Flavonoïdes, exercice, composés phénoliques dérivés de l'intestin

Conception de la recherche : les participants à l'étude (N = 85) seront inclus dans l'étude et randomisés dans les groupes de suppléments de flavonoïdes ou de placebo pendant 2 semaines, ces deux groupes indépendants étant exécutés en parallèle (avec N = 80 prévus pour terminer avec succès toutes les phases de l'étude) . Les suppléments seront administrés en double aveugle sous forme de capsules. Les participants à l'étude se présenteront au centre de recherche pour les tests de base et l'orientation, puis avant l'étude et après la supplémentation de 2 semaines, puis à nouveau 24 heures plus tard. Quatre échantillons de sang seront prélevés comme indiqué sur la figure (avant et après la supplémentation, après l'exercice/repos et 24 heures après l'exercice/repos). Lors de leur rapport au laboratoire après 2 semaines de supplémentation, les participants à l'étude seront randomisés pour s'asseoir ou marcher rapidement sur des tapis roulants pendant 45 minutes. Un groupe de comparaison de 20 coureurs ingérant le supplément de flavonoïdes et courant 2,5 h en laboratoire sera inclus pour permettre une comparaison entre un effort modéré et intense (et pour fournir des données pilotes pour une future étude). Test de base : une à deux semaines avant le début de l'étude, les participants à l'étude (marcheurs et coureurs) recevront une orientation sur l'étude, puis donneront leur consentement volontaire. Des instructions seront données pour enregistrer tous les aliments et boissons consommés dans des journaux alimentaires de 3 jours (jeudi, vendredi et samedi avant le début de la supplémentation). Les antécédents démographiques et de formation seront acquis à l'aide de questionnaires. La taille, le poids corporel et le pourcentage de graisse corporelle (échelle d'impédance bioélectrique seca Medical Body Composition Analyzer 514, Hanovre, MD) seront mesurés. La VO2max sera évaluée à l'aide du protocole du tapis roulant de Bruce, la consommation d'oxygène et la ventilation étant surveillées en continu à l'aide du système métabolique Cosmed CPET.

Visite de laboratoire avant la supplémentation : le premier jour de l'étude, les participants (marcheurs et coureurs) retourneront au laboratoire à jeun (9 heures ou plus sans nourriture ni boisson autre que de l'eau). Des échantillons de sang seront prélevés dans une veine antécubitale avec des sujets en position assise. Les participants (marcheurs) recevront un approvisionnement de 2 semaines de capsules de flavonoïdes ou de placebo organisées en plateaux de suppléments pour faciliter l'observance. Les coureurs recevront un approvisionnement de 2 semaines en capsules de flavonoïdes. Le registre alimentaire de 3 jours sera examiné et collecté par l'équipe de recherche, et analysé pour la teneur en nutriments et en flavonoïdes à l'aide du robot culinaire v. 11.1 (ESHA Research, Salem, OR). Chaque aliment/boisson sera évalué pour les macro et micronutriments, les flavonoïdes totaux et les sous-totaux pour chacune des six sous-classes de flavonoïdes, et deux valeurs individuelles de flavonoïdes (quercétine, EGCG). Pendant la période de 2 jours précédant la visite #3 au laboratoire, et pendant toute la journée qui comprend la visite #3, il sera demandé aux participants d'éviter les aliments et les boissons contenant du sucralose (Splenda) et du mannitol. Pour éviter le sucralose et le mannitol, les participants seront invités à vérifier les listes d'ingrédients pour les sodas allégés, les yaourts et autres produits laitiers, les collations, les chewing-gums et les bonbons, les produits à faible teneur en sucre, les dentifrices et les bains de bouche.

Visites de laboratoire post-supplémentation :

Après la période de supplémentation de 2 semaines, les participants (marcheurs et coureurs) retourneront au laboratoire dans un état de jeûne nocturne (le même jour de la semaine que la visite de laboratoire pré-supplémentation).

