keine verschriebenen Medikamente oder Mundwasser. Bei der einmonatigen Nachuntersuchung nach SI (14 Tage vor der Operation) wurden die Patienten erneut klinisch untersucht und ihre Einhaltung der Einschluss-/Ausschlusskriterien wurde erneut beurteilt. Patienten, die eine Zugangsklappenoperation benötigten, was durch das Vorhandensein tiefer Resttaschen (PD ≥ 6 mm) angezeigt wurde, wurden identifiziert und dem Randomisierungsverfahren unterzogen. Verschiedene Stellen der teilnehmenden Patienten, bei denen eine parodontale Operation geplant war, wurden durch ein Randomisierungsverfahren entweder als Zugangsstellen für Lappenoperationen (Testgruppe) oder als unbehandelte Stellen (Kontrollgruppe) zugewiesen. Andere Patienten, bei denen festgestellt wurde, dass sie keine Zugangslappenoperation benötigen, wurden nicht in die Studie einbezogen und stattdessen in eine wiederholte subgingivale Instrumentierung oder ein unterstützendes Parodontalpflegeprogramm aufgenommen.

Den Patienten wurden beim Aufnahmebesuch fortlaufend aufsteigende Nummern zugewiesen. Vor Beginn der Studie wurde die Reihenfolge der Behandlungsquadranten von einem Prüfer, der nicht direkt am Untersuchungs- oder Behandlungsprozess beteiligt war, anhand von Zufallssequenzen, die von einem Computer-Zufallszahlengenerator generiert wurden, randomisiert. Die Verschleierung der Zuordnung wurde durch undurchsichtige, versiegelte Umschläge mit fortlaufender Nummerierung erreicht. Basierend auf diesem Verfahren wurden die Zähne auf der rechten oder linken Seite als Testgruppe bestimmt, während die Zähne auf der gegenüberliegenden Seite der Kontrollgruppe zugeordnet wurden. Die Zuordnung blieb dem Untersucher während der gesamten parodontalen Untersuchung und Aufzeichnung verborgen, und der Umschlag wurde vom Untersucher erst beim ersten Behandlungsbesuch geöffnet.

Jeder Patient, der die Studienkriterien erfüllte, unterzog sich einer der folgenden Maßnahmen: Eine Seite des Mundes wurde mit AFS behandelt, während die kontralateralen Quadranten als Kontrolle dienten. Alle Zugangsoperationen wurden von demselben verblindeten Parodontologen durchgeführt. Nach örtlicher Betäubung wurde der Mukoperiostlappen angehoben und mit mikrochirurgischen Instrumenten (Klingen, Skalpell, Nadelhalter, Schere und Pinzette, Carl Martin GmbH, Solingen, Deutschland) gemäß der vereinfachten Methode behandelt Technik des Papillenerhaltungslappens (SPFF). Am Alveolarknochen anhaftendes Granulationsgewebe wurde herausgeschnitten, um einen vollständigen Zugang und eine optimale Sicht auf die Wurzeloberflächen zu gewährleisten. Darüber hinaus wurde die Instrumentierung mit einer Kombination aus Ultraschall- und Handinstrumenten durchgeführt und während des Lappeneingriffs wurde keine Alveolarknochenmodifikation vorgenommen. Anschließend wurde der Mukoperiostlappen neu positioniert und primär mit proximalen einfachen Nähten unter Verwendung von monofilem Nahtmaterial (5/0 Propilen, Dogsan, Türkiye) verschlossen. Den Patienten wurden postoperative Empfehlungen gegeben; Es wurden jedoch keine Medikamente verschrieben.

