Ruokavaliostrategiat fibromyalgian hoidossa ylipainoisten ja lihavien potilaiden keskuudessa (FIBRODIET)

Fibromyalgia (FM) on heterogeeninen ja haitallinen oireyhtymä, jolle on tyypillistä monialoinen kipu, unihäiriöt, kognitiivinen dysfunktio ("fibro-sumu") ja väsymys. FM:n esiintyvyys aikuisväestössä on noin 1–5 %, ja naisten ja miesten suhde on maailmanlaajuisesti noin 3:1.

Sairauden etiopatogeneesi on edelleen epäselvä; kuitenkin kasvava näyttö viittaa siihen, että FM on keskushermoston häiriö, joka aiheuttaa kipua muuttuneen ei-kivuliaiden tai lievästi kivuliaiden ärsykkeiden käsittelyn kautta. FM:n kipu luokitellaan nokiplastiseksi, mikä määritellään "kivuksi, joka johtuu muuttuneesta nokiseptiosta ilman selvää todistetta todellisesta tai uhkaavasta kudosvaurioista, joka aktivoisi perifeerisiä nokiseptoreita." Viime aikoina on ehdotettu teoreettista FM:n patogeneesimallia, joka perustuu laajaan kirjallisuuteen, joka viittaa gamma-aminovoihapon (GABA) – keskushermoston tärkeimmän inhibitiivisen välittäjäaineen – rooliin kroonisten kiputilojen, kuten FM:n, patofysiologiassa. Erityisesti ehdotettu malli olettaa, että vähentynyt GABAerginen hermovälitys talamokortikaalisella tasolla – mahdollisesti liittyen neuroendokriseen epätasapainoon, joka johtaa neurosteroidien muuttuneeseen aktiivisuuteen GABA-A-reseptoreiden tai NMDA-reseptoreiden positiivisella allosteerisella modulaatiolla – voi osaltaan vaikuttaa fibromyalgian kivun kehittymiseen. Tämä hypoteesi vaatii vahvistusta prekliinisten ja interventiotutkimusten kautta.

FM:ää hoidetaan tyypillisesti monimuotoisella lähestymistavalla, joka sisältää sekä ei-farmakologisia että farmakologisia strategioita. Yleisimmät ei-farmakologiset interventiot sisältävät fysioterapiaa, rentoutustekniikoita, psykoterapiaa, akupunktiota ja ravitsemusterapiaa.

Ruokavalio on itse asiassa ensisijainen tekijä, joka pystyy vaikuttamaan mikrobioma-suoli-aivo-akseliin, ja dysbioosi on yhdistetty useisiin keskushermoston välittämiin häiriöihin, mukaan lukien muuttuneeseen nokiseptioon ja FM:ään. Todellakin, mikrobimetaboliitit – erityisesti lyhytsuoliset rasvahapot (SCFA) – pystyvät moduloimaan keskushermovälitystä muuttamalla esimerkiksi GABA/glutamaattisuhdetta. Lisäksi ylipaino/liikalihavuuden esiintyvyys saavuttaa 70 % FM-potilailla, mikä on huomattavasti korkeampi kuin yleisväestössä. Ylipaino/liikalihavuuden, dysbioosin ja ruoansulatuskanavan muutosten korkea esiintyvyys FM:ssä viittaa siihen, että ravitsemusterapialla ja mikrobioma-suoli-aivo-akselilla voi olla tärkeä rooli FM:n patogeneesissä.

Vaikka tietoja eri ravitsemuslähestymistapojen ja FM:n välisestä suhteesta on rajallisesti, Välimeren ruokavalio on liitetty alhaisempaan kipuintensiteettiin havainnoivan tutkimuksen mukaan, joka tehtiin 186 FM-potilaalla. Pilot-tutkimus, johon osallistui 18 potilasta, raportoi myös ketogeenisen ruokavalion tehokkuudesta paitsi painonpudotuksen edistämisessä, myös oireiden vakavuuden parantumisessa liikalihavilla naisilla, joilla on FM. Samoin näyttö viittaa siihen, että ketogeeninen ruokavalio voi lisätä GABA-tasoja ja laajemmin nostaa GABA/glutamaattisuhdetta.

