Flavonoidit, liikunta, suolistosta peräisin olevat fenolit

Tutkimuksen suunnittelu: Tutkimukseen osallistujat (N=85) otetaan mukaan tutkimukseen ja satunnaistetaan flavonoidi- tai lumelääkettä saaneisiin ryhmiin 2 viikon ajaksi, ja nämä kaksi itsenäistä ryhmää ajetaan rinnakkain (N=80:n odotetaan suorittavan menestyksekkäästi kaikki tutkimusvaiheet) . Lisäravinteet annetaan kaksoissokkoutetulla tavalla kapselimuodossa. Tutkimukseen osallistujat raportoivat tutkimuslaitokseen lähtötilanteen testausta ja orientaatiota varten, ja sitten ennen tutkimusta ja 2 viikon lisäravinteen jälkeen ja sitten uudelleen 24 tuntia myöhemmin. Neljä verinäytettä otetaan kuvan osoittamalla tavalla (ennen ja jälkeen täydennystä, harjoituksen/lepoa ja 24 tuntia harjoituksen jälkeen/lepoa). Kun tutkimuksen osallistujat raportoivat laboratorioon 2 viikon lisäravinteen jälkeen, he satunnaistetaan joko istumaan tai kävelemään reippaasti juoksumatoilla 45 minuutin ajan. Mukaan otetaan 20 juoksijan vertailuryhmä, joka nauttii flavonoidilisää ja juoksee 2,5 tuntia laboratoriossa, jotta voidaan verrata kohtalaista ja intensiivistä rasitusta (ja tarjota pilottitietoja tulevaa tutkimusta varten). Perustestaus: Yksi tai kaksi viikkoa ennen tutkimuksen alkua tutkimuksen osallistujille (kävelijöille ja juoksijalle) annetaan opastusta tutkimukseen ja annetaan sitten vapaaehtoinen suostumus. Ohjeet kaikkien ruokien ja juomien kirjaamiseen 3 päivän ruokalokiin (torstai, perjantai ja lauantai ennen lisäravinteen aloittamista). Väestö- ja koulutushistoriat hankitaan kyselylomakkeilla. Pituus, paino ja kehon rasvaprosentti mitataan (seca Medical Body Composition Analyzer 514 biosähköinen impedanssiasteikko, Hannover, MD). VO2max arvioidaan käyttämällä Brucen juoksumattoprotokollaa, ja hapenkulutusta ja ventilaatiota seurataan jatkuvasti Cosmed CPET -aineenvaihduntajärjestelmällä.

Täydennystä edeltävä laboratoriokäynti: Tutkimuksen ensimmäisenä päivänä osallistujat (kävelejät ja juoksijat) palaavat laboratorioon paastotilassa (vähintään 9 tuntia ilman muuta ruokaa tai juomaa kuin vettä). Verinäytteet otetaan kyynärpäälaskimosta koehenkilöiden istuessa. Osallistujille (kävelijöille) annetaan 2 viikon tarjonta flavonoidi- tai plasebokapseleita, jotka on järjestetty lisäravintoloihin noudattamisen helpottamiseksi. Juoksijat saavat 2 viikon ajan flavonoidikapseleita. Tutkimusryhmä tarkastelee ja kerää kolmen päivän ruokahistorian ja analysoi ravintoaine- ja flavonoidipitoisuuden käyttämällä Food Processor v. 11.1 -ohjelmaa (ESHA Research, Salem, OR). Jokaisesta ruoasta/juomasta arvioidaan makro- ja hivenravinteet, flavonoidien kokonaismäärä ja kunkin kuuden flavonoidialaluokan välisummat sekä kaksi yksittäistä flavonoidiarvoa (kversetiini, EGCG). Kahden päivän aikana ennen käyntiä nro 3 laboratoriossa ja koko päivän aikana, joka sisältää käynnin nro 3, osallistujia pyydetään välttämään sukraloosia (Splenda) ja mannitolia sisältäviä ruokia ja juomia. Sukraloosin ja mannitolin välttämiseksi osallistujia pyydetään tarkistamaan ruokavalion virvoitusjuomien, jogurtin ja muiden maitotuotteiden, välipalojen, purukumin ja karamellien, vähäsokeristen tuotteiden, hammastahnan ja suuveden ainesosaluettelot.