Les participants retourneront le plateau de suppléments pour vérifier la conformité avec l'ingestion des capsules. Un échantillon de sang sera prélevé. Les participants (marcheurs) seront randomisés pour s'asseoir pendant 45 minutes dans le laboratoire ou pour marcher rapidement pendant 45 minutes sur un tapis roulant gradué à 5 % à 60 % de VO2max (avec surveillance métabolique pendant les 5 premières minutes, puis à 15, 30, et 45 minutes) à l'aide du chariot métabolique Cosmed CPET. Les coureurs courront à 70 % de VO2max sur un tapis roulant non gradué pendant 2,5 h, avec des mesures métaboliques effectuées toutes les 30 minutes. L'eau sera distribuée à volonté à tous les participants, aucune autre boisson ou nourriture n'est autorisée. Juste avant les séances de laboratoire assis ou à pied et la course de 2,5 h, les participants consommeront une solution de 150 ml contenant 1 g de saccharose, 1 g de lactulose, 0,5 g de L-rhamnose, 1 g d'érythritol, 1 g de sucralose, 0,5 g de mannitol .

L'urine sera recueillie dans des récipients en plastique pendant 24 h en deux fractions distinctes : 0-5 h et 5-24 h. Il est interdit de manger ou de boire (à l'exception de l'eau du robinet) pendant les 5 premières heures de collecte d'urine. Les participants reviendront le lendemain matin dans un état de jeûne nocturne, fourniront un échantillon de sang et remettront des échantillons d'urine.

Directives de collecte d'urine aux sujets :

• Vous devez collecter chaque goutte d'urine pendant chaque période de collecte (5 heures à partir du début de la séance d'exercice, puis la deuxième collecte jusqu'au lendemain matin ou 5 à 24 h à partir du début de l'exercice). Peu importe la quantité ou la quantité d'urine émise à chaque fois, tant que chaque goutte est collectée.
• Recueillez chaque goutte d'urine pendant le jour et la nuit dans les deux bouteilles de collecte (0-5 heures, 5-24 heures, en commençant par le début de la séance d'épreuve d'effort en laboratoire). Conservez les bouteilles au réfrigérateur. Assurez-vous de recueillir toute urine émise pendant les selles.
• Terminez en recueillant la première urine émise le lendemain matin, en l'ajoutant au flacon de collecte. Apportez les deux bouteilles de collecte d'urine avec vous au laboratoire (c'est-à-dire le matin après la séance d'exercice lorsque vous fournirez votre dernier échantillon de sang).

Supplément flavonoïde : le supplément et les capsules placebo seront préparés par Reoxcyn Innovation Group LLC (Salt Lake City, UT). (VOIR les informations complémentaires dans le fichier joint). Les ingrédients seront les mêmes que ceux testés dans l'essai communautaire : vitamine C (sous forme de palmitate d'ascorbyle) (Green Wave Ingredients, La Mirada, CA), extrait de myrtille sauvage (25 % d'anthocyanines totales) (FutureCeuticals, Momence, IL), thé vert extrait de feuille (50% EGCG) (Watson Industries, Inc., Pomona, CA), aglycone de quercétine (Novel Ingredients, East Hanover, NJ), caféine (Creative Compounds, Scott City, MO) et acides gras oméga 3 (Novotech Nutraceuticals , Ventura, Californie). Les ingrédients et excipients de remplissage de la gélule comprennent Nu-Flow 70R (à partir de coques de riz), du tapioca à partir de racine de manioc, de la silice de bambou naturelle et de la racine de guimauve. Les gélules placebo ne contiendront que les ingrédients de remplissage et les excipients (sans les ingrédients actifs). La portion quotidienne pour les marcheurs sera de 2 gélules de flavonoïdes ou de 2 placebos. Deux capsules de flavonoïdes fournissent 329 mg de flavonoïdes (la moyenne adulte américaine, selon l'étude, est de 240 mg par jour). La portion quotidienne pour les coureurs sera de 4 gélules de flavonoïdes (658 mg de flavonoïdes). Les participants recevront un approvisionnement de 2 semaines en capsules de flavonoïdes ou de placebo, avec des instructions sur la façon de consommer quotidiennement en doses fractionnées (1 avec le petit-déjeuner et 1 avec le déjeuner, ou le double pour les coureurs). Les participants à l'étude seront autorisés à ajouter une capsule supplémentaire par jour pour augmenter la consommation si un ou deux jours de prise du supplément sont manqués. Les participants à l'étude ingéreront 2 capsules (4 pour les coureurs) juste après avoir fourni l'échantillon de sang lors de la séance de laboratoire marche/repos (ou course).