Tässä yhteydessä, ravitsemusterapian lisäksi, voi olla tarkoituksenmukaista harkita lisäravinteiden käyttöä bakteerikannoilla, jotka pystyvät tuottamaan välittäjäaineita – kuten GABA:ta – joita FM-potilailla saattaa puuttua ja jotka voisivat vaikuttaa hyödyllisesti keskushermostoon.

Tämän tutkimuksen ensisijainen tavoite on arvioida tietyn ravitsemuslähestymistavan – ketogeeninen ruokavalio, Välimeren ruokavalio tai Välimeren ruokavalio, johon on lisätty GABA:ta tuottavia probiootteja, kuten Bifidobacterium adolescentis PRL2019 – vaikutusta FM:n vakavuuteen, erityisesti keskittyen kipuun, unenlaatuun, ahdistukseen ja masennukseen, mitattuna validoitujen kyselylomakkeiden avulla naispotilailla, joilla on diagnosoitu fibromyalgia ja lievä ylipaino/liikalihavuus.

Tutkimuksen toissijaiset tavoitteet ovat arvioida ravitsemusintervention vaikutusta osallistujien antropometrisiin mittauksiin, metabolisiin parametreihin ja kehonkoostumukseen; arvioida ravitsemusintervention vaikutusta suoliston mikrobioman koostumukseen metabolomiikka-analyysin kautta; ja mitata neurosteroidien tasoja, joilla on positiivista allosteerista aktiivisuutta GABA-A- tai NMDA-reseptoreissa, syljestä ja/tai plasmasta. Lisäksi tutkiva pilot-alatutkimus pyrkii mittaamaan aivojen GABA- ja glutamaattitasoja magneettiresonanssispektroskopian avulla pienessä osassa potilaita.

Tämän tutkimuksen osallistujat rekrytoidaan IRCCS Policlinico San Martino -sairaalan Genovan reumatologian yksikön poliklinikoilta. FM:n korkean naisesiintyvyyden vuoksi tutkimusotos sisältää aikuisia naispotilaita, joilla on diagnosoitu fibromyalgia ja lievä ylipaino/liikalihavuus.

Jokainen tutkimukseen osallistuva potilas täyttää itse reumatologian yksikössä sarjan validoituja kyselylomakkeita, jotka on suunniteltu arvioimaan tarkasti FM:n vakavuutta, erityisesti keskittyen seuraaviin oireisiin: kipu, unenlaatu, masennus, ahdistus ja suoliston toiminta. Potilailta pyydetään täyttämään kyselylomakkeet rekrytoinnissa/perusarvona, neljän viikon välein seurantakäyntien aikana tutkimusprotokollan mukaisesti ja intervention lopussa (12 viikkoa).

Kyselylomakkeisiin kuuluvat Widespread Pain Index (WPI) ja Symptom Severity Scale (SSS), joita molempia käytetään FM:n diagnosoinnissa, sekä Fibromyalgia Impact Questionnaire (FIQR). FIQR arvioi potilaiden elämänlaatua, mukaan lukien fyysinen toimintakyky, sairauden kokonaisvaikutus ja oireet. Se on tutkimuksessa ja kliinisessä käytännössä laajimmin käytetty kyselylomake sairauden vakavuuden arvioimiseksi, ja minimaaliseksi kliinisesti merkittäväksi eroksi on määritelty 14 %:n vähenemys pisteissä.

Kivun tarkempaan tutkimiseen käytetään 11-pisteen numeerista arviointiasteikkoa keskimääräisen kokonaiskipuintensiteetin arvioimiseksi viimeisen 24 tunnin aikana. PainDETECT-kysely (PD-Q) arvioi kivun tyyppiä ja ominaisuuksia, erityisesti neuropaattisia/nokiplastisia komponentteja, erityisesti kroonisen kivun potilailla.