Parodontale Messungen, einschließlich Sondierungstiefe (PD) (mm), klinisches Attachmentniveau (CAL) (mm), Blutung beim Sondieren (BOP) (±), Gingivaindex (GI) und Plaqueindex (PI), wurden zu zwei verschiedenen Zeitpunkten bewertet Intervallen durch einen kalibrierten Parodontologen, der für die Versuchsorte blind war.20 Diese Messungen wurden an sechs verschiedenen Aspekten jedes Zahns (disto-bukkal/labial, mittelbukkal/labial, mesio-bukkal/labial, distolingual/palatinal, mittellingual/palatinal und mesiolingual/palatinal) durchgeführt eine manuelle parodontale Sonde (Williams-Sonde, Hu-Friedy®; Chicago, IL) und der Durchschnittswert wurde berechnet. Um die Heilung des parodontalen Gewebes zu bewerten, wurden detaillierte parodontale Scores vor und vier Wochen nach der Zugangslappenoperation aufgezeichnet.

Unter den für jeden Patienten aufgezeichneten parodontalen Werten wurden vier Zähne (zwei für die Behandlungsgruppe und zwei für die Kontrollgruppe), die die höchsten Werte aufwiesen (PD ≥6 mm, CAL ≥5 mm), als Entnahmestellen für die subgingivale Plaque-Probenahme bestimmt. Die Probenentnahme erfolgte vor und einen Monat nach der Operation durch den für die Durchführung der klinischen Messungen verantwortlichen Prüfer. Die Probenahmestellen wurden mit sterilen Watterollen isoliert und anschließend supragingivaler Plaque von der Zahnoberfläche entfernt. Anschließend wurden sterilisierte Papierspitzen (Paperpoint Nr. 50, EndoPoint®, Paraiba do Sul, RJ, Brasilien) vorsichtig in die vorgesehenen parodontalen Taschen eingeführt und dabei sanften Druck ausgeübt, bis sie auf leichten Widerstand stießen. Die Papierspitzen wurden 20 Sekunden lang in der Parodontaltasche gehalten, bevor sie vorsichtig in sterile Mikrozentrifugenröhrchen überführt und zur Aufbewahrung sicher verschlossen wurden. Die Proben wurden in einem Gefrierschrank bei -80 °C im Technologieforschungs- und Entwicklungsanwendungszentrum der Universität Trakya gelagert.

Die molekulargenetische Identifizierung und Quantifizierung subgingivaler Parodontopathogene wurde von einem Bediener durchgeführt, der keine Kenntnis von der Gruppenverteilung hatte. Zur DNA-Isolierung wurde das PureLink® Genomic DNA Mini Kit (INVITROGEN, Massachusetts, USA) verwendet. Proben in 1,5-ml-Zentrifugenröhrchen wurden zur Auflösung bei Raumtemperatur aufgetaut, nachdem sie aus dem -80 °C-Gefrierschrank entnommen worden waren. Die DNA-Isolierung erfolgte gemäß den Anweisungen des Herstellers und umfasste aufeinanderfolgende Schritte der Zelllyse, der DNA-Bindung an Filtermembranen, des Waschens und der Elution. Anschließend wurden die Röhrchen mit den Proben eine Minute lang bei 21.300 x g zentrifugiert, um reine genomische DNA von Mikroorganismen zu erhalten. Diese isolierten DNA-Proben wurden bis zur PCR-Stufe bei -20 °C aufbewahrt.

Im Rahmen der quantitativen Echtzeit-PCR-Methode wurden TaqMan®-Sonden (Applied Biosystems™, CA, USA) verwendet, die am 5'- und 3'-Terminus mit Fluorochromen (fluoreszierenden Substanzen) markiert waren. Das TaqMan Multiplex Master-Kit ist eine praktische Vormischung aller für die Durchführung von qPCR erforderlichen Komponenten außer Primern und Sonden. Es enthält DNA-Polymerase, dNTPs (Adenosintriphosphat, Guanosintriphosphat, Thymidintriphosphat, Cytidintriphosphat), KCL oder MgCL2 und Polymerasepuffer. Der Zweck dieser Technologie besteht darin, bekannte Genom-, Plasmid- oder komplementäre DNA-Sequenzen (cDNA) sowohl qualitativ als auch quantitativ nachzuweisen.