Täydennyksen jälkeiset laboratoriokäynnit:

Kahden viikon lisäravintojakson jälkeen osallistujat (kävelejät ja juoksijat) palaavat laboratorioon yön yli paastotilassa (samana viikonpäivänä kuin ennen täydentämistä edeltävä laboratoriokäynti).

Osallistujat kääntävät lisätarjottimen varmistaakseen, että kapseleita on nielty. Verinäyte otetaan. Osallistujat (kävelejät) satunnaistetaan joko istumaan 45 minuuttia laboratoriossa tai kävelemään reippaasti 45 minuuttia 5 %:n juoksumatolla 60 % VO2maxilla (aineenvaihdunnan seurannassa ensimmäisten 5 minuutin aikana ja sitten klo 15, 30, ja 45 minuuttia) käyttämällä Cosmed CPET -aineenvaihduntakärryä. Juoksijat juoksevat 70 % VO2max:lla luokittelemattomalla juoksumatolla 2,5 tunnin ajan ja aineenvaihduntamittaukset tehdään 30 minuutin välein. Vettä annetaan kaikille osallistujille ad libitum, eikä muita juomia tai ruokia ole sallittu. Juuri ennen istuma- tai kävelylaboratoriotunteja ja 2,5 tunnin juoksua osallistujat nauttivat 150 ml:n liuosta, joka sisältää 1 g sakkaroosia, 1 g laktuloosia, 0,5 g L-ramnoosia, 1 g erytritolia, 1 g sukraloosia, 0,5 g mannitolia. .

Virtsaa kerätään muoviastioihin 24 tunnin ajan kahdessa erillisessä fraktiossa: 0-5 h ja 5-24 h. Ensimmäisen 5 tunnin virtsankeräyksen aikana ei saa syödä tai juoda (paitsi vesijohtovettä). Osallistujat palaavat seuraavana aamuna yön yli paastoneina, antavat verinäytteitä ja luovuttavat virtsanäytteet.

Virtsan keräysohjeet koehenkilöille:

• Sinun tulee kerätä jokainen pisara virtsaa jokaisen keräysjakson aikana (5 tuntia harjoitusottelun alusta ja sitten toinen keräys seuraavaan aamuun tai 5-24 tuntia harjoituksen alkamisesta). Ei ole väliä kuinka paljon tai vähän virtsaa erittyy joka kerta, kunhan jokainen pisara kerätään.
• Kerää jokainen pisara virtsaa päivän ja yön aikana kahteen keräyspulloon (0-5 tuntia, 5-24 tuntia, alkaen laboratorioharjoitustestin alkamisesta). Säilytä pullot jääkaapissa. Muista kerätä kaikki suoliston liikkeiden aikana kulkeutunut virtsa.
• Viimeistele keräämällä ensimmäinen virtsa seuraavana aamuna ja lisäämällä se keräyspulloon. Ota molemmat virtsankeräyspullot mukaasi laboratorioon (eli harjoituksen jälkeisenä aamuna, jolloin annat lopullisen verinäytteen).

Flavonoidilisä: Reoxcyn Innovation Group LLC (Salt Lake City, UT) valmistaa lisäravinteen ja lumekapselit. (KATSO lisätiedot liitetiedostosta). Ainesosat ovat samat kuin yhteisötutkimuksessa testatut: C-vitamiini (askorbyylipalmitaattina) (Green Wave Ingredients, La Mirada, CA), villimustikan hedelmäuute (antosyaanien kokonaismäärä 25 %) (FutureCeuticals, Momence, IL), vihreä tee lehtiuute (50 % EGCG) (Watson Industries, Inc., Pomona, CA), kversetiiniaglykoni (Novel Ingredients, East Hanover, NJ), kofeiini (Creative Compounds, Scott City, MO) ja omega-3-rasvahappoja (Novotech Nutraceuticals) , Ventura, CA). Kapselin täytteen ainesosia ja apuaineita ovat Nu-Flow 70R (riisinkuorista), tapioka maniokkijuuresta, luonnollinen bambusilika, vaahtokarkkijuuri. Placebo-kapselit sisältävät vain täyteaineosia ja apuaineita (ilman vaikuttavia aineita). Kävelijöiden päivittäinen annos on 2 flavonoidi- tai 2 lumekapselia. Kaksi flavonoidikapselia antaa 329 mg flavonoideja (amerikkalaisen aikuisen keskiarvo on tutkimuksesta riippuen 240 mg päivässä). Juoksijoiden päiväannos on 4 flavonoidikapselia (658 mg flavonoideja). Osallistujille annetaan 2 viikoksi joko flavonoidi- tai lumekapselit sekä ohjeet päivittäiseen nauttimiseen jaetuissa annoksissa (1 aamiaisella ja 1 lounaalla tai kaksinkertainen määrä juoksijoille). Tutkimukseen osallistujat saavat lisätä yhden ylimääräisen kapselin päivässä kulutuksen lisäämiseksi, jos yksi tai kaksi lisäravinteen vuorokautta unohtuvat. Tutkimuksen osallistujat nauttivat 2 kapselia (4 kapselia juoksijoille) heti verinäytteen antamisen jälkeen kävely-/lepo- (tai juoksu) laboratorioistunnon aikana.