Ahdistusta ja masennusta arvioidaan Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS) -kyselyllä, joka sisältää 7 kohdetta ahdistukselle ja 7 masennukselle, tuottaen kaksi itsenäistä pistemäärää: HADS-A ja HADS-D. Unenlaatua arvioidaan Pittsburgh Sleep Quality Index (PSQI) -kyselyllä, joka arvioi unen latenssia, kestoa, tehokkuutta ja häiriöitä.

Toiminnallisten ruoansulatuskanavan häiriöiden, erityisesti ärsytysoireyhtymän (IBS), tunnistamiseksi sovelletaan Rooman IV -kriteereitä ja Bristol Stool Form -asteikkoa, joka luokittelee ulosteen muodon ja konsistenssin.

T0-käynnillä kerätään kaikki tutkimuksen arviointiin tarvittavat kliiniset tiedot, mukaan lukien sosiodemografiset tiedot, Välimeren ruokavalion noudattaminen (arvioitu validoitulla PREDIMED-kyselyllä), perusaineenvaihduntanopeus laskettuna Mifflin-kaavalla, ravitsemus-, kliininen, perhe- ja sairaushistoria, tupakointitavat, verenpaineen mittaus ja viimeisimmät laboratoriotutkimustulokset.

Osallistujat käyvät sitten verinäytteenoton rutiinilaboratorioarvojen arviointia varten kliinisen käytännön mukaisesti, osa näytteestä varataan metabolomiikka-analyysiä varten. Metaboliitit erotetaan verinäytteistä metanolin ja MTBE:n avulla kohdistamattomaan metabolomiikka-profiiliin, ja MSK-QC-KIT lisätään ennen injektointia UHPLC-järjestelmään. Kromatografinen erotus suoritetaan C18- ja HILIC-olosuhteissa. Massaspektrometriatiedot kerätään hybridi kvadrupoli-Orbitrap Q Exactive Plus -laitteella täysiskannaustilassa, sekä positiivisessa että negatiivisessa ionisaatiossa. Tiedot käsitellään dekonvoluutiota, huippujen poimintaa, kohdistusta ja yhdisteiden tunnistusta varten. Menettelytyhjänäytettä käytetään taustan vähentämiseen ja kohinan poistamiseen esikäsittelyn aikana. Yhdisteiden annotointi suoritetaan MS-FINDER versiolla 3.26, jota seuraa bioinformatiikka-analyysit metaboliittien ja reittien rikastumisen arvioimiseksi.

Rutiinilaboratoriotutkimukset suoritetaan Policlinico San Martinon laboratorioissa, kun taas suoliston mikrobioman kohdistamaton metabolomiikka-analyysi tehdään DINOGMI yliopistolaboratorioissa (IRCCS Giannina Gaslini).

Lopuksi osallistujilta pyydetään myös sylkinäytteitä, joissa mitataan neuroaktiivisten steroidien, kuten kortisolin, progesteronin ja DHEA:n, tasot ELISA-analyysin kautta. Tämä analyysi suoritetaan DIFAR yliopistolaboratorioissa (UNIGE).

Seuraavan seitsemän päivän kuluessa käynti tapahtuu samassa reumatologian yksikön osoittamassa poliklinikassa, jolloin T0:ssa saadut tulokset käydään läpi osallistujan kanssa. Jos ei tunnisteta ongelmia, jotka liittyvät mahdollisiin seulontavirheisiin, osallistujat etenevät satunnaistamiseen ja saavat ravitsemussuunnitelmansa saman klinikan omistautuneelta henkilökunnalta yhteistyössä saman sairaalan ravitsemusterapia- ja kliinisen ravitsemuksen yksikön kanssa.

