Vitamine A et réponse vaccinale mère-nourrisson contre la grippe

La morbidité grippale affecte l'ensemble de la population et a un impact énorme sur le fardeau économique et le système de soins de santé, provoquant en particulier des maladies graves chez les jeunes enfants de 0 à 6 mois. Des études récentes montrent des taux élevés de grippe et d'hospitalisation chez les nourrissons de ce groupe d'âge dans les pays industrialisés (Chiu et al., 2002; Poehling et al., 2006) et la mortalité infantile liée à la grippe est la plus élevée chez les jeunes nourrissons avant l'âge de 6 mois ( Bhat et al., 2005). Malheureusement, le vaccin antigrippal inactivé n'est pas recommandé pour ce groupe d'âge, mais les femmes enceintes peuvent être vaccinées au cours du 2e au 3e trimestre. Ainsi la stratégie d'immunisation passive (par la mère) des nourrissons est le moyen efficace de combattre cette infection chez les jeunes nourrissons. Cette approche est adoptée aux États-Unis depuis 1997 et recommandée par l'OMS depuis 2005.

Les voies respiratoires supérieures sont la porte d'entrée du virus et le principal site de réplication (Gluck et al., 1994; Muszkat et al., 2000). Ainsi, l'importance de la présence d'anticorps muqueux efficaces au site d'entrée du virus est essentielle pour neutraliser le virus et prévenir l'infection (Meitin et al., 1994). L'IgA sécrétoire (IgAs) est le principal anticorps muqueux, représentant environ 70 % de la production totale d'anticorps du corps (Brandtzaeg, 1994). Il a été démontré que les sIgA médient l'immunité nasale anti-grippale de la muqueuse (Renegar & Small, 1991) et indiquent donc l'importance des stratégies de vaccination qui déclenchent la production d'anticorps spécifiques au niveau des surfaces muqueuses ainsi que l'importance des nutriments alimentaires pour déclencher la libération de neuropeptides muqueux. nécessaire au maintien du système immunitaire des muqueuses (Renegar et al., 2001). Un certain nombre d'essais cliniques ont examiné l'effet de la supplémentation en vitamine A chez l'homme sur les indicateurs de l'immunité muqueuse. La supplémentation des femmes enceintes infectées par le virus de l'immunodéficience humaine est associée à une amélioration de la perméabilité intestinale chez leurs nourrissons à 14 semaines, telle que mesurée par le test d'excrétion urinaire de lactulose/mannitol (L/M) (Filteau et al., 1999). Alors que la supplémentation en vitamine A pendant la grossesse (Semba et al., 1999) ou au début de la période post-partum (Filteau et al., 2001) ne montre aucun effet sur le total des sIgA dans le lait maternel, il a plutôt été démontré que la vitamine A dans le lait inhibe la croissance de les virus enveloppés et non enveloppés (Clarke & May, 2000). Cependant, le niveau total d'IgAs chez les enfants ayant suffisamment de vitamine A a été détecté significativement plus élevé que chez les enfants carencés en vitamine A (Lin et al., 2007). Dans le modèle animal, la supplémentation en vitamine A augmente les cellules contenant des sIgA totales et spécifiques à l'antigène dans la muqueuse, ce qui améliore le taux de survie (Nikawa et al., 2001) Pendant la petite enfance, le lait maternel est la source prédominante de vitamine A et À ce jour, aucune étude n'a étudié l'effet de la supplémentation prénatale en vitamine A et de la vaccination sur les réponses en IgA muqueuses spécifiques du vaccin chez la progéniture. Bien que les IgA maternelles ne soient pas transférées par voie transplacentaire aux nourrissons, une augmentation de la vitamine A et des sIgA spécifiques du vaccin dans le lait maternel à la suite d'une supplémentation maternelle en vitamine A peut améliorer les réponses nasales des sIgA du nourrisson qui, à leur tour, peuvent fournir une meilleure protection passive chez les jeunes nourrissons.