Für PCR-Analysen wurden 20 μl Mastermix (Applied Biosystems™, CA, USA) in 96-Well-Mikrotiterplatten gegeben. Dann wurden 5 μl der von jedem Fall entnommenen DNA-Probe zu einigen dieser Vertiefungen hinzugefügt, um als Test zu dienen, während 5 μl der Probe von drei gesunden Patienten, die nicht in die Studie einbezogen wurden, zu den übrigen hinzugefügt wurden Brunnen, die als interne Kontrolle dienen. Diese Mischungen mit jeweils einem Gesamtvolumen von 25 μl wurden auf dem PCR-Gerät (ABI 7500 Fast Real-Time PCR System, Applied Biosystems™, CA, USA) laufen gelassen. Das qPCR-Studienprotokoll umfasste die folgenden Schritte: einen Polymerase-Aktivierungsschritt ( 1 Zyklus bei 95 °C für 3 Minuten), einen Denaturierungsschritt (40 Zyklen bei 95 °C für 15 Sekunden) und einen Annealing-/Verlängerungsschritt (40 Zyklen). bei 5 °C für 30 s).

Im Rahmen der qPCR-Methode entspricht eine Erhöhung der Zyklenzahl einer gleichzeitigen Erhöhung der durch den Fluoreszenzfarbstoff nachgewiesenen DNA-Menge. Der Schwellenzykluswert (Ct) bezieht sich auf die Zykluszahl, bei der die Fluoreszenzstrahlung während der Verstärkung einen vorgegebenen Schwellenwert überschreitet. In der vorliegenden Studie wurden die aus den Analyseergebnissen von subgingivalen Plaqueproben erhaltenen Ct-Werte in die 2-ΔCt-Formel integriert, um den Unterschied in der fachen Veränderung zu berechnen, der bei den Mengen an Mikroorganismen auftritt. Die Ungleichheit zwischen den zu Studienbeginn und später nachgewiesenen Zielbakterien Der 1. Monat wurde nach folgender Formel berechnet:

ΔCt: [Ct_Zielbakterien im 1. Monat] – [Ct_Zielbakterien im Ausgangswert] Die fache Änderung der Mengen der Zielbakterien im 1. Monat im Vergleich zum Ausgangswert: 2-Δ∆Ct Alle Analysen wurden mit dem Softwarepaket SPSS Version 23 (IBM) durchgeführt Corp, Armonk, NY). Zwei Gruppen, Test- und Kontrollgruppe, wurden mit einem erheblichen Effektgrößenunterschied (0,4) in den mikrobiellen Mengen und einem Signifikanzniveau von 0,05 definiert. Um Korrelationen in wiederholten Messungen mit einem Korrelationskoeffizienten von 0,5 zu bewerten, wurde eine Stichprobengröße von 40 Fällen (20 Tests – 20 Kontrollen) mit der Software G*Power 3.1.9.2 ermittelt. Das Signifikanzniveau wurde auf p < 0,05 festgelegt.

Kontinuierliche Variablen wurden mithilfe des Shapiro-Wilk-Tests auf Normalität überprüft. Anschließend wurden auf der Grundlage der Normalverteilungsannahme Vergleiche zwischen unabhängigen Gruppen durchgeführt, wobei entweder der Student-t-Test oder der Mann-Whitney-U-Test verwendet wurden. Für Vergleiche zwischen abhängigen Gruppen verwendeten die Analysen entweder den Paired-t-Test oder den Wilcoxon-Test.

Die Korrelation zwischen kontinuierlichen Variablen wurde durch Spearman-Korrelationsanalyse untersucht. Kontinuierliche Variablen wurden als Mittelwert ± Standardabweichung (SD), Median (Interquartilbereich (IQR)) und Bereich (Minimum-Maximum) beschrieben, während kategoriale Variablen durch Häufigkeit und Prozentsatz dargestellt wurden.