T1-käynnillä osallistujat satunnaistetaan yhteen kolmesta ravitsemusryhmästä: hypokalorinen ketogeeninen ruokavalio, Välimeren ruokavalio tai Välimeren ruokavalio, johon on lisätty probiootteja. Heille annetaan sitten vastaava ravitsemussuunnitelma yksityiskohtaisten ohjeiden kera sekä kirjallisesti että yksilöllisen neuvonnan kautta. Ehdotetuista ravitsemussuunnitelmista ei odoteta haittavaikutuksia, paitsi ketogeenisessä ruokavaliossa, jossa harvinaiset sivuvaikutukset ovat väliaikaisia ja voivat sisältää pahoinvointia, oksentelua, väliaikaista letargiaa, anoreksiaa, hypoglykemiaa, dehydraatiota, asidoosia, ummetusta, vatsan turvotusta, päänsärkyä ja väsymystä.

Suoritetaan antropometriset mittaukset, mukaan lukien paino, pituus, painoindeksin (BMI) laskeminen, vyötärönympärys ja vyötärön-lantion suhde. Kehonkoostumusanalyysi voidaan suorittaa bioelektrinen impedanssianalyysin (BIA) avulla. Antropometriset mittaukset ja biologisten näytteiden keräys toistetaan seurantakäynneillä neljän viikon välein ja 12 viikon tutkimusjakson lopussa.

Pilot-alatutkimuksessa GABA- ja glutamaattitasot mitataan tietyissä aivoalueissa magneettiresonanssispektroskopian (MRS) avulla. Tätä varten valitaan 18 potilaan osajoukko – 6 kustakin ravitsemusryhmästä – tätä analyysiä varten, ja he allekirjoittavat erityisen tietoon perustuvan suostumuksen. Menettely suoritetaan kahdesti: ensin T1:ssä skannerin saatavuudesta riippuen, ennen ruokavalion aloittamista, ja toisen kerran 4 viikon kuluttua.

Spektroskopiatulokset, keskittyen potilaiden GABA- ja glutamaattitasoihin, verrataan kuudelta verrokkikohdehenkilöltä saatujen spektrien kanssa. Verrokkikohdehenkilöt seulotaan käyttämällä etäistä ja viimeaikaista sairaushistoriaa sulkeakseen pois mahdollisen läsnäolon mitä tahansa elimikohtaisia patologioita arvioinnin aikana neuroradiologin toimesta. Kliinisen käytännön mukaisesti ennen tutkimusta täytetään kyselylomake mahdollisten vasta-aiheiden arvioimiseksi, ja sen allekirjoittavat sekä valvova neuroradiologi että osallistuja. Kontrastiainetta ei anneta.

Verrokkikohdehenkilöiden rekrytointi on tarpeen, koska GABA-glutamaattihuippujen mittaaminen keskushermoston alueilla on haastavaa ja monimutkaista. Perustasojen GABA- ja glutamaattitasojen määrittäminen terveillä verrokkikohdehenkilöillä on välttämätöntä vertailua varten FM-potilaiden kanssa, joilla saattaa olla muuttuneita tasoja. Jos MRS-tutkimuksen aikana epäillään patologisia löydöksiä joko verrokkikohdehenkilöillä tai FM-potilailla, neuroradiologi ilmoittaa asiasta kohdehenkilöille ja suosittelee täydellistä morfologista MR-tutkimusta, kontrastiaineella tarvittaessa.

Magneettikuvantaminen (MRI) käyttää radioaaltoliikettä ionisoivan säteilyn sijaan, toisin kuin tietokonetomografia, ja sopivilla sekvensseillä ei tällä hetkellä tiedetä erityisiä riskejä osallistujille. Tietojen käsittely suoritetaan offline-tilassa Gannet-ohjelmistolla versio 3, joka on kehitetty yksivokselisten 1H-MRS-tietojen analysointiin GABA:n ja glutamaatin mittaamiseksi. Metaboliittipitoisuudet ilmaistaan instituutioyksiköissä suhteessa veteen, korjauskertoimella, joka johdetaan vokselin aivo-selkäydinnesteosuudesta. Ohjelmisto mahdollistaa rakenteellisen kuvan kohdistamisen vokselin kanssa ja segmentoinnin kolmeen pääkudostyyppiin tämän korjauskertoimen laskemiseksi. Metaboliittipitoisuuksien muutokset T0:n ja T4:n välillä lasketaan suhteessa perusarvoon, ja T4-arvot verrataan verrokkikohdehenkilöiden keskiarvoihin.