Dans notre étude récente (Mother'SGift Project, financé par Thrasher Research Fund), nous avons détecté que la vaccination maternelle contre la grippe peut réduire considérablement la maladie grippale chez les jeunes nourrissons jusqu'à l'âge de 6 mois au Bangladesh (Zaman et al., 2008). D'autre part, la prévalence de la carence en vitamine A chez les femmes enceintes au Bangladesh ainsi que dans d'autres pays en développement est très élevée. Plus de la moitié des femmes enceintes au Bangladesh consomment moins de vitamine A que l'apport nutritionnel recommandé et ont un faible statut en vitamine A (rétinol sérique <1•05 μmol/L) avec environ un cinquième d'entre elles classées comme carencées (rétinol sérique <0 •70 μmol/L) (Ahmed et al., 2003 ; Lee et al., 2008). Néanmoins, il existe des preuves scientifiques concluantes suggérant que plusieurs aspects de l'immunité innée et adaptative sont compromis par une carence clinique et subclinique en vitamine A (Stephensen, 2001). Dans une autre étude, nous avons observé une association positive significative entre la blastogénèse lymphocytaire spécifique du vaccin viral primaire contre la fièvre jaune/réponses en anticorps et les réserves corporelles de vitamine A (Ahmad et al., 2008). Ainsi, compte tenu des rôles immunorégulateurs potentiels de la vitamine A, il est intéressant d'étudier si la supplémentation maternelle en vitamine A associée à la vaccination antigrippale pourrait être utilisée comme stratégie d'intervention de santé publique pour combattre simultanément l'infection grippale et la carence en vitamine A chez les mères et les jeunes. nourrissons dans les pays en développement.

Conception et méthodes de recherche :

Site d'étude : Cette étude sera réalisée à l'ICDDR,B ; Dhaka, Bangladesh. Trois cliniques de maternité urbaines situées dans le quartier Mirpur de la ville de Dhaka seront sélectionnées pour approcher les mères qui visitent la clinique au cours du premier trimestre et qui sont la résidence de la communauté voisine.

Sujet de l'étude : Le critère d'inclusion est d'inscrire les mères au début du deuxième trimestre (c'est-à-dire environ 12 semaines de gestation), disposée à rester à Dhaka pendant la grossesse et disposée à être admise à la clinique lors de l'accouchement. L'âge gestationnel sera déterminé par la LMP autodéclarée, qui est probablement sous-estimée dans la plupart des cas. Une variation de deux semaines sera acceptable dans cette étude proposée. Les critères d'exclusion sont : antécédents de maladie systémique, grossesses compliquées antérieures ou accouchement prématuré, avortement, anomalie congénitale et hypersensibilité au vaccin antigrippal ou réception du vaccin.

Aperçu de la conception expérimentale : Il s'agit d'un essai contrôlé par placebo, à double insu et randomisé. La conception globale de l'étude est décrite dans la figure 1, le calendrier et la durée hypothétique des activités liées au protocole proposé sont illustrés dans le tableau 1. Pour permettre la planification de la collecte, du stockage et de l'analyse des échantillons avec le nombre d'agents de terrain embauchés et d'installations de laboratoire qui seront disponibles, nous prévoyons d'inscrire environ cinq femmes enceintes par semaine dans cette étude au cours des trois premiers mois de l'étude ( Tableau 1). Un consentement écrit éclairé sera obtenu des mères. Soixante-six femmes enceintes seront randomisées pour recevoir chaque semaine 10 000 UI de vitamine A ou des gélules de placebo (huile de maïs) et du sang sera prélevé pour une évaluation de la vitamine A sérique. La randomisation sera stratifiée par trois cliniques en utilisant une conception en blocs équilibrés. Cette supplémentation hebdomadaire se poursuivra jusqu'à 6 mois après l'accouchement. La dose de supplémentation en vitamine A à utiliser dans cette étude est similaire aux doses utilisées chaque semaine chez les femmes enceintes dans d'autres études (Semba et al., 1999 ; Cox et al., 2006) et s'est avérée sûre. Les agents de terrain livreront les suppléments aux mères, en personne et observeront directement leur consommation. À 26-28 semaines de gestation, toutes les mères recevront un vaccin antigrippal trivalent inactivé (GlaxoSmithKline; Dresde, Allemagne). Les souches standard inactivées de la grippe trivalente A/H3N2, A/H1N1 et B, telles que recommandées par l'OMS pour l'hémisphère Nord, seront obtenues auprès de sources commerciales pour ce projet. Le médecin de l'étude administrera le vaccin par voie intramusculaire. À l'accouchement, le sang de cordon et le colostrum seront prélevés pour l'évaluation des IgG et des sIgA spécifiques à la grippe, respectivement, ainsi que la concentration en vitamine A. Le poids à la naissance et la taille des nouveau-nés seront également enregistrés. À 6 mois, le lait maternel sera prélevé pour l'évaluation des sIgA spécifiques de la vitamine A et du virus de la grippe et du sang veineux (2-3 ml) de nourrissons (âgés de 6 mois) sera prélevé pour l'évaluation des IgG spécifiques de la vitamine A et du virus de la grippe. comme les lavages nasaux des nourrissons pour l'évaluation des sIgA spécifiques au virus de la grippe. Notre étude proposée n'entravera pas les soins prénatals existants pour les mères, tels que la supplémentation en folate/fer ou le programme de vaccination infantile existant au Bangladesh.