Les CAPSULES DE SUPPLÉMENT seront TESTÉES pour la teneur en flavonoïdes avant et après l'étude par le Dr Mary Ann Lila (NCSU, Plants for Human Health Institute, NCRC).

Analyse métabolomique ciblée :

Les métabolites phénoliques dérivés de l'intestin seront purifiés du plasma par SPE à l'aide d'une plate-forme automatisée et d'un protocole SPE interne à 96 puits (60 mg, 3 ml; Phenomenex) pour l'extraction de 100 μL de tissu. Tous les analytes ont été préalablement optimisés pour des efficacités d'extraction comprises entre 80 et 100 % de récupération avec un CV ≤ 10 %. Les extraits seront séparés et quantifiés par chromatographie liquide tandem-MS/MS impliquant des méthodologies déjà publiées et validées. En bref, l'analyse HPLC-ESI-MS/MS sera effectuée à l'aide d'un SCIEX UPLC couplé 6500 + MS/MS-QTRAP™ équipé d'une source Turbo-V d'ionisation par électrospray (ESI) (métabolites sanguins et fécaux), avec des échantillons injectés sur un La colonne Kinetex PFP et le gradient de phase mobile consistaient en 0,1 % d'acide formique (v/v) dans l'eau (A) et 0,1 % d'acide formique (v/v) dans l'acétonitrile (B), et un temps de séparation de 24 min. Le protocole d'analyse des métabolites ciblés a été optimisé et validé pour détecter plus de 200 analytes qui sont quantifiés par rapport aux normes commerciales et synthétiques authentiques de notre bibliothèque, avec des conjugués putatifs de phase II identifiés à l'aide du profilage de fragmentation impliquant 3 à 5 transitions uniques. Cela implique de scanner plus de 1000 transitions correspondant aux conjugués sulfate, glucuronide, méthyle et glycine. Cette méthodologie SMRM a été précédemment optimisée pour le traitement Rexocyn et fournit une méthode beaucoup plus sensible que les procédures de balayage traditionnelles de surveillance de réactions multiples (MRM), car elle permet de surveiller un plus grand nombre de transitions par unité de temps, en plus de permettre un composé unique dépendant paramètres à utiliser pour chaque analyte, résultant en une sensibilité accrue. Enfin, les métabolites seront confirmés sur la base du temps de rétention (en utilisant des normes authentiques et synthétisées si possible) et trois ou plusieurs transitions d'ions précurseur à produit. Des courbes d'étalonnage matricielles en sept points allant de 0 à 10 μM seront utilisées pour l'analyse des flavonoïdes ou de 0 à 50 μM pour l'analyse des métabolites phénoliques.

Perméabilité intestinale, Urine Lactulose/Rhamnose :

Les concentrations de sucre dans l'urine seront déterminées par chromatographie liquide à haute pression. Le saccharose dans les urines de 0 à 5 h, le rapport lactulose/rhamnose (L/R) dans les urines de 0 à 5 h et le rapport sucralose/érythritol (S/E) dans les urines de 5 à 24 h seront utilisés comme indicateurs de troubles gastroduodénaux. , perméabilité de l'intestin grêle et du gros intestin, respectivement.