Käytettävä MRI-skanneri on 3T Prisma Siemens, joka on saatavilla Neuroradiologian yksikössä ja jota käytetään säännöllisesti sekä kliinisiin että tutkimustarkoituksiin. Mittauksiin käytetään MEGA-PRESS-sekvenssiä, joka sisältyy keräysprotokolliin. Kaksi vokselia – 30 × 30 × 30 mm³ – sijoitetaan: toinen vasempaan talamukseen ja toinen vasempaan parietaaliseen somatosensoriseen kortekseen. Nämä alueet valittiin edustamaan sensorista korteksia ja talamuksen välitysrakenteita, heijastaen sensorisia reittejä, mukaan lukien kivun käsittely. Lisäksi kerätään kaksi rakenteellista kuvantamissekvenssiä, T1-MPRAGE 3D ja FLAIR-3D, tietojen analysointia varten.

Osallistumiskriteerit

• Aikuiset naispotilaat, joilla on diagnosoitu fibromyalgia, ikä ≤ 65 vuotta, ylipaino tai luokan I liikalihavuus (24,9 < BMI ≤ 34,9 kg/m²).
• Potilaat, jotka kykenevät antamaan itsenäisesti kirjallisen tietoon perustuvan suostumuksen tutkimukseen osallistumisesta.
• Potilaat, jotka ovat motivoituneita osallistumaan tutkimukseen ja kykenevät hallitsemaan ravitsemussuunnitelmia itsenäisesti.

Poissulkemiskriteerit

• Allekirjoittamattoman tietoon perustuvan suostumuksen puuttuminen.
• Ikä < 18 tai > 65 vuotta.
• Miespuolinen sukupuoli.
• Potilaat, joilla on ruoka-allergioita tai keliakia, tyypin 1 diabetes mellitus tai autoimmuunimuotoinen diabetes, tai vakava haiman beetasolujen toimintahäiriö; potilaat, joita hoidetaan SGLT2-estäjillä; potilaat, joilla on äskettäisiä sydän- tai aivoverenkierron tapahtumia, maksan vajaatoiminta, keskivaikea tai vakava munuaisten vajaatoiminta, hengitysvajaus, kihti-kohtauksia, munuaiskiviä, elektrolyyttiepätasapainoa, NYHA-luokan III–IV sydämen vajaatoiminta, epävakaa angina pectoris, sydämen rytmihäiriöitä tai sydäninfarkti viimeisen 12 kuukauden aikana; vakava masennus tai muut psykiatriset häiriöt; lääkeaineiden, huumausaineiden tai alkoholin väärinkäyttö; heikot potilaat; raskaus tai imetys; potilaat, joille on suunniteltu leikkaus tai invasiivisia toimenpiteitä; harvinaiset aineenvaihduntahäiriöt, kuten porfyria, karnitiinin puutos, karnitiinipalmityyylitransferaasin puutos, karnitiini-asylikarnitiinitranslokaasin puutos, pyruvaattikarboksylaasin puutos tai mitokondrion beetahapetus-häiriöt; potilaat, joilla on diureettihoidot.
• Prebioottien ja/tai probioottien käyttö, joita tutkimus ei määrittele, tai muiden ravintolisien käyttö kuukautta ennen rekrytointia.
• Antibioottihoidot 3 kuukautta ennen rekrytointia.
• Aktiiviset infektiot rekrytoinnin aikana tai mikä tahansa krooninen ruoansulatuskanavan häiriö (esim. Crohnin tauti).
• Merkittävät syömisongelmat (esim. dysfagia). Lisäpoissulkemiskriteerit MRI:lle
• Implantoidut metallilaitteet (esim. sydämentahdistin).
• Pään, kaulan tai kehon koko yhteensopimaton MRI-skannerin kanssa.
• Korvakorujen läsnäolo tai vaikea klaustrofobia. Tutkimusotos
• 90 naispotilasta: 30 kohdistetaan ketogeeniseen ruokavalioon (VLCKD), 30 Välimeren ruokavalioon (MD) ja 30 Välimeren ruokavalioon, johon on lisätty probiootteja (MDP). 10 %:n luopumisprosentti ennakoidaan fibromyalgian hoidon ja ravitsemusinterventioiden kirjallisuuden perusteella.