Randomisation : Chaque mère recevra un numéro d'identification unique généré aléatoirement, qui indiquera le groupe d'étude auquel elle est affectée. Le même identifiant sera étiqueté sur le flacon contenant 60 gélules. Les agents de terrain utiliseront ces capsules pour la supplémentation hebdomadaire en s'assurant que le numéro d'identification de la mère et celui du biberon sont identiques. Un tiers (laboratoires ACME, Dhaka Bangladesh) préparera et fournira de la vitamine A ou une capsule de placebo dans des bouteilles, étiquetées avec des numéros d'identification à partir d'une liste de numéros. Le personnel responsable le gardera confidentiel jusqu'à la fin de l'étude

Prélèvement d'échantillon : Le sang périphérique de la mère, le sang de cordon, le colostrum, le lait maternel, le sang périphérique et les lavages nasaux des nourrissons seront prélevés comme décrit à la figure 1. Les sécrétions nasales seront obtenues en introduisant des mèches (applicateurs en coton) dans la narine et en les faisant tourner doucement pendant 90 secondes comme décrit précédemment (Wright et al., 1996). Les mèches seront extraites dans 1 ml de PBS, centrifugées et les surnageants seront collectés. Tous les échantillons seront congelés jusqu'à ce qu'ils soient testés simultanément.

Évaluation sérologique : Nous avons choisi d'étudier les réponses immunitaires humorales à un seul antigène de la grippe, car le but de cette étude proposée est d'évaluer l'effet de la supplémentation maternelle en vitamine A sur les niveaux d'anticorps passifs des nourrissons. Il est donc prudent d'étudier les réponses immunitaires. à un antigène. Les paramètres suivants de l'immunité humorale spécifique à la vitamine A et à la grippe A seront testés.

Évaluation de la vitamine A : la teneur en vitamine A dans le plasma, le sérum, le colostrum et le lait maternel sera mesurée par la méthode HPLC standard en place dans le laboratoire de biochimie nutritionnelle du LSD.

Test d'inhibition de l'hémagglutination [HAI] : les titres d'anticorps HAI seront mesurés par un test de microtitrage standard (Admon et al., 1997). 12 unités HA de la souche vaccinale Influenza A sélectionnée seront ajoutées à des sérums prétraités dilués avec une enzyme destructrice des récepteurs (RDE, Sigma MO) et une inactivation par la chaleur. Après incubation, des érythrocytes de poulet lavés seront ajoutés jusqu'à ce qu'une sédimentation s'ensuive dans les puits de contrôle. Le titre HAI est l'inverse de la dilution la plus élevée du sérum présentant une HAI complète.

ELISA IgG et sIgA spécifiques à la grippe : virus de la grippe A IgG spécifique dans le sérum/plasma et sIgA dans le colostrum, le lait maternel et l'écouvillon nasal du nourrisson seront analysés par ELISA comme décrit précédemment avec des modifications mineures (Bruhl et al., 2000 ; Greenbaum et al ., 2004). En bref, les immunoplaques seront revêtues d'antigène grippal purifié obtenu auprès du NIBSC à 2 ug/mL pendant une nuit à 40 °C. puis des échantillons dilués seront ajoutés pour une autre incubation d'une nuit. Des anti-IgG humaines conjuguées à la HRP (BD-Pharmingen, CA) ou des anti-sIgA de souris, marquées à la peroxydase (Alpco Diagnostics, NH) seront utilisées comme conjugués. Pour construire la courbe standard, une dilution en série d'échantillons regroupés attribués avec une valeur arbitraire sera introduite dans chaque plaque ELISA. Le sIgA total dans le colostrum, le lait maternel et l'écouvillon nasal du nourrisson sera également déterminé par le kit EIA (Alpco Diagnostics) pour ajuster la réponse sIgA spécifique de la grippe A par rapport à la sécrétion globale de sIgA.