Flavonoider, motion, tarmafledte fenoler

Forskningsdesign: Studiedeltagere (N=85) vil blive indgået i undersøgelsen og randomiseret til flavonoid- eller placebo-tilskudsgrupperne i 2 uger, hvor disse to uafhængige grupper køres parallelt (med N=80 forventes at gennemføre alle undersøgelsesfaser med succes) . Kosttilskud vil blive administreret på en dobbeltblindet måde i kapselform. Undersøgelsesdeltagere vil rapportere til forskningsfaciliteten for baseline test og orientering, og derefter forundersøgelse og efter 2-ugers tilskud, og derefter igen 24 timer senere. Fire blodprøver vil blive indsamlet som vist i figuren (før og efter tilskud, efter træning/hvile og 24 timer efter træning/hvile). Når de rapporterer til laboratoriet efter 2 ugers tilskud, vil studiedeltagerne blive randomiseret til enten at sidde eller gå rask på løbebånd i 45 minutter. En sammenligningsgruppe på 20 løbere, der indtager flavonoidtilskuddet og løber 2,5 timer i laboratoriet, vil blive inkluderet for at muliggøre en sammenligning mellem moderat og intens anstrengelse (og for at give pilotdata til en fremtidig undersøgelse). Baseline-testning: En til to uger før studiets start vil deltagerne i undersøgelsen (vandrere og løbere) blive orienteret om undersøgelsen og derefter give frivilligt samtykke. Der vil blive givet instruktioner til registrering af alt mad- og drikkevareindtag i 3-dages madlogfiler (torsdag, fredag ​​og lørdag før påbegyndelse af tilskud). Demografiske historier og uddannelseshistorier vil blive erhvervet med spørgeskemaer. Højde, kropsvægt og procent kropsfedt (seca Medical Body Composition Analyzer 514 bioelectrical impedance scale, Hannover, MD) vil blive målt. VO2max vil blive vurderet ved hjælp af Bruces løbebåndsprotokol, med iltforbrug og ventilation løbende overvåget ved hjælp af Cosmed CPET metaboliske system.

Forudgående laboratoriebesøg: På den første dag af undersøgelsen vil deltagere (vandrere og løbere) vende tilbage til laboratoriet i fastende tilstand (9 eller flere timer uden mad eller drikke andet end vand). Blodprøver vil blive taget fra en antecubital vene med forsøgspersoner i siddende stilling. Deltagerne (vandrere) vil få en 2-ugers forsyning af flavonoid- eller placebokapsler organiseret i tilskudsbakker for at lette overholdelse. Løbere får en 2-ugers forsyning af flavonoidkapsler. Den 3-dages madregistrering vil blive gennemgået og indsamlet af forskerholdet og analyseret for indhold af næringsstoffer og flavonoider ved hjælp af Food Processor v. 11.1 (ESHA Research, Salem, OR). Hver mad/drikkevare vil blive vurderet for makro- og mikronæringsstoffer, totale flavonoider og subtotaler for hver af de seks flavonoidunderklasser og to individuelle flavonoidværdier (quercetin, EGCG). I løbet af 2-dagesperioden forud for besøg #3 i laboratoriet, og i løbet af hele dagen, der inkluderer besøg #3, vil deltagerne blive bedt om at undgå mad og drikkevarer, der indeholder sucralose (Splenda) og mannitol. For at undgå sucralose og mannitol vil deltagerne blive bedt om at tjekke ingredienslister for diætsodavand, yoghurt og andre mejeriprodukter, snacks, tyggegummi og slik, produkter med lavt sukkerindhold, tandpasta og mundskyl.

Labbesøg efter tillæg:

Efter den 2-ugers tilskudsperiode vil deltagere (vandrere og løbere) vende tilbage til laboratoriet i fastetilstand natten over (på samme dag i ugen som laboratoriebesøget før tilskud).

Deltagerne vil aflevere tilskudsbakken for at bekræfte overholdelse af indtagelse af kapslerne. Der vil blive udtaget en blodprøve. Deltagerne (vandrere) vil blive randomiseret til enten at sidde i 45 minutter i laboratoriet eller til at gå hurtigt i 45 minutter på et 5 % løbebånd ved 60 % VO2max (med metabolisk overvågning i løbet af de første 5 minutter og derefter kl. 15, 30, og 45 minutter) ved at bruge Cosmed CPET metaboliske vogn. Løbere vil løbe ved 70 % VO2max på et ugraderet løbebånd i 2,5 timer, med metaboliske målinger foretaget hvert 30. minut. Vand vil blive givet ad libitum til alle deltagere, uden andre drikkevarer eller mad tilladt. Lige før de siddende eller gående laboratoriesessioner og løbeturen på 2,5 timer vil deltagerne indtage en 150 ml opløsning indeholdende 1 g saccharose, 1 g lactulose, 0,5 g L-rhamnose, 1 g erythritol, 1 g sucralose, 0,5 g mannitol .

Urin vil blive opsamlet i plastikbeholdere i 24 timer i to separate fraktioner: 0-5 timer og 5-24 timer. Det er ikke tilladt at spise eller drikke (undtagen postevand) under de første 5 timers urinopsamling. Deltagerne vender tilbage næste morgen i fastende tilstand natten over, giver en blodprøve og afleverer urinprøver.