Pilot-alatutkimus

• 18 naispotilasta, 6 kustakin ravitsemusryhmästä, sisällytetään MRS-analyysiin.

Tutkimuksen kesto ja arvioinnit

• Jokainen potilas käy läpi 12 viikon ravitsemusintervention.
• Perusarviointi T0:ssa, satunnaistaminen ja ravitsemussuunnitelman luovutus T1:ssä.
• Seurantakäynnit 4, 8 ja 12 viikon kohdalla (T4, T8, T12).
• Valinnaiset puhelinyhteydet 2 tai 6 viikon kohdalla (T2 tai T6) tarvittaessa.

Välimeren ruokavalio Tarjotaan hypokalorinen Välimeren ruokavalio, 1400 kcal/päivä. Makroravinteiden jakautuminen noudattaa Italian ravintoaineiden ja energian viitearvotasoja – LARN, 5. painos: 0,8–1,2 g/kg kehonpainoa proteiineille, 45–60 % kaloreista hiilihydraateista ja 20–35 % lipideistä. Päivittäinen kalorien jako on: 15 % aamiaisella, 35–40 % lounaalla, 30–35 % illallisella ja loput 10 % jaettu kahteen välipalaan. Jokainen osallistuja noudattaa Välimeren ruokavaliota koko 12 viikon interventioajan, mukautuksin tarvittaessa noudattamisen varmistamiseksi.

Erittäin matalakalorinen ketogeeninen ruokavalio (VLCKD):

VLCKD on matalahiilihydraattinen, vähennetyn kalorien ravitsemussuunnitelma, joka tarjoaa riittävästi proteiinia. Sen mekanismi perustuu ketonien tuotantoon, joita käytetään vaihtoehtoisena energialähteenä glukoosin sijaan. Ketoosi tapahtuu, kun hiilihydraattien saanti on erittäin alhainen, pakottaen kehon mobilisoimaan rasvaa energiaksi. VLCKD on osoittautunut tehokkaaksi nopeaan painonpudotukseen liikalihavilla henkilöillä, joilla muut ravitsemusinterventiot ovat epäonnistuneet, ja se sisältyy terapeuttiseksi vaihtoehdoksi liikalihavuuden hoidon ohjeisiin. Viimeaikainen näyttö viittaa lisähyötyihin mielialaan, kognitiiviseen toimintaan, nokiseptioon ja unenlaatuun.

Tässä tutkimuksessa osallistujat saavat ruokapaketteja, jotka on valmistanut SDM (Pronokal Group), tarjoten kaikki ateriat ja vitamiinilisät, joita tarvitaan ravitsemukselliseen tasapainoon ja VLCKD:n noudattamiseen. Interventio koostuu kolmesta vaiheesta:

• Vaihe I – "Hyökkäys" 4 viikon aikana: 800 kcal/päivä, 1,2 g/kg ihanteellista kehonpainoa proteiinia, 10–15 g lipidejä, 45–70 g hiilihydraatteja; päivittäinen lisäys sisältää 2 bs/päivä UNICOMPLEX-monivitamiineja, 3–4 PronoKal-ateriaa, 2 rkl öljyä ja vähätärkkelyksisiä vihanneksia (esim. lehtimangoldi, parsakaali, kukkakaali, sikuri, raparperi, kesäkurpitsa, valeriaana).

• Vaihe II – Siirtymä 4 viikon aikana: Hiilihydraattien asteittainen uudelleenkäyttöönotto, kalorisaannon lisääminen ja PronoKal-tuotteiden käytön vähentäminen; 1 bs/päivä UNICOMPLEX:ia säilytetään. Vaiheittainen käyttöönotto:

  1. Viikko 1 – hedelmät ja viljat aamiaisella (+150 kcal)
  2. Viikko 2 – maitotuotteet ja viljat lounaalla (+150 kcal)
  3. Viikko 3 – palkokasvit (+150 kcal)
  4. Viikko 4 – kalorien lisääminen aiemmin käyttöön otetuista ruoista (+150 kcal)
• Vaihe III – Ylläpito 4 viikon aikana: Hypokalorinen Välimeren tyylinen ruokavalio, 1400 kcal/päivä, täydentäen 12 viikon interventiota.