Dr. Mary Ann Lilan (NCSU, Plants for Human Health Institute, NCRC) TESTAAA LISÄKAPSELIN flavonoidipitoisuuden ennen ja jälkeen tutkimukset.

Kohdennettu aineenvaihduntaanalyysi:

Suolistosta peräisin olevat fenoliset metaboliitit puhdistetaan plasmasta SPE:llä käyttämällä automatisoitua alustaa ja talon sisäistä 96-kuoppaista SPE-protokollaa (60 mg, 3 ml; Phenomenex) 100 µl:n kudoksen uuttamiseksi. Kaikki analyytit on aiemmin optimoitu uuttamistehokkuutta varten 80-100 %:n talteenotolla, kun CV≤10 %. Uutteet erotetaan ja kvantifioidaan nestekromatografialla tandem-MS/MS:llä käyttäen aiemmin julkaistuja ja validoituja menetelmiä. Lyhyesti sanottuna HPLC-ESI-MS/MS-analyysi suoritetaan käyttämällä SCIEX UPLC -kytkettyä 6500 + MS/MS-QTRAP™ -laitetta, joka on varustettu sähkösumutusionisaatiolla (ESI) Turbo-V-lähteellä (veri- ja ulostemetaboliitit), ja näytteet injektoidaan Kinetex PFP -kolonni ja liikkuvan faasin gradientti koostuivat 0,1 % muurahaishaposta (v/v) vedessä (A) ja 0,1 % muurahaishaposta (v/v) asetonitriilissä (B) ja 24 minuutin erotusajasta. Kohdennettu metaboliittianalyysiprotokolla on optimoitu ja validoitu havaitsemaan yli 200 analyyttiä, jotka on kvantifioitu suhteessa autenttisiin kaupallisiin ja synteettisiin standardeihin kirjastossamme. Oletetut II-vaiheen konjugaatit on tunnistettu käyttämällä fragmentaatioprofilointia, joka sisältää 3-5 ainutlaatuista siirtymää. Tämä sisältää yli 1000 siirtymän skannauksen, jotka vastaavat sulfaatti-, glukuronidi-, metyyli- ja glysiinikonjugaatteja. Tämä SMRM-metodologia on aiemmin optimoitu Rexocyn-hoitoa varten ja tarjoaa huomattavasti herkemmän menetelmän kuin perinteiset MRM-skannausmenetelmät, koska se mahdollistaa suuremman määrän siirtymiä aikayksikköä kohden sen lisäksi, että se mahdollistaa ainutlaatuisen yhdisteriippuvaisen. kullekin analyytille käytettävät parametrit, mikä johtaa parantuneeseen herkkyyteen. Lopuksi metaboliitit vahvistetaan retentioajan (käyttämällä aitoja ja syntetisoituja standardeja mahdollisuuksien mukaan) ja kolmen tai useamman prekursorista tuotteeksi tapahtuvan ionisiirtymän perusteella. Seitsemän pisteen matriisisovitettuja kalibrointikäyriä, jotka vaihtelevat välillä 0–10 μM, käytetään flavonoidien analysointiin tai 0–50 μM fenolisten metaboliittien analysointiin.

Suoliston läpäisevyys, virtsan laktuloosi/ramnoosi:

Virtsan sokeripitoisuudet määritetään korkeapainenestekromatografialla. Sakkaroosia 0–5 tunnin virtsassa, laktuloosin/ramnoosin (L/R) suhdetta 0–5 tunnin virtsassa ja sukraloosi/erytritoli-suhdetta (S/E) 5–24 tunnin virtsassa käytetään maha-pohjukaissuolen indikaattoreina. , ohuen ja paksusuolen läpäisevyyttä, vastaavasti.