Retningslinjer for urinopsamling til forsøgspersonerne:

• Du bør samle hver dråbe urin i hver opsamlingsperiode (5 timer fra træningskampens start, og derefter den anden opsamling, der varer til næste morgen eller 5 til 24 timer fra træningens start). Det er lige meget, hvor meget eller lidt der urineres hver gang, så længe hver dråbe opsamles.
• Saml hver dråbe urin i løbet af dagen og natten i de to opsamlingsflasker (0-5 timer, 5-24 timer, begyndende med starten af ​​laboratoriets træningstestsession). Opbevar flaskerne i køleskabet. Sørg for at opsamle al urin, der passerer under afføring.
• Afslut med at samle den første urin, der passerer næste morgen, og tilsæt den til opsamlingsflasken. Tag begge urinopsamlingsflasker med til laboratoriet (dvs. morgenen efter træningssessionen, hvor du skal afgive din sidste blodprøve).

Flavonoid Supplement: Supplement og placebo kapsler vil blive fremstillet af Reoxcyn Innovation Group LLC (Salt Lake City, UT). (SE supplerende oplysninger i vedhæftede fil). Ingredienser vil være de samme som testet i fællesskabsforsøget: C-vitamin (som ascorbylpalmitat) (Green Wave Ingredients, La Mirada, CA), vilde blåbærfrugtekstrakt (25 % samlede anthocyaniner) (FutureCeuticals, Momence, IL), grøn te bladekstrakt (50 % EGCG) (Watson Industries, Inc., Pomona, CA), quercetin aglycone (Novel Ingredients, East Hanover, NJ), koffein (Creative Compounds, Scott City, MO) og omega 3 fedtsyrer (Novotech Nutraceuticals Ventura, CA). Ingredienser og hjælpestoffer til kapselfyld omfatter Nu-Flow 70R (fra risskaller), tapioka fra maniokrod, naturlig bambussilica, skumfidusrod. Placebo-kapsler vil kun indeholde fyldeingredienserne og hjælpestofferne (uden de aktive ingredienser). Den daglige servering til vandrere vil være 2 flavonoid eller 2 placebo kapsler. To flavonoidkapsler giver 329 mg flavonoider (amerikansk voksengennemsnit, afhængigt af undersøgelsen, er 240 mg pr. dag). Den daglige servering til løberne vil være 4 flavonoidkapsler (658 mg flavonoider). Deltagerne vil få en 2-ugers forsyning af enten flavonoid- eller placebokapslerne med instruktioner om, hvordan man indtager dagligt i opdelte doser (1 med morgenmad og 1 med frokost, eller det dobbelte af den mængde for løberne). Undersøgelsesdeltagere vil få lov til at tilføje en ekstra kapsel om dagen for at øge forbruget, hvis en eller to dage med at tage tilskuddet overses. Undersøgelsesdeltagere vil indtage 2 kapsler (4 til løberne) lige efter at have givet blodprøven under gang/hvile (eller løb) laboratoriesessionen.

SUPPLEMENTSKAPSLER vil blive TESTET for flavonoidindhold før og efter undersøgelse af Dr. Mary Ann Lila (NCSU, Plants for Human Health Institute, NCRC).

Målrettet metabolomisk analyse:

Tarmafledte phenoliske metabolitter vil blive oprenset fra plasma af SPE ved hjælp af en automatiseret platform og intern 96-brønds SPE-protokol (60mg, 3mL; Phenomenex) til ekstraktion af 100 μL væv. Alle analytter er tidligere blevet optimeret til ekstraktionseffektiviteter på mellem 80-100% genfindinger med CV≤10%. Ekstrakter vil blive adskilt og kvantificeret via væskekromatografi tandem-MS/MS, der involverer tidligere offentliggjorte og validerede metoder. Kort fortalt vil HPLC-ESI-MS/MS-analyse blive udført ved hjælp af en SCIEX UPLC-koblet 6500 + MS/MS-QTRAP™ udstyret med en elektrospray-ionisering (ESI) Turbo-V-kilde (blod- og fækale metabolitter), med prøver injiceret på en Kinetex PFP-søjle og mobilfasegradient bestod af 0,1 % myresyre (v/v) i vand (A) og 0,1 % myresyre (v/v) i acetonitril (B) og en adskillelsestid på 24 minutter. Den målrettede metabolitanalyseprotokol er blevet optimeret og valideret til at detektere mere end 200 analytter, som er kvantificeret i forhold til autentiske kommercielle og syntetiske standarder i vores bibliotek, med formodede fase II-konjugater identificeret ved hjælp af fragmenteringsprofilering, der involverer 3-5 unikke overgange. Dette involverer scanning af over 1000 overgange svarende til sulfat-, glucuronid-, methyl- og glycinkonjugater. Denne SMRM-metodologi var tidligere optimeret til Rexocyn-behandlingen og giver en betydeligt mere følsom metode end traditionelle MRM-scanningsprocedurer (Multiple Reaction Monitoring), da den tillader overvågning af et større antal overgange pr. tidsenhed, udover at tillade unikke forbindelsesafhængige parametre, der skal anvendes for hver analyt, hvilket resulterer i øget følsomhed. Endelig vil metabolitter blive bekræftet på basis af retentionstid (ved anvendelse af autentiske og syntetiserede standarder, hvor det er muligt) og tre eller flere precursor-til-produktion-overgange. Syv-punkts matrix-matchede kalibreringskurver i området fra 0 til 10 μM vil blive brugt til analyse af flavonoider eller fra 0 til 50 μM til analyse af phenoliske metabolitter.

Intestinal permeabilitet, urin lactulose/rhamnose:

Urinsukkerkoncentrationer vil blive bestemt ved højtryksvæskekromatografi. Saccharose i 0-5 timers urin, lactulose/rhamnose (L/R) forhold i 0-5 timers urin og sucralose/erythritol (S/E) forhold i 5-24 timers urin vil blive brugt som indikatorer for gastroduodenal , henholdsvis tynd- og tyktarmspermeabilitet.