Kolmas ryhmä 30 osallistujaa noudattaa henkilökohtaista Välimeren ruokavaliota, kuten edellä kuvattu, rikastettuna GABA:ta tuottavilla probiooteilla, esim. Bifidobacterium adolescentis PRL2019 (20 CFU/päivä) 12 viikon ajan.

Otoskoko Päätutkimuksen otoskoko arvioitiin FIQ-testin perusteella. Odotetut erot perusarvon ja hoidon välillä olivat 12 pistettä parhaiten suoriutuvalle interventiolle, ja 8 ja 6 pistettä kahdelle muulle, oletetulla ryhmänsisäisellä keskihajonnalla 7, merkitsevyys α = 0,05 ja voima 1–β = 0,8. Tämä johti kokonais-n = 81:een. 10 %:n luopumisprosentin huomioon ottamiseksi rekrytoidaan 30 potilasta kustakin ryhmästä, kokonais-n = 90.

Rajoitetun skannerin saatavuuden vuoksi MRI-analyysi on pilot-tutkimus, mikä on yleistä toteutettavuuden arvioimiseksi ilman muodollisia voimalaskelmia. Kolme ryhmää, yksi kustakin interventioryhmästä, n = 6 potilasta kustakin, käyvät läpi MR-mittaukset T1:ssä ja T4:ssä Neuroradiologian yksikössä, Policlinico San Martino. Tietoja verrataan yhden mittauksen MR-skannauksiin vastaavilta verrokkikohdehenkilöiltä.

Tilastollinen analyysi suoritetaan käyttäen IBM SPSS Statistics versiota 25 ja R versiota 4.3.3, riippuen tilastollisista vaatimuksista. Normaaliuden oletus jokaiselle muuttujalle arvioidaan Shapiro-Wilk-testillä. Jatkuvat muuttujat raportoidaan mediaanina ja kvartiilivälinä tai keskiarvona ± keskihajontana, riippuen siitä, noudattavatko ne normaalijakaumaa. Ordinaaliset ja nominaaliset muuttujat tiivistetään ristitaulukoihin, jotka näyttävät frekvenssit ja prosenttiosuudet tutkimuspopulaatiossa.

Jatkuvien ja ordinaalisten muuttujien vertailut potilasryhmien välillä suoritetaan parametrisilla tai ei-parametrisilla keskiarvoerojen testeillä, riippuen ryhmän koosta, tai varianssianalyysillä (ANOVA). Nominaalisia muuttujia analysoidaan ristitaulukoissa käyttäen Pearsonin khiin neliö (χ²) -testiä tai Fisherin tarkkaa testiä. Erityisesti kyselylomaketuloksissa hoidon tehokkuus arvioidaan arvioimalla ennen-jälkeen pistemääräeroja ryhmien välillä ja niiden keskihajontoja vaikutuksen suuruuden laskemiseksi. Tilastollinen merkitsevyys arvioidaan ANOVA-malleilla (parametriset tai ei-parametriset), kuten soveltuu.

Metaboliitit, jotka osoittavat merkittäviä eroja ryhmien välillä, tunnistetaan käyttäen yksisuuntaista ANOVA:ta, jota seuraa Tukeyn HSD-jälkitesti p-arvon kynnysarvon perusteella. Metaboliittitasojen muutokset visualisoidaan EnhancedVolcano-paketin version 1.12.0 avulla. Sytokiini- ja kemokiinitasojen erot arvioidaan käyttäen ANOVA:ta ja Studentin t-testiä. P-arvo ≤ 0,05 katsotaan osoittavan tilastollisesti merkittävää eroa ryhmien